Bouillon de MÜLLER-KAUFFMANN (Base)

1/3
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
Bouillon de MÜLLER-KAUFFMANN (Base)
DOMAINE D’UTILISATION
Le bouillon au tétrathionate de Müller et Kauffmann est un des plus anciens milieux
traditionnellement utilisés pour l’enrichissement sélectif des salmonelles.
La formule de la base (BK135) correspond à celle préconisée pour la recherche des salmonelles
dans le domaine de la gélatine alimentaire (NF V 59-104 d’Octobre 1982).
HISTORIQUE
Le milieu a été décrit par Müller en 1923, afin de pouvoir favoriser l’inhibition des coliformes, tout
en permettant le développement des bacilles typhiques et paratyphiques. Kauffmann, en modifiant
la formule, a obtenu un plus grand nombre de résultats positifs avec cette méthode
d’enrichissement préalable qu’avec la méthode directe d’isolement sur des milieux sélectifs coulés
en boîtes.
PRINCIPES
- La bile de boeuf et le vert brillant inhibent principalement le développement des
microorganismes à Gram-positif.
- La production extemporanée de tétrathionate, résultant de l’action de la solution iodo-iodurée
sur le thiosulfate de sodium, provoque l'inhibition des coliformes et de la plupart des bactéries
intestinales.
- Il est possible de supprimer le développement des Proteus en rajoutant 40 mg de novobiocine
par litre de milieu.
- Le carbonate de calcium neutralise l’acide sulfurique qui est produit lorsque le tétrathionate est
réduit. L’effet résultant est de favoriser le maintien du pH.
PREPARATION
- Mettre en suspension 88,3 g de milieu de base déshydraté (BK135) dans 1 litre d’eau distillée
ou déminéralisée.
- Porter à ébullition lentement, en agitant.
- Maintenir l’ébullition pendant 2 minutes.
- Ne pas autoclaver.

2/3
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
MODE D’EMPLOI
- Refroidir le milieu jusqu’à 25°C.
- Dissoudre 4 g d’iode dans 20 mL d’une solution contenant 5 g d’iodure de potassium dans une
fiole stérile.
- Ajouter la solution iodo-iodurée au milieu.
- Ajouter éventuellement 40 mg d'une solution de supplément Novobiocine 10 mg (BS033) ou de
supplément Novobiocine 40 mg (BS056) reconstitués, par litre de milieu.
- Bien homogénéiser l’ensemble.
- Ne pas chauffer le milieu ainsi préparé.
- Répartir stérilement en flacons stériles de 250 mL de capacité, à raison de 100 mL par flacon.
- Transférer 10 mL d’inoculum dans chaque flacon ainsi préparé de milieu complet (avec
Novobiocine le cas échéant) prêt-à-l’emploi, à partir de l’eau peptonée tamponnée (BK018,
BK131, BM010, BM057, BM131, BM132).
- Vérifier que le pH du milieu est conforme aux spécifications demandées.
- Incuber pendant (48  4) heures à (43  1)°C.
- Effectuer un isolement sur plusieurs milieux sélectifs, au moyen d'une anse bouclée.
- A partir des colonies bien isolées, on inoculera une gélose nutritive à 2% (BK184, BM118), qui
servira de point de départ pour l’identification.
FORMULE - TYPE du milieu de base (sans iode, ni Novobiocine)
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone.........................................................................................8,45 g
- Extrait de viande............................................................................4,23 g
- Bile de boeuf bactériologique ........................................................4,75 g
- Chlorure de sodium .......................................................................2,54 g
- Carbonate de calcium..................................................................38,04 g
- Thiosulfate de sodium anhydre....................................................30,27 g
- Vert brillant..................................................................................9,50 mg
CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre blanchâtre, fluide et homogène.
- Milieu préparé complet : suspension bleuâtre, opaque, présentant au repos un précipité
important.
- Réponse culturale typique après enrichissement pendant 24 heures à 42°C, puis subcultures
sur gélose XLD (ISO 6579) :
Microorganismes Croissance
Salmonella Typhimurium ATCC® 14028
+ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
+ Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella Enteritidis CIP 82.97
+ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
+ Escherichia coli ATCC 8739
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Escherichia coli ATCC 25922
 10 colonies caractéristiques
(rouges à centre noir)
 10 colonies caractéristiques
(rouges à centre noir)
 10 colonies
inhibée, score 0

3/3
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu de base déshydraté : 2-30°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu de base préparé en tubes ou en flacons : 1 mois à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre
indicatif).
- Milieu complet préparé en tubes ou en flacons : utiliser immédiatement après l’adjonction de la
solution iodo-iodurée et de la Novobiocine (le cas échéant).
Suppléments sélectifs Novobiocine:
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes.
PRESENTATION Code
Milieu de base déshydraté (sans iode, ni Novobiocine) :
- Flacon de 500 g BK135HA
Supplément sélectif Novobiocine 10 mg :
- Coffret de 10 flacons BS03308
Supplément sélectif Novobiocine 40 mg :
- Coffret de 8 flacons BS05608
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
MÜLLER, L.. 1923. Un nouveau milieu d’enrichissement pour la recherche du bacille typhique et des paratyphiques.
Comptes Rendus de la Société de Biologie, 89 : 434-437.
KAUFFMANN, F.. 1935. Weitere Erfahrungen mit dem kombinierten Anreicherungsverfahren für Salmonella bazillen.
Zeitschrift für Hygiene und Infektionskrankheit, 117 : 26-32.
JEFFRIES, L.. 1959. Novobiocin-tetrathionate broth: a medium of improved selectivity for the isolation of salmonellae in
feces. Journal of Clinical Pathology, 12 : 568-571.
NF V 59-104. Octobre 1982. Gélatine alimentaire. Recherche des Salmonella.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-06-03.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK135/F/2003-06 : 8.