Détermination du statut de Her2
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Détermination du statut de HER2 dans les cancers du sein : qu’avons-nous appris en 10 ans? Anne Vincent-Salomon Département de Biologie des Tumeurs et INSERM U830 Institut Curie Paris 1 PLAN • Qu’est-ce qu’ERBB2/HER2 ? Mécanismes d’activation • Détermination – Méthodes (FISH/ SISH / CISH/ DISH) – Scores et cas équivoques (score 2+) • Contrôle de qualité et recommandations • Stabilité du statut de ERBB2 au cours du processus métastatique • Diversité des carcinomes HER2 amplifiés en fonction du statut des RO, du stroma et du niveau d’amplification de ERBB2 • Paramètres de réponse aux Anti-HER2 • Perspectives 2 ERBB2/ Neu/HER2 • • Gène: oncogène, situé sur le chromosome 17q12 Protéine = récepteur tyrosine-kinase trans-membranaire ACTIVATION de ERBB2/HER 2 dans les cancers du sein par amplification du gène 4 Méthodes de détermination du statut de HER2 • Analyse du gène : – Sur coupes tissulaires • Sur un microscope à fluorescence: FISH • En lumière optique, – CISH ou en Dual ISH en une seule coupe – SISH sur deux coupes (une pour le centromère du chr 17, une pour ERBB2) – Par PCR quantitative sur ADN extrait du bloc paraffine • Analyse de la protéine par immunohistochimie • A ajuster sur le statut du gène • Contrôle de qualité indispensable au long cours 6 CISH SISH FISH Inform Dual SISH 7 DNA probe (Ventana) 8 Définition des scores de l’immunohistochimie Score Marquage Indication Herceptin® 0 Absence de marquage ou < 10% de cellules non + Marquage faible et incomplet de >10% de cellules non ++ Marquage faible ou modéré et complet de > 10% de cellules Oui seulement si amplification prouvée par FISH/CISH/SISH +++ Marquage fort et complet de > 30% de cellules oui Wolff et al, JCO 2007 9 Signature moléculaire commerciale pour la détermination du statut de HER2 ? • • • Sur matériel fixé, par RT PCR quantitative Test commercial Oncotype DX® Détermination inexacte du statut de ERBB2 • seuls 10 des 28 cas 3+ sont considérés + par le test. (Dabbs et al, JCO Nov 2011) Signature moléculaire commerciale pour la détermination du statut de HER2 ? • • • Sur matériel fixé, par RT PCR quantitative Test commercial Oncotype DX® Détermination inexacte du statut de ERBB2 • seuls 10 des 28 cas 3+ sont considérés + par le test. (Dabbs et al, JCO Nov 2011) Calibration de la technique et interprétation des marquages • Conditions de réaction d’immunohistochimie calibrées sur le statut du gène (FISH ou SISH) concordance > 95% • Utilisation indispensable de témoins multi-tissulaires au nombre de copies du gène HER2 connu. • Contrôle de qualité interne et externe, importance du préanalytique • Nombre de cas testés par an suffisants (250 cas) • Interprétation adéquate des marquages (en fonction de l’intensité du témoin du jour) Recommandations du GEFPICS, Annales de Pathologie 2011 Wolff et al JCO 2007 Calibration de la technique et interprétation des marquages • Conditions de réaction d’immunohistochimie calibrées sur le statut du gène (FISH ou SISH) concordance > 95% • Utilisation indispensable de témoins multi-tissulaires au nombre de copies du gène HER2 connu. • Contrôle de qualité interne et externe, importance du préanalytique • Nombre de cas testés par an suffisants (250 cas) • Interprétation adéquate des marquages (en fonction de l’intensité du témoin du jour) Recommandations du GEFPICS, Annales de Pathologie 2011 Wolff et al JCO 2007 Témoins bloc multi-tissulaire (0, 2+, 3+) Glandes Normales 0 3+ 2+ À demander à centre expert ou à définir par FISH/SISH Tumeur à 2 copies d’HER2 • Faux négatifs rares si pré-traitement par la chaleur 14 Préparation des blocs témoins Choix des zones d’intérêt Forage blocs donneurs 15 Taux d’HER2 (3+) différents en fonction des types histologiques et du stade Canalaires T1a, b (<1cm) 9% < 2 cm 10 -15% > 2 cm 20 -25% grade I grade II grade III NN+ 1-3: N+ > 4: 5% 10-17% 29% 9-20% 16-21% 28% Autres types Lobulaire Tubulaire Médullaire, basal-like BRCA1 BRCA2 < 5% 0% 0% 0% 6% Cancer inflammatoire Cancer du sein Homme 30% 11% à 30% Bartlett et al , JCO 2007 Penault-Llorca et al, 2008 Rodrigues et al JCO 2010 Ignatiadis Nat Rev Clin Oncol Janv 2012 Variation de la proportion de cancers du sein HER2 surexprimés entre 1996 et 2005 (Finlande) (Koninki et al Br Can Res 2009) Bien identifier les cas équivoques C’est à dire ceux à analyser par FISH/CISH CAS 2+ (5 à 15% des cas): Marquage complet soit non uniforme soit faible avec un marquage evident circonférentiel membranaire >10% des cellules Cas hétérogènes (exceptionnels <1% des cas) Marquage complet et intense de >10% et < 30 % des cellules carcinomateuses infiltrantes Surexpression modérée Score 2+ = 5 à 15% des cas Faible niveau d ’amplification: 15 à 30% des cas 19 Pas d’amplification 70 à 85% des cas Surexpression hétérogène de HER2 : rare • 1,4% des cas dans l’essai HERA (O Stoss et al) • Moins de 1 cas par mois à l’Institut Curie (Cottu et al Annals of Oncology 2008) • Evaluation du statut HER2 sur : – Ganglions métastatiques axillaires et / ou – Métastases viscérales. Carcinome canalaire infiltrant HER2 hétérogène Biopsie initiale Mastectomie après chimiothérapie et trastuzumab Sélection sous traitement des clones HER2 négatifs HetHER2 Iurisci et al, SABCS, 2009, poster n°6034 Stabilité du statut HER2 entre tumeur primaire et métastase viscérale et /ou ganglionnaire Tumeur Primaire 3+ Métastase HER2 3+ bronchique médullaire Stabilité HER2 entre tumeur primaire et métastases Étude Patientes Technique Concordance(%) Edgerton et al. (2000) 93 FISH/IHC ±80 Gancberg et al. (2001) 100 FISH/IHC 93/94 Lower et al. (2001) 44 IHC ±90 Namer et al. (2000) 104 IHC 90 Tanner et al. (2001) 12 CISH/IHC 100/100 Vincent Salomon et al. (2002) 44 IHC 60 43 RL et 17 MD FISH 81% 100% pour 3+ 97% 98 RL1 94%MD Tapia et al. (2007) 105 FISH 92.4 Umeroglu et al. (2008) 153 IHC/FISH 94.7 Gong Y (2005) Surexpression de HER 2 stable après chimiothérapie ou ttt anti HER2 si reliquat tumoral avant chimiothérapie après chimiothérapie Herceptin® en néoadjuvant Tumeur mammaire avant traitement Reliquat après traitement Amplicon d’HER2 sur le chr 17q 85kb Marchio et al J Pathol, 2008 Kalleoniemi et al, Am J Pathol 