(MKTTn) BK169, BM078

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Biokar Diagnostics
Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – 60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
 Reconstitution:
89,5 g dans 1005 mL
 Porter à ébullition pendant 2 min
Ne pas autoclaver
 Ajouter la solution iodo-iodurée
Ne pas chauffer
FICHE TECHNIQUE
BOUILLON DE MÜLLER-KAUFFMANN AU TETRATHIONATE-NOVOBIOCINE (MKTTN)
ENRICHISSEMENT SELECTIF DES SALMONELLES BK208HA
BM07808
1 DOMAINE D’UTILISATION
Le bouillon MKTTn est l’un des deux milieux d’enrichissement sélectifs, avec le bouillon RVS, utilisé pour la
recherche des salmonelles suivant la méthode horizontale décrite dans la norme internationale ISO 6579.
Associé au MSRV, il fait également partie du protocole mis en œuvre pour les isolement et identification des
salmonelles dans l’environnement des productions animales (NF U 47-100), chez les oiseaux (NF U 47-101) et chez
les mammifères (NF U 47-102).
Le bouillon MKTTn est aussi utilisé comme second milieu d’enrichissement sélectif pour la recherche de Salmonella
dans les eaux suivant le protocole décrit dans la norme NF ISO 19250.
2 HISTORIQUE
Le milieu a été décrit par Müller en 1923, afin de pouvoir favoriser l’inhibition des coliformes, tout en permettant le
développement des bacilles typhiques et paratyphiques. Kauffmann, en modifiant la formule, a obtenu un plus grand
nombre de résultats positifs avec cette méthode d’enrichissement préalable qu’avec la méthode directe d’isolement
sur des milieux sélectifs coulés en boîtes.
3 PRINCIPES
Les sels biliaires et le vert brillant inhibent principalement le développement des microorganismes à Gram-
positif.
La production extemporanée de tétrathionate, résultant de l’action de la solution iodo-iodurée sur le thiosulfate
de sodium, provoque l'inhibition des coliformes et de la plupart des bactéries intestinales.
La novobiocine inhibe le développement des Proteus.
Le carbonate de calcium neutralise l’acide sulfurique qui est produit lorsque le tétrathionate est réduit. L’effet
résultant est de favoriser le maintien du pH.
4 PREPARATION
A partir du déshydraté :
Mettre en suspension 89,5 g de milieu de base déshydraté (BK208)
dans 1005 mL d’eau purifiée.
Porter à ébullition lentement, sous agitation constante.
Maintenir l’ébullition pendant 2 minutes.
Ne pas autoclaver.
Refroidir le milieu jusqu’à 25°C.
Dissoudre 4 g d’iode dans 20 mL d’une solution contenant au préalable
5 g d’iodure de potassium dans une fiole stérile.
Ajouter la solution iodo-iodurée au milieu.
Bien homogénéiser l’ensemble.
Ne pas chauffer le milieu ainsi préparé.
Si nécessaire, ajuster le pH à la valeur souhaitée, suivant le protocole à respecter.
Répartir stérilement, à raison de 10 (ou 20) mL par tube stérile.

