Archer - Spiral

PROPOSITION SUJET de MASTER 2016-2017
TITRE : : LES EXOSOMES COMME VEHICULES DE LA PROTEINE D'ENVELOPPE ONCOGENE DU VIRUS JSRV
Nom, Prénom du Maitre de Stage :
Archer Fabienne
Qualité : Chercheur et Chef d’équipe « Microvésicules, pathogenèse et ciblage thérapeutique »-UMR754
Téléphone :
04 37 28 74 55
E-mail :
[email protected]
Nom, Prénom du co-encadrant éventuel :
Qualité :
Téléphone :
E-mail :
Laboratoire d’accueil, Responsable et équipe :
UMR754 "Infections Virales et Pathologie Comparée" INRA - Université Lyon1 - EPHE
Dr Fabienne ARCHER (PI)
Equipe "Microvésicules, pathogenèse et ciblage thérapeutique"
Adresse :
50, Avenue Tony Garnier
69366 Lyon cedex
France
Nom du candidat éventuellement proposé :
S'il n'est pas retenu, acceptez-vous un autre candidat ?
Oui - Non
Description du sujet au verso

Sujet (objectif, démarche et technique, collaboration(s),...) :
JSRV (Jaagsiekte Sheep RetroVirus) est un rétrovirus infectant les petits ruminants. Il induit un
adénocarcinome pulmonaire par transformation des cellules épithéliales du poumon profond que sont les
pneumocytes de type II dans l’alvéole et les cellules de Clara dans la bronchiole. JSRV induit des tumeurs via
les propriétés oncogéniques de son enveloppe, celle-ci étant nécessaire et suffisante pour induire la
transformation des cellules in vitro et in vivo chez le mouton ou la souris. Ce mécanisme d’oncogénèse est
inhabituel et JSRV est parmi les rares rétrovirus utilisant l’une de ses protéines de structure pour transformer
les cellules. Bien que de récents résultats aient clarifié les mécanismes oncogéniques de ce virus, son
«trafficking » intracellulaire et la voie de transmission dans les tissus ou entre cellules n’est pas élucidée.
Dans le contexte viral, de nombreux virus sont capables de disséminer leur pathogénicité via un échange de
proximité de cellules à cellules, sans forcément passer par la particule virale mature. Ces échanges peuvent
impliquer les contacts cellules à cellules et/ou des microvésicules ou exosomes émis dans l'environnement
extracellulaire véhiculant un ou plusieurs éléments viraux. Ces modes de transmission facilitent la
dissémination d’éléments viraux et sont susceptibles de moduler la réponse du système immunitaire.
Nous faisons l’hypothèse que les exosomes émis par les cellules tumorales pulmonaires infectées par JSRV
peuvent véhiculer des éléments viraux tel que la protéine d’enveloppe et transférer leur pouvoir
oncogénique ou moduler la prolifération des cellules proches. Nous analyserons et déterminerons les
éléments viraux véhiculés par les exosomes de cellules transfectées ou naturellement infectées: protéine
d’enveloppe de JSRV, ARN viraux. Et nous étudierons leur effet sur la prolifération de cellules normales, la
modulation de la voie de signalisation Akt/mTOR/p70S6K et l’activation de la réponse immunitaire.
Des lignées cellulaires seront transfectées par un vecteur contenant soit le génome entier de JSRV, soit son
enveloppe seule et les exosomes émis dans le surnageant de culture seront analysés. La présence de
l’enveloppe sera analysée avec des anticorps spécifiques sur des exosomes purifiés par centrifugations
différentielles et purification sur gradient de sucrose ou Optiprep. Les contenus protéiques seront analysés
par Western blot. L’ARN viral vehiculé sera analysé par QRT-PCR. Nous étudierons le transfert du pouvoir
oncogénique par « exo-infection » de cellules naïves avec des exosomes portant les protéines d’enveloppe de
JSRV. Nous analyserons la prolifération et la transformation de cellules en suivant le développement de
foyers de transformation en monocouche (2D) ou de sphéroïdes en gélose semi-molle (3D) par microscopie
optique. La modulation de la voie de signalisation Akt/mTOR/p70S6K sera analysée par western-blot. Nous
nous intéresserons aussi à la modulation des cellules immunitaires induites par les exosomes véhiculant les
molécules virales.
Ces travaux permettront de mieux comprendre comment un agent infectieux peut moduler l’environnement
cellulaire, en dehors d’un cycle viral impliquant la particule virale complète. Ce projet s’intéresse à un
nouveau mode de transmission d’un pouvoir oncogène et participe à la compréhension de la
physiopathologie rétrovirale.
1: Vituret C, Gallay K, Confort MP, Ftaich N, Matei CI, Archer F, Ronfort C, Mornex JF, Chanson M, Di Pietro A, Boulanger P, Hong SS.
Transfer of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator to Human Cystic Fibrosis Cells Mediated by Extracellular
Vesicles. Hum Gene Ther. 2016 Feb;27(2):166-83.
2: Monot M, Archer F, Gomes M, Mornex JF, Leroux C. Advances in the study of transmissible respiratory tumours in small ruminants. Vet
Microbiol. 2015 Dec 14;181(1-2):170-7.
3: Monot M, Erny A, Gineys B, Desloire S, Dolmazon C, Aublin-Gex A, Lotteau V, Archer F, Leroux C. Early Steps of Jaagsiekte Sheep
Retrovirus-Mediated Cell Transformation Involve the Interaction between Env and the RALBP1 Cellular Protein. J Virol. 2015
4: Archer F, Abi-Rizk A, Desloire S, Dolmazon C, Gineys B, Guiguen F, Cottin V, Mornex JF, Leroux C. Lung progenitors from lambs can
differentiate into specialized alveolar or bronchiolar epithelial cells. BMC Vet Res. 2013.
5: Viginier B, Dolmazon C, Lantier I, Lantier F, Archer F, Leroux C, Terzian C. Copy number variation and differential expression of a
protective endogenous retrovirus in sheep. PLoS One. 2012
6: Varela M, Golder M, Archer F, de las Heras M, Leroux C, Palmarini M. A large animal model to evaluate the effects of Hsp90 inhibitors
for the treatment of lung adenocarcinoma. Virology. 2008 Feb 5;371(1):206-15.
7: Leroux C, Girard N, Cottin V, Greenland T, Mornex JF, Archer F. Jaagsiekte Sheep Retrovirus (JSRV): from virus to lung cancer in
sheep. Vet Res. 2007 Mar-Apr;38(2):211-28.
8: Archer F, Jacquier E, Lyon M, Chastang J, Cottin V, Mornex JF, Leroux C. Alveolar type II cells isolated from pulmonary
adenocarcinoma: a model for JSRV expression in vitro. Am J Respir Cell Mol Biol. 2007 May;36(5):534-40.