М PetrifilmMC

Guide d’interprétation
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Plaque de numération des bactéries aérobies
Petrifilm
MC
Ce guide permet de se familiariser avec l’interprétation des plaques de numération des
bactéries aérobies PetrifilmMC 3MMC. Pour obtenir de plus amples renseignements,
communiquer avec son représentant des ventes de la Division des produits de microbiologie de 3M.
La plaque de numération des bactéries aérobies Petrifilm est un support de culture prêt à l'emploi qui contient un
agent gélifiant soluble dans l’eau froide, des nutriments de Méthodes de référence et un colorant indicateur pour faciliter
la numération des colonies. Les plaques de numération des bactéries aérobies Petrifilm servent à dénombrer les
bactéries aérobies.
Numération des bactéries aérobies : 152
Le colorant indicateur rouge facilite l'identification
des colonies. Compter toutes les colonies rouges
quelque soit leur taille ou l'intensité de couleur.
1
Plaquesdenumération des bactéries aérobies PetrifilmMC 3MMC
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3
Numération : 0
Numération : 16
La plaque de numération des bactéries aérobies Petrifilm
s’interprète facilement. La figure 2 montre une plaque de
numération des bactéries aérobies Petrifilm sans colonies.
La figure 3 montre une plaque de numération des bactéries
aérobies Petrifilm présentant quelques colonies bactériennes.
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5
Numération : 143
Numération estimée : 560
La plage de numération optimale sur une plaque de
numération des bactéries aérobies Petrifilm est de 25 à 250
colonies.
Quand le nombre de colonies dépasse 250, comme le montre
la figure 5, le nombre de colonies peut être estimé.
Pour cela, déterminer la moyenne de colonies dans un centimètre
carré et multiplier ce nombre par 20 de manière à obtenir le nombre
total de colonies sur la plaque. La zone de croissance d’une
plaque de numération des bactéries aérobies Petrifilm couvre
environ 20 cm2.
On peut confirmer les résultats « trop nombreux pour être dénombrés »
(TNTC ) en procédant à une autre dilution de l'échantillon.
6
Numération : TNTC
(numération estimée : 103)
La figure 6 présente une plaque de numération des bactéries
aérobies Petrifilm dont le nombre de colonies est trop élevé
pour être dénombré (TNTC).
7
Numération : TNTC
Lorsque les colonies sont en nombre trop élevé, toute la
superficie inoculée peut virer au rose (figure 7). On ne peut
localiser des colonies que sur le pourtour du milieu de
croissance. Consigner comme un résultat TNTC
(qu’on ne peut dénombrer).
8
Numération : TNTC
(numération estimée : 103)
Dans certains cas, les colonies semblent se répartir de
manière inégale (figure 8). Il s’agit également d’un résultat
TNTC (qu’on ne peut dénombrer).
(numération estimée : 105)
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Numération : TNTC
(numération estimée : 107)
La figure 9 présente une plaque de numération des bactéries
aérobies Petrifilm dont les colonies semblent à première vue
dénombrables. En réalité, si l’on observe attentivement le
contour de la zone de croissance, on remarque une concentration
élevée de colonies. Inscrire le résultat comme étant TNTC
( qu’on ne peut dénombrer).
Liquéfaction du gel et particules alimentaires
Numération estimée : 160
Quelques bactéries liquéfient le gel contenu dans
la plaque de numération des bactéries aérobies Petrifilm
(figure 10). Dans ce cas, établir le nombre moyen
de colonies présentes dans quelques cases non touchées
par la liquéfaction, puis multiplier ce nombre par 20
pour obtenir une estimation. Ne pas compter
les points rouges situés dans les zones liquéfiées.
10
Numération : 83
Les points rouges permettent de distinguer les colonies
présentes sur les plaques de numération des bactéries
aérobies Petrifilm des particules alimentaires de formes
opaques et irrégulières (voir les cercles 1 et 2).
1
2
11
3Plaques de numération des bactéries aérobies PetrifilmMC
Aide-mémoire
Pour obtenir des renseignements détaillés sur les mises en garde, L’EXONÉRATION DES GARANTIES, LES LIMITES DE RECOURS,
LA LIMITE DE RESPONSABILITÉS DE 3M, L’ENTREPOSAGE, LA MISE AU REBUT ET LES DIRECTIVES D’UTILISATION DU PRODUIT,
consulter la notice d’accompagnement.
