LA MATURATION FOLLICULAIRE ET OVOCYTAIRE CHEZ LA CHIENNE Angélique ENTE Julie OTTAVIANI Raphaëlle TEXIER PLAN: Introduction I/ La lutéinisation pré ovulatoire du follicule ovarien II/ Une ovulation précoce III/ Maturation ovocytaire et fécondation Introduction: La maturation ovocytaire dans toutes les espèces suit ce schéma général: ovocyte primaire du follicule mûr décharge ovulatoire de LH ovocyte secondaire apte à la fécondation Cette maturation associe des modifications nucléaires et cytoplasmiques. Rappel sur l’action des hormones hypophysaires pendant l’œstrus *FSH Action mitogène: multiplication des cellules de la granulosa . Responsable de la fin de la croissance folliculaire . Sécrétion d’oestrogènes *LH Hormone responsable de la maturation folliculaire . Déclenche l’ovulation . Transforme les cellules de la granulosa: Action LUTEINISANTE Sécretion de progestérone Particularités du cycle oestral chez la chienne: Chronologiques: * mono oestrien: une seule période d’oestrus par cycle. * Période de repos sexuel : l’anoestrus est long,il dure de 22 à 47 semaines. Physiologiques: * lutéinisation pré ovulatoire : progestéronémie déjà élevée au moment de l’ovulation. * ovulation spontanée d’un ovocyte immature: ovocytes expulsés au stade vésicule germinative diploïde (prophase I) au lieu de métaphase II haploïde fin maturation après ovulation dans l’oviducte * Ovocyte excessivement riche en lipides >> matériel nucléaire difficile à observer Intérêt du microscope confocal I La lutéinisation pré ovulatoire du follicule ovarien *Pendant le prooestrus = de 5 à 15 jours • phase de maturation folliculaire (croissance rapide des follicules ovariens qui passent de 1 à 4 mm) • imprégnation oestrogénique responsable des modifications comportementales et du frottis vaginal ( augmentation du nombre de cellules et kératinisation des cellules). *Sous l’effet de FSH, certains follicules ovariens reprennent leur processus de maturation. 48 h avant l’ovulation : pic de LH qui entraîne une augmentation de la progestéronémie (entre 3 et 10 ng/ml), liée à la lutéinisation pré ovulatoire. Le suivi de la progestéronémie permet de situer le moment de l’ovulation: à 5 ng/ml 48 h après: moment optimal pour la fécondation (insémination, saillie) *Pas de corps hémorragique lors de l’ovulation car lutéinisation précoce. II Une ovulation d’un ovocyte immature Pic de LH long(48h): en fin de pro œstrus ou début d’oestrus. => OVULATION Ovulation spontanée Environ 2 jours après le pic de LH Non provoquée par le coït Libère les ovocytes primaires bloqués en prophase de 1ère division méiotique Maturation post-ovulatoire de 2 jours dans les 2/3 supérieurs de l’oviducte Ovocytes restant alors fécondables pendant 48 heures Evolution des stades ovocytaires: suivi de la méiose VG GVBD MII Maturation ovocytaire particulière chez la chienne MAJORITE DES MAMMIFERES 2 cellules : 11 à 36 h 8 cellules : 42 à 96 h blastocyste : 7 jours OVULATION Progestérone circulante Métaphase II Formation du CJ à l’ovulation CHIENNE Maturation ovocytaire (oviducte) Développement lent 2 cellules : 72 à 96 h 8 cellules : 144 h (6j) blastocyste : 9-11 jours OVULATION Lutéinisation préovulatoire ± 48-72 h Vésicule Germinative Métaphase II Progestérone circulante III Maturation ovocytaire et fécondation Ovocytes immatures à l’ovulation : diploïdes Reprise de l’activité méïotique dans l’oviducte : rôle des cellules de l’oviducte ? Rôle de la fécondation ? Etude de l’influence de l’oviducte sur la reprise de la méiose A=milieu de culture 48h 40% d’incubation A+cellules de l’infundibulum A+cellules de l’ampoule 59% 60% Critère : % d’ovocytes ayant quitté le stade VG Influence de la co-culture avec des cellules épithéliales de l’oviducte (Obstetric section of the Institute of General Pathology, BOGLIOLO & AL.). Années 20002001 Les résultats: Les cellules de l’infundibulum et de l’ampoule influencent la reprise de l’activité méïotique 48h sont suffisantes pour l’achèvement de la maturation nucléaire Etude de l’influence d’une fécondation précoce sur la reprise de la méiose A=milieu de A+ semence culture + ovocyte fraîche de chien de chienne 72h Pas de d’incubation maturation Critère : ovocytes ayant quitté le stade VG St Dizier et Al. , Alfort 2000 Diminution du nombre de VG Les résultats La fécondation est possible in vitro sur les ovocytes immatures La pénétration du spz induit la reprise de la méïose Efficacité limitée : inefficace sur 40% des ovocytes Non reproductible in vivo La fécondation in vivo a lieu comme chez les autres mammifères au stade métaphase II (Fontbonne et al, 2004, soumis). CONCLUSION Lourdeur des manipulations et difficultés d’observation Pourquoi les chiens se différencient ils du schéma général? Connaissances sur la reproduction canine à améliorer. BIBLIOGRAPHIE Thèse ALFORT 2001 DUMASY Marie: Analyse in vivo de la fécondation dans l’espèce canine:dosages hormonaux, suivi échographique de l’ovulation et immunocytochimie sur ovocytes. Pub-med National Library of Medicine (lien internet site physio).