Le sujet proposé a un caractère pluridisciplinaire

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Mercredi 22 octobre 2008
Microbiologie et technologies d’analyses
Durée : 1 h 30
Qualité microbiologique des eaux de boisson
Cinq millions de personnes meurent chaque année dans le monde du fait de la mauvaise qualité de l’eau !
L’assurance de la qualité et de l’hygiène de l’eau sont des exigences prioritaires de santé publique.
L’eau distribuée doit être conforme aux valeurs limites réglementaires fixées : des contrôles
microbiologiques et chimiques réguliers sont réalisés par les DDASS (Directions Départementales des
Affaires Sanitaires et Sociales) pour vérifier cette conformité.
Les critères microbiologiques en vigueur sont donnés dans le document 1.
1. Dénombrement des micro-organismes revivifiables à 22°C et 37°C
1.1. Quel est l’intérêt de ce dénombrement ?
1.2. Donner les principales étapes de ce contrôle.
2. Dénombrement des coliformes totaux et des coliformes thermotolérants
2.1. Définir le terme « coliforme » et l’expression « coliforme thermotolérant ».
2.2. Ce dénombrement fait appel à la technique de filtration. Pourquoi ? Donner les
légendes du schéma du système de filtration (document 2).
2.3. Quelle est la taille des pores des membranes utilisées ?
2.4. Le milieu utilisé est la gélose lactosée au tergitol 7 et au TTC, dont la composition
figure dans le document 3.
2.4.1. Quels sont les agents sélectifs présents dans ce milieu ?
2.4.2. Donner l’aspect des colonies de coliformes sur ce milieu (justifier).
2.5. Un dénombrement de coliformes est réalisé sur 20 échantillons. 1 seul échantillon
présente 5 coliformes par mL. Conclure.
3. Dénombrement des entérocoques
Le dénombrement est effectué par culture sur milieu de Slanetz et Bartley (milieu présomptif)
après filtration sur membrane. Les colonies suspectes sont repiquées sur une gélose biliée à
l’esculine pour confirmation.
3.1. Donner les principaux caractères des entérocoques, et justifier l’emploi du milieu
Slanetz et Bartley, dont la composition est donnée dans le document 3.
3.2. Quel est le volume filtré dans ce cas ?
3.3. Les colonies d’entérocoques obtenues sur gélose biliée à l’esculine sont noires.
Pourquoi ?

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3.4. Lors d’une analyse d’une eau, 15 colonies rouges sont obtenues sur milieu de Slanetz
et Bartley. Cinq d’entre-elles sont repiquées sur gélose biliée à l’esculine, et quatre sont
effectivement identifiées comme des entérocoques après 24 heures d’incubation à 37°C.
Donner le résultat final et conclure.
4. Dénombrement des spores de bactéries anaérobies sulfito-réductrices
4.1. Par quel genre bactérien les spores recherchées sont-elles produites ?
4.2. Quel traitement l’échantillon doit-il subir ? Justifier.
4.3. D’après la composition du milieu TSN, donnée dans le document 3, comment la
réduction des sulfites est-elle mise en évidence ?
5. Recherche des bactériophages fécaux
5.1. Représenter schématiquement un bactériophage T-pair d’E. coli.
5.2. Quel est la signification de la présence de bactériophages d’ E. coli dans une eau ne
contenant aucune bactérie revivifiable de cette espèce ?
6. Les entérovirus
6.1. Indiquer les 7 étapes du cycle infectieux des entérovirus (famille des Picornaviridae)
figurant dans le document 4.
6.2. Qu’est-ce qu’un ARN(+) ?
6.3. Par quel élément structural cet ARN est-il protégé ? D’après le document 4, préciser
le type de symétrie de cet élément.
6.4. Pourquoi les entérovirus sont-ils particulièrement résistants aux détergents ?

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Durée : 1 h 30
Document 1
Critères microbiologiques des eaux potables
Paramètres
Valeurs limites
Coliformes
0 / 100 ml dans 95% des échantillons prélevés
Coliformes thermotolérants
0 / 100 ml
Entérocoques
0 / 100 ml
Spores de bactéries anaérobies sulfito-réductrices
< 1 spore / 20 ml
Micro-organismes pathogènes :
- Salmonelles
- Staphylocoques pathogènes
- Bactériophages fécaux
- Entérovirus
0 / 5 000 ml
0 / 100 ml
0 / 50 ml
0 / 10 000 ml
Document 2
Appareil à filtration

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Durée : 1 h 30
Document 3
Composition de trois milieux de culture
Composition (g/L)
Tergitol 7-TTC
Slanetz et Bartley
TSN
Peptone
Tryptone
Extrait de viande
Extrait de levure
10
5
6
20
15
10
Glucose
Lactose
20
2
Tergitol 7
Azide de sodium
Sulfate de néomycine
Sulfate de polymyxine
0,01
0,4
0,05
0,02
TTC
Sulfite de sodium
0,025
0,1
1
Bleu de bromothymol
Citrate de fer III ammoniacal
0,05
0,5
Hydrogénophosphate de sodium
4
Agar
13
10
12
Eau (qsp)
1 dm3
1 dm3
1 dm3
pH final
7,2
7.2
7.2
Document 4
Cycle infectieux de l’entérovirus