astralab

Cellules Tumorales Circulantes
(CTC)
et Cancer du Sein
G. Barrière, A. Riouallon, J. Renaudie, M. Tartary, M. Rigaud
ASTRALAB
Cellules Tumorales Circulantes
CTC
 Décrites en 1869 par T.R. Ashworth
A case of cancer in which cells similar to those in the tumour
were seen in the blood after death
Aust Med J , vol 14,146-149,1869
 Définition :
Cellules tumorales détectées dans le sang circulant
ASTRALAB
Cellules Tumorales Disséminées
ou DTC
 Définition:
Ce sont les cellules disséminées dans les
organes et en particulier dans la moelle osseuse
ASTRALAB
Nature des CTC
Il existe des sous-populations de CTC
 Cellules épithéliales
 Cellules mésenchymateuses
ASTRALAB
EMT
Processus Physiologique et Pathologique
Jean Paul Thiery, Hervé Acloque, Ruby Y.J. Huang, M. Angela Nieto
Cell, November 2009, Vol 139, Issue 5, p871
ASTRALAB
Cellule Cancéreuse Souche (CSC) :
Transition Epithéliale Mésenchymateuse
Piyush B Gupta, Christine L Chaffer & Robert A Weinberg
Nature Medicine, 2009, vol 15, p1010
ASTRALAB
Transition Epithéliale Mésenchymateuse
Masaaki Iwatsuki et al
Cancer Science, February 2010, Vol 101, Issue 2, p293 ASTRALAB
Caractéristiques
des Cellules Cancéreuses Souches
(CSC)
 Cellules résistantes :
- aux chimiothérapies classiques
- à la radiothérapie
Gupta B. et al, Cell ,138, 4, 645-659, 2009
 Chimiothérapie conduit à un enrichissement en CSC
Levina et al, Plos One,3, p3077, 2008
ASTRALAB
CSC
Résistance Thérapeutique
Salinomycin targets breast cancer stem cells
Hartmut Beug
Cell, August 2009, Vol 138, Issue 4, p 623
ASTRALAB
Caractéristiques des CSC
Sur 16000 composés essayés pour déterminer de
nouvelles thérapeutiques,4 composés présentent
une sélectivité de toxicité pour les CSC:
 Etoposide
 Salinomycine
 Abamectine
 Negericine
 Seule l’Etoposide, inhibiteur de la topoisomérase II
est utilisée actuellement
Gupta B et al, Aôut 2009
ASTRALAB
Méthodes de détection des CTC
 Système « Cell Search TM system » :
Immunofluorescence et cytométrie
 Système AdnaTest Breast Cancer :
Système immunomagnétique IMS
 Système Métagenex :
Isolement des cellules par filtration
 Système Epispot :
Empreintes protéiques
ASTRALAB
Méthode AdnaGen
Billes couplées
AC
Billesaux
couplées
aux AC
Cellules du sang
Séparation
Séparation
Lyse
Lyse
cellulaire
cellulaire
Cellules tumorales
Incubation avec les billes couplées aux AC
1- sélection des CTC
- EpCam, MUC1a, Muc1b
(Cancer associated glycans)
Séparation des complexe cellules–billes
de la phase liquide par un champ magnétique
Lyse cellulaire
Elimination des billes
ASTRALAB
2- Extraction des ARNm
en utilisant des oligo(dT) couplés à des billes magnétiques
Transcription inverse
3- Analyse de l’expression des marqueurs spécifiques par PCR
multiplexe
Her2 neu
CTC
GA733-2
Muc 1
ALDH1
Twist
CSC
Akt2
PI3Kase
ER et PR
ASTRALAB
Deux études en cours
1. Primo diagnostic du cancer du sein
400 patients
2. Cancer du sein métastatique
120 patients
ASTRALAB
1. Primo diagnostic du cancer du sein
A. Valeur pronostic des CTC
B. Corrélation avec le ganglion sentinelle
C. Critères de classification
D. Orientation thérapeutique
ASTRALAB
2. Cancer du sein métastatique
A. Suivi thérapeutique
B. Evaluation précoce de l’efficacité des traitements
C. Thérapeutique individualisée
D. Utilisation pour les essais cliniques de nouvelles
thérapeutiques
ASTRALAB
Visualisation des résultats sur Agilent (Electrophorèse capillaire)
• Positivité > 0,15 ng/µL
Positif
Négatif
GA733-2
Muc1
Her2
Résultats
-
-
+
- -
+ - -
-
Muc1
Résultats
- -
+ -
-
-
- - +
ASTRALAB
Résultats partiels (150)
 Cancers du sein : primo-diagnostic
Service des docteurs Renaudie et Riouallon
Arnaud
 Prélèvement de sang (5mL)
avant opération (CTCS1)
15 jours à 3 semaines après opération (CTCS2)
 Accord CPP et Consentement éclairé
 Résultats étudiés à la fin de l’étude en regard de
l’observation clinique
ASTRALAB
Répartition des cancers du sein
 Cancers du sein (n)
150
 Age moyen
60 ans
 Type de tumeur
Canalaire infiltrant
Autres
ND
 Grade Scarff Bloom Richarson SBR1
SBR2
SBR3
ND
119
24
7
15
88
34
13
ASTRALAB
 ClassificationTNM
TNM I
TNM IIA
TNM IIB
TNM IIIA
TNM IIIB
TNM IV
50 cas
52 cas
18 cas
9 cas
1 cas
1 cas
 Présence de ganglions
N+
40 cas
 Statut hormonal
ER et PR positifs 110 cas
 Statut Her2-neu
Positifs
 Statut Triple négatif
14 cas
16 cas
ASTRALAB
Identification des CTC dans le sang
 Avant chirurgie
 Après chirurgie
ASTRALAB
CTCS1
19 cas positifs /
150 étudiés
Age
SBR
T
N
M
Stade
Résultat CTCS1
47
1
2
0
0
IIA
Muc1 0,15 + GA 0,17
64
2
1
0
0
I
GA 0,18
55
3
3
0
0
IIB
Her2 1,92 + Muc1 2,66 + GA 1,23
76
2
2
2
0
III A
Muc1 0,33
52
1
1
0
0
I
GA 0,21
47
1
2
0
0
IIA
Her 2 1,42 + Muc1 1,67 + GA 0,85
75
2
2
0
0
IIA
GA 0,17
67
2
1
0
0
I
Muc1 0,24
72
2
2
1
0
IIB
Muc1 0,18
64
2
1
0
0
I
GA 0,22
68
2
1
0
0
I
Her2 0,19
46
3
2
0
1
IV
GA 0,16
73
3
2
0
0
IIA
Her2 0,39 + Muc1 0,91 + GA 0,26
68
1
1
1
0
I
Muc1 0,23
60
?
