Tests phénotypiques des bêta
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Les tests phénotypiques pour la détection des bêta-lactamases dans le laboratoire de microbiologie clinique: rôle de l'acide boronique Dr. Ziad Daoud Associate Professor Faculty of Medicine & Medical Sciences University of Balamand La diffusion rapide au niveau mondial des Enterobacteriaceae produisant les bêtalactamases à spectre étendu (BLSE) et les bêta-lactamases AmpC plasmidique (PABLs) représente une menace clinique importante BLSE- AmpC Les AmpC • Les BL-AmpC sont devenues bien connues en 1970s • Ces enzymes sont des cephalosporinases capables d’hydrolyzer presque toutes les b-lactamines • Les BL-AmpC peuvent etre d’origine nucleoidique (inductibles) ou plasmidique Origine de AmpC • Les enzymes AmpC nucleoidiques sont secrétées par toutes les Entérobactéries (bas niveau) • Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae, Morganella morganii, Hafnia alvei et Serratia marcescens produisent ces enzymes d’une façon plus abondante • Typiquement, les AmpC nucl. sont induites par les betalactamines telles que cefoxitine et imipenem mais très faiblement par les CG3-CG4 AmpC nucleoidique • En1980s, ces gènes nucleoidiques ont été trouvés sur des plasmides (la plus part sans aucune capacité d’induction) et pouvaient être transmis même a des bactéries telles que Klebsiella spp., Escherichia coli, Salmonella spp. AmpC plasmidique • La détection des beta-lactamases AmpC chez les BGN est problématique vu que: • Les test phénotypiques disponibles ne sont pas assez précis dans ce cas • Bien que la résistance a la cefoxitine soit utilisée comme un “screening test”, la fiabilité de ce test est discutable • L’absence de recommandations claires pour cette détection • La lecture peut être compliquée par la production simultanée de BLSE Detection de AmpC Les KPC • Les enzymes Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) ont gagné une importance primordiale vue leur prévalence parmi les K. pneumoniae et les autres espèces d’ Enterobacteriaceae • Epidémies dans plusieurs pays et continents • Vues les options thérapeutiques limitées, la bonne détection de ces enzymes s’avère primordiale pour un meilleur control d’infection BL-KPC • Les recommandations pour la détection phénotypique de KPC se basent sur l’observation d’une sensibilité diminuée au carbapenems • Une confirmation avec le “Modified Hodge Test (MHT) sera demandée a la suite • Le MHT est un test fiable avec un sensibilité qui ne dépasse pas les 75%, cependant, il s’agit d’un test • souvent difficile a interpréter • pas spécifique de KPC et • pouvant donner des faux positifs avec beaucoup d’autres enzymes surtout la BLSE-CTX et les AmpC • La PCR devient la seule technique de différentiation Le MHT L’Acide Boronique comme detecteur de Beta-Lactamases • Les composés de l’acide boronique sont les seuls inhibiteurs de BL (serines) dirigés vers les sites actifs et non basés sur les structures beta-lactames. • L’activité inhibitrice de ces molécules a été étudiée contre une variété de beta-lactamases • Des études cinétiques ont montré que des composés différents de l’acide boronoque inhibent les BL-class C (AmpC), plusieurs BL-class A ainsi que quelques BLSE type CTX-M Acide Boronique • On a utilisé différents composés de l’acide boronique • 3′-aminophenylboronic acid –APBA en combinaison de cefoxitin pour la détection des AmpC plasmidiques • Phenyl boronic acid-PBA pour la détection de KPC • En parallèle, L’acide clavulanique a été utilise pour la différenciation dans les souches qui co-produisent AmpC et BLSE L’ étude • 29 souches épidemiologiquement indépendantes de K. pneumoniae et E. coli ont été étudiées: • 5 produisant des BL-KPC (2 souches libanaises et 3 souches égyptiennes) • 3 souches résistantes a l’ertapenem sans production de KPC • 15 souches produisant des BLSE • 6 souches produisant des BL-AmpC plasm. Population bactérienne • La détection génotypique des gènes de résistance a été faite par PCR • KPC (primers KPC-1-F (5-GGC TTG CCGCTC GGT GAT ATT-3) and KPC-1-R (5-TAT CTG TGAGGG CGA AGG TTA-3) • Les souches productrices de BLSE et BL-AmpC nucl. provenaient de patients libanais sujets d’une étude précédente Techniques Moleculaires Use of Boronic Acid compunds for the detection of AmpC and KPC in E.coli and K.pneumoniae Zone Diameters (mm) ETP ETP+BA IPM IPM+BA CXT CXT+BA CZT CZT+CA MHT KPC+(4KP, 1EC) 6-12 (8) 13-25 (17) 12-24 (17) 19-29 (22) 6-9 (5) 6-9 (3) 6-12 (12) 6-17 (15) All + ETPR,KPC-(2KP, 1EC) 8-13 (10) 11-14 (12) 20-26 (24) 20-26 (24) 6-7 (2) 6-9 (4) 7-10 (13) 6-13 (13) All - ESBL+(9KP, 6EC) 21-33 (26) 21-34 (28) 26-33 (29) 26-32 (12) 14-25 (16) 15-26 (19) 6-17 (23) 13-24 (20) 6+ 9- AmpC +(2KP, 4EC) 20-26 (19) 26-32 (29) 26-28 (27) 27-28 (16) 6-8 (2) 14- 26 (5) 6-13 (12) 7-19 (21) 1+ 5- BA & detection of BL • Cefoxitin avec et sans le APBA Detection de AmpC CFX + BA AmpC vs ESBL CFX + BA IMP + BA IMP KPC detection • Les tests phénotypiques sont très importants et ne peuvent pas être remplacés par des tests moléculaires dans la pratique microbiologiques • Ces tests ne sont pas toujours accompagnes d’une spécificité élevée, cependant, vu le prix et l’efficacité de ces tests, il faut toujours essayer de les améliorer • L’acide boronique semble etre un test promettant pour la détection des Amp C-plasm et des KPC • Plus des donnees libanaise sont necessaires Conclusions