Entreposage
Petrifilm
Petrifilm
1
Conserver les emballages non ouverts
à une température inférieure à 8 °C
(46 °F). Respectez la date de péremption indiquée sur l’emballage. Dans les
régions où le degré d'humidité est
élevé, il est préférable de laisser les
pochettes atteindre la température
ambiante avant de les ouvrir.
2
Pour sceller un emballage ouvert,
replier l’extrémité et fermer avec
un ruban adhésif.
Petrifilm
3
Conserver l’emballage refermé à une
température de 25 °C (77 °F) et à
une humidité relative de 50 %. Ne
pas réfrigérer un emballage ouvert.
Utiliser les plaques Petrifilm dans le
mois qui suit l’ouverture de l’emballage.
6
Mélanger ou homogénéiser l’échantillon
selon la méthode en vigueur.
Préparation de l’échantillon
4
Préparer une dilution de 1:10 ou plus
de l’échantillon alimentaire. Peser ou
pipetter le produit alimentaire dans un
contenant approprié comme un sac
adapté au Stomacher, une fiole de
dilution, un sac Whirl-Pak® ou dans
tout autre contenant stérile.
5
Poser la plaque Petrifilm sur une
surface plane. Soulever la pellicule
supérieure.
Régler le pH de l’échantillon dilué
entre 6,6 et 7,2 :
pour les produits acides, utiliser 1 N NaOH;
pour les produits alcalins, utiliser 1 N HCl.
Ne pas utiliser de solutions tampons contenant
du citrate, du bisulfite ou du thiosulfate de
sodium car elles peuvent inhiber la croissance.
Inoculation
7
Ajouter la quantité appropriée de l’un des
diluants stériles suivants : solution tampon
phosphate de Butterfield (tampon
phosphate IDF, KH2PO4 à 0,0425 g/L,
ajuster le pH à7,2), 0,1 % d’eau peptonée,
peptone sel (méthode ISO 6887),
eau peptonée tamponnée (méthode ISO
6579), solution saline (de 0,85 à 0,90 %),
eau distillée ou bouillon de culture letheen
sans bisulfite.
8
En maintenant la pipette
perpendiculaire à la plaque Petrifilm,
déposer 1 mL d’échantillon au centre
de la pellicule inférieure.
9
Déposer la pellicule supérieure en
. la
laissant tomber. Ne pas la déposer en
la déroulant.
Suite au verso
Côté plat
Côté strié
10
Poser un étaleur, côté strié vers le
bas, sur la pellicule supérieure de
l’inoculum.
11
Appliquer une légère pression sur
l’étaleur afin d’étaler l’inoculum sur la
zone circulaire. Ne pas tourner ni faire
glisser l’étaleur.
Incubation
12
Soulever l’étaleur. Attendre au moins
une minute pour que le gel se solidifie.
15
Les colonies peuvent être isolées
pour identification ultérieure. Soulever
la pellicule supérieure et retirer la
colonie du gel.
Interprétation
<70F
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Incuber les plaques côté transparent
vers le haut en piles de 20 plaques et
moins. Au besoin, humidifier l’incubateur
afin de réduire au minimum la perte
d’humidité.
14
Les plaques Petrifilm peuvent être
dénombrées sur un compteur de
colonies de type courant ou sur toute
autre loupe à éclairage. Consulter le
Guide d’interprétation lors de la lecture
des résultats.
Les durées et températures d'incubation
varient selon les méthodes. Voici la liste
des méthodes approuvées les plus
courantes:
• Méthode officielle AOAC® 986.33 et 989.10
(Lait et produits laitiers)
Incuber à 32 oC ± 1 oC pendant 48 h ± 3 h
• Méthode oficielle AOAC® 990.12
Incuber à 35 oC ± 1 oC pendant 48 h ± 3 h
• Méthode de validation AFNOR
3M 01/1-09/89
Incuber à 30 oC ± 1 oC pendant 72 h ± 3 h
Renseignements supplémentaires
• Questions? Pour joindre l’assistance technique aux É.-U., composer
le 1 800 328-6553. Au Canada, composer le 1 800 3M-HELPS
.
(1 800 364-3577).
• Pour commander des plaques Petrifilm au Canada, composer le 1 800 410-6880.
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Produits de microbiologie
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Petrifilm est une marque de commerce de 3M, utilisée sous licence au Canada.
Whirl-Pak est une marque déposée de Nasco.
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1 800 563-2921
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