Contrôle d`enzymologie n°1

Contrôle enzymologie
1. Allostérie: (6 points)
1.1. Quelles sont les propriétés générales d'une enzyme allostérique ?
1.2. Qu'appelle-t-on formes T et R d'une enzyme ? Décrire l'influence d'effecteurs sur l'équilibre T <=> R.
L'activité de l'enzyme malique (exprimée en nmol/min de produit apparu) est mesurée à 2 pH différents
en présence de concentration variable du substrat, le malate :
[S] mmo/L
0,3
0,5
Vi à pH 6,5
0,5
0,63 0,77 0,91 0,97 0,98 0,99 0,99
Vi à pH 8,5
1
3
10
15
20
25
0,004 0,01 0,03 0,23 0,77 0,88 0,93 0,95
1.3. Tracer sommairement les courbes V = f(S) à ces 2 pH. Commenter les résultats obtenus et les
modifications des propriétés de l'enzyme malique selon le pH.
2. Dialyse à l'équilibre: (8 points)
La catalyse enzymatique est toujours précédée de la formation d'un complexe enzyme-substrat (ou plus
généralement enzyme-ligand). La mise en évidence de ce complexe est difficile, cependant il est
possible d'étudier certaines de ses propriétés en utilisant la technique dite de dialyse à l'équilibre
2.1. Décrire la technique de dialyse à l'équilibre.
2.2. Plusieurs mesures à l'équilibre ont été réalisées avec une enzyme possédant n récepteurs
indépendants R et son ligand L. Cette enzyme est placée dans le compartiment "a" à la concentration de
10 µmol/L et 5 essais ont été réalisés avec des concentrations variables de ligand.
[L] dans a
[L] dans b
Essai 1
0,0000292
0,000022
Essai 2
0,0000454
0,000035
Essai 3
0,0000669
0,000053
Essai 4
0,0000876
0,000071
Essai 5
0,0001145
0,000095
La relation de Scatchard est : [RL] / [L] = Ka n [E] t- Ka [RL] Expliquer clairement comment cette relation
permet de déterminer la constante d'association (Ka) et le nombre (n) de sites récepteurs par molécule
de protéine.
Déterminer la constante d'association (Ka) entre les récepteurs et le ligand et le nombre (n) de sites
récepteurs par molécule d'enzyme.
3. Cinétique à 2 substrats (6 points)
3.1. L'alcool deshydrogénase catalyse une réaction d'oxydoréduction impliquant le couple
éthanol/éthanol et le couple NAD+ / NADH,H+. Écrire la réaction catalysée par cette enzyme (formules
des réactants simples exigées).
3.2. La réaction catalysée par cette enzyme est de type bi-bi séquentiel ordonné : Que signifient les
expressions bi-bi séquentiel et ordonné ?
Schématiser, en utilisant la représentation de Cleland, le mécanisme réactionnel (données: le NAD + se
fixe en premier sur l'enzyme).
3.3. On veut détermine» les constantes de Michaélis de l'alcool deshydrogénase vis à vis de l'éthanol
d'une part, du NAD+ d'autre part (température 25°C, pH optimal d'action)
Décrire les conditions expérimentales particulières dans lesquelles il faut se placer pour déterminer ces
constantes de Michaélis. Écrire l'équation de Michaélis lors de chaque détermination et donner la
signification de KM.
Fanny Demay
BTS BioAnalyses & Contrôles
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