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BIOKAR Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34
Bouillon de MÜLLER-KAUFFMANN
au Tétrathionate-Novobiocine (MKTTn)
DOMAINE D’UTILISATION
Le bouillon MKTTn est l’un des deux milieux d’enrichissement sélectifs, avec le bouillon RVS, utilisé
pour la recherche des salmonelles dans le lait et les produits laitiers (NF EN ISO 6785), et les autres
produits alimentaires suivant la méthode horizontale décrite dans la norme internationale ISO 6579.
Associé au MSRV, il fait également partie du protocole mis en œuvre pour les isolement et
identification des salmonelles dans l’environnement des productions animales (NF U 47-100), chez
les oiseaux (NF U 47-101) et chez les mammifères (NF U 47-102).
HISTORIQUE
Le milieu a été décrit par Müller en 1923, afin de pouvoir favoriser l’inhibition des coliformes, tout en
permettant le développement des bacilles typhiques et paratyphiques. Kauffmann, en modifiant la
formule, a obtenu un plus grand nombre de résultats positifs avec cette méthode d’enrichissement
préalable qu’avec la méthode directe d’isolement sur des milieux sélectifs coulés en boîtes.
PRINCIPES
- Les sels biliaires et le vert brillant inhibent principalement le développement des microorganismes
à Gram-positif.
- La production extemporanée de tétrathionate, résultant de l’action de la solution iodo-iodurée sur
le thiosulfate de sodium, provoque l'inhibition des coliformes et de la plupart des bactéries
intestinales.
- La novobiocine inhibe le développement des Proteus.
- Le carbonate de calcium neutralise l’acide sulfurique qui est produit lorsque le tétrathionate est
réduit. L’effet résultant est de favoriser le maintien du pH.
PREPARATION
- Mettre en suspension 89,4 g de milieu de base déshydraté (BK169) dans 1 litre d’eau purifiée.
- Porter à ébullition lentement, sous agitation constante.
- Maintenir l’ébullition pendant 2 minutes.
- Ne pas autoclaver.

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MODE D’EMPLOI
- Refroidir le milieu jusqu’à 25°C.
- Dissoudre 4 g d’iode dans 20 mL d’une solution contenant au préalable 5 g d’iodure de potassium
dans une fiole stérile.
- Ajouter la solution iodo-iodurée au milieu.
- Ajouter 5 mL de solution de supplément sélectif Novobiocine 40 mg (BS056) reconstitué (l’addition
de novobiocine est facultative lorsque les normes françaises NF U 47-100, NF U 47-101,
et NF U 47-102 sont mises en oeuvre).
- Bien homogénéiser l’ensemble.
- Ne pas chauffer le milieu ainsi préparé.
- Si nécessaire, ajuster le pH à la valeur souhaitée, suivant le protocole à respecter.
- Répartir stérilement, à raison de 10 (ou 20) mL par tube stérile.
- Transférer le volume d’inoculum requis par le protocole analytique choisi dans chaque tube, ou
dans un tube de milieu prêt-à-l’emploi BM078 complet (avec solution iodo-iodurée et Novobiocine),
à partir du milieu de préenrichissement utilisé : eau peptonée tamponnée (BK018, BK131, BM010,
BM056, BM057, BM131, BM132).
- Incuber aux températures et pendant les durées requises par le protocole analytique choisi.
- Effectuer un isolement sur gélose XLD (ISO 6579) (BK168, BM087) et sur un second milieu milieu
d’isolement sélectif, au moyen d'une anse bouclée.
- A partir des colonies bien isolées, on inoculera une gélose nutritive qui servira de point de départ
pour l’identification.
FORMULE - TYPE du milieu de base (sans Iode, ni novobiocine)
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre d’eau purifiée :
- Tryptone...........................................................................................8,6 g
- Extrait de viande ..............................................................................4,3 g
- Sels biliaires...................................................................................4,78 g
- Chlorure de sodium..........................................................................2,6 g
- Carbonate de calcium....................................................................38,7 g
- Thiosulfate de sodium anhydre....................................................30,45 g
- Vert brillant....................................................................................9,6 mg

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CONTRÖLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre blanchâtre, fluide et homogène.
- Milieu préparé complet : suspension bleuâtre, opaque, présentant au repos un précipité important.
- Réponse culturale typique de croissance après enrichissement pendant 24 heures à 37°C, puis
subcultures sur gélose XLD (ISO 6579) :
Microorganismes Croissance
Salmonella Typhimurium ATCC® 14028
+ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
+ Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella Enteritidis CIP 82.97
+ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
+ Escherichia coli ATCC 8739
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Escherichia coli ATCC 25922
≥ 10 colonies caractéristiques
(rouges à centre noir)
≥ 10 colonies caractéristiques
(rouges à centre noir),
< 10 colonies
inhibée, score 0
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu de base déshydraté : 2-30°C.
La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu de base préparé en tubes ou en flacons : 1 mois à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre
indicatif).
- Milieu complet préparé en tubes ou en flacons : utiliser immédiatement après l’adjonction de la
solution iodo-iodurée et de la novobiocine.
Supplément sélectif Novobiocine,
Milieu prêt-à-l’emploi (complet) en tubes :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION Code
Milieu prêt à l’emploi (complet) en tubes :
- Coffret de 50 tubes de 10 mL BM07808
Milieu de base déshydraté (sans iode, ni novobiocine) :
- Flacon de 500 g BK169HA
Supplément sélectif Novobiocine 10 mg:
- Coffret de 10 flacons BS03308
Supplément sélectif Novobiocine 40 mg :
- Coffret de 8 flacons BS05608

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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
MÜLLER, L.. 1923. Un nouveau milieu d’enrichissement pour la recherche du bacille typhique et des paratyphiques.
Comptes Rendus de la Société de Biologie, 89 : 434-437.
KAUFFMANN, F.. 1935. Weitere Erfahrungen mit dem kombinierten Anreicherungsverfahren für Salmonella bazillen.
Zeitschrift für Hygiene und Infektionskrankheit, 117 : 26-32.
JEFFRIES, L.. 1959. Novobiocin-tetrathionate broth: a medium of improved selectivity for the isolation of salmonellae in
feces. Journal of Clinical Pathology, 12 : 568-571.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production
des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
NF EN ISO 6579 (V 08-013). Mars 2007. Microbiologie des aliments. Méthode horizontale pour la recherche des Salmonella
spp.
NF U 47-100. Juillet 2007. Méthodes d’analyse en santé animale. Recherche par l’isolement et identification de tout sérovar
ou de sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles dans l’environnement des productions animales.
NF U 47-101. Novembre 2007. Méthodes d’analyse en santé animale. Isolement et identification de tout sérovar ou de
sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles chez les oiseaux.
NF U 47-102. Janvier 2008. Méthodes d’analyse en santé animale. Isolement et identification de tout sérovar ou de
sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles chez les mammifères.
Pr NF EN ISO 19250 (T 90-435). Mars 2008. Qualité de l’eau. Dosage d’espèces de Salmonella.
NF EN ISO 6785 (V 04-031). Avril 2008. Lait et produits laitiers. Recherche de Salmonella spp.
Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2008-03-12.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK169/F/2003-06 : 8