?
?
?
?
Muc1 0,17
68
2
2
1
0
IIB
Her2 0,15 GA 3, 3
74
2
1
0
0
I
Her2 0,25
81
3
4b
0
0
IIIB
Her2 0,19
59
3
2
0
0
IIA
GA 0,19
ASTRALAB
CTCS2
12 cas positifs /
128 étudiés
Age
SBR
T
N
M
Stade
Résultat CTCS2
72
2
2
0
0
IIA
Her2 0,18 + Muc1 0,39
64
2
1
0
0
I
Muc1 0,25
76
2
2
2
0
III A
Muc1 0,33
52
1
1
0
0
I
Muc1 0,36 + GA 0,16
49
2
2
0
0
IIA
Muc1 0,21
47
1
2
0
0
IIA
Muc1 0,21
62
1
1
0
0
I
Muc1 0,17
61
1
1
0
0
I
Her2 0,17
46
3
2
0
1
IV
Muc1 0,19
68
2
2
1
0
IIB
GA 2,26
45
2
2
1
0
IIB
0,15 Muc1
50
2
2
0
0
IIA
0,17 Muc1
6 cas positifs avant et après chirurgie
6 cas positifs après chirurgie
ASTRALAB
• Patientes ayant des CTC avant chirurgie : 19
• Patientes ayant des CTC avant et après chirurgie : 6
• Patientes n’ayant des CTC qu’après chirurgie : 6
CTC après chirurgie :
Existence d’un foyer émetteur de cellules tumorales
(Moelle osseuse, micrométastases , organe ou ganglions lymphatiques)
Importance chez ces patientes d’assurer un suivi
des CTC
(leur persistance ou leur augmentation doit amener à des
explorations complémentaires)
ASTRALAB
Statut Her2 neu : CTC versus Tumeur
Her2 neu Tumeur
Her2 neu CTC
• 2 Positives
2 Positives
• 1 Faiblement Positive
1 Positive
• 6 Négatives
discordance
6 Positives
• 3 Positives
discordance
3 Négatives
Pestrin et al 2009 : Etude sur 66 cancers avancés du sein
29% des patients avec des tumeurs Her2 négatives ont des CTC Her2 positives
42% patients avec des tumeurs Her2 positives ont des CTC Her2 négatives
Tewes et al 2009 : Etude sur 42 cancers métastatiques du sein
29% des patients avec des tumeurs Her2 négatives ont des CTC Her2 positives
ASTRALAB
Conclusion
Résultats partiels (150)
• Détection et analyse des CTC dans le sang par l’intermédiaire
d’un profil moléculaire
• Projet 400 patientes
• Statistiques établies après inclusion des 400 patientes
• Etude finalisée après estimation de l’évolution de la maladie
avec ou sans rechute
• Valeur pronostique, choix des thérapeutiques adaptées et
individualisées après chirurgie
ASTRALAB
Etude Cancer du Sein Métastatique : Métastases hépatiques
GA 1.76
15/12/09
11/02/10
15/03/10
N
N
TAXOL - AVASTIN
14/01/10
Muc 0.34
MucMuc
1 GA
0.34/ GA 1.76
C+ CTC
C+ EMT
PI3Kase 0.15
Muc 1 0.11/ GA 0.35
PI3Kase
Cellule mésenchymateuse
Cellule cancéreuse épithéliale
Cellule cancéreuse apoptotique
ASTRALAB
ASTRALAB
Nous remercions :
 L’URCAM du Limousin et le Laboratoire Astralab
qui supportent financièrement le développement de
ces programmes de recherche en oncologie
 Les docteurs Alain Riouallon,Joel Renaudie,
Robert Arnaud, Bernard Leduc et l’association 3C
pour leur collaboration compétente
ASTRALAB