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5 MODE D’EMPLOI
Microbiologie des Aliments (ISO 6579)
Transférer 1 mL du milieu de pré-enrichissement dans 10 mL de bouillon.
Incuber à 37 ± 1°C pendant 24 ± 3 h.
Effectuer un isolement sur gélose XLD et sur un second milieu d’isolement sélectif, au moyen d'une anse.
Qualité de l’eau (NF ISO 19250)
Transférer 1 mL du milieu de préenrichissement dans 10 mL de bouillon.
Incuber à 36 ± 2°C pendant 24 ± 3 h.
Effectuer un isolement sur gélose XLD et sur un second milieu d’isolement sélectif, au moyen d'une anse.
Santé animale (NF U 47-100 ; NF U47-101 ; NF U 47-102)
Transférer 1 mL du milieu de préenrichissement dans 10 mL de bouillon ( ou 2 mL dans 20 mL).
Incuber à 41,5 ± 1°C pendant 24 ± 3 h.
Effectuer un isolement sur un milieu d’isolement sélectif, au moyen d'une anse.
6 FORMULE-TYPE (DU MILIEU COMPLET)
Formule-type pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales.
Pour 1005 mL d’eau purifiée :
- Tryptone ...................................................................................................................... 8,6 g
- Extrait de viande .......................................................................................................... 4,3 g
- Sels biliaires .............................................................................................................. 4,78 g
- Chlorure de sodium ..................................................................................................... 2,6 g
- Carbonate de calcium ............................................................................................... 38,7 g
- Thiosulfate de sodium anhydre ............................................................................... 30,45 g
- Vert brillant ............................................................................................................... 9,6 mg
- Novobiocine ............................................................................................................. 0.040 g
- Iode ............................................................................................................................... 4 g
- Iodure de potassium ....................................................................................................... 5 g
NOTE: Le milieu déshydraté BK208 ne contient ni l’iode, ni l’iodure de potassium.
7 CONTROLE QUALITE
Milieu déshydraté : poudre blanchâtre, fluide et homogène.
Milieu préparé complet : suspension bleuâtre, opaque, présentant au repos un précipité important.
Réponse culturale typique de croissance après enrichissement pendant 24 heures à 37°C, puis subcultures
sur gélose XLD (ISO 6579) :
Microorganismes
Croissance
Caractéristiques
Salmonella Typhimurium WDCM 00031
+ Pseudomonas aeruginosa WDCM 00025
+ Escherichia coli WDCM 00012
Salmonella Enteritidis WDCM 00030
+ Pseudomonas aeruginosa WDCM 00025
+ Escherichia coli WDCM 00012
Enterococcus faecalis WDCM 00087
Escherichia coli WDCM 00013
10 colonies
10 colonies
< 10 colonies
inhibée, score 0
Colonies rouges à
centre noir
Colonies rouges à
centre noir
-
-

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8 CONSERVATION
Milieu de base déshydraté : 2-30°C. La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
Milieu de base préparé en tubes ou en flacons : 1 mois à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre indicatif).
Milieu complet préparé en tubes ou en flacons : utiliser immédiatement après l’adjonction de la solution iodo-iodurée.
Milieu prêt-à-l’emploi (complet) en tubes : Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
9 PRESENTATION
Milieu prêt à l’emploi (complet) en tubes :
Coffret de 50 tubes de 10 mL ............................................................................................................................ BM07808
Milieu de base déshydraté, avec novobiocine (sans iode) :
Flacon de 500 g ................................................................................................................................................. BK208HA
10 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
MÜLLER, L.. 1923. Un nouveau milieu d’enrichissement pour la recherche du bacille typhique et des paratyphiques.
Comptes Rendus de la Société de Biologie, 89 : 434-437.
JEFFRIES, L.. 1959. Novobiocin-tetrathionate broth: a medium of improved selectivity for the isolation of salmonellae
in feces. Journal of Clinical Pathology, 12 : 568-571.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
Document modifié par amendement XP CEN ISO/TS 11133-2/A1 Février 2011.
XP CEN ISO/TS 11133-2/A1 (V 08-104-2/A1 ). Février 2011. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et
la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture -
Amendement 1 : micro-organismes pour essai recommandés pour les milieux de culture les plus usuels.
NF EN ISO 6579 (V 08-013). Décembre 2002. Microbiologie des aliments. Méthode horizontale pour la recherche
des Salmonella spp. Modifié par amendement NF EN ISO 6579/A1. Octobre 2007
NF U 47-100. Juillet 2007. Méthodes d’analyse en santé animale. Recherche par l’isolement et identification de tout
sérovar ou de sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles dans l’environnement des productions animales.
NF U 47-101. Novembre 2007. Méthodes d’analyse en santé animale. Isolement et identification de tout sérovar ou
de sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles chez les oiseaux.
NF U 47-102. Janvier 2008. Méthodes d’analyse en santé animale. Isolement et identification de tout sérovar ou de
sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles chez les mammifères.
NF ISO 19250 (T 90-435). Octobre 2010. Qualité de l’eau. Recherche de Salmonella spp.
11 AUTRES INFORMATIONS
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK208/F/2012-04 : 1.
Date création : 04-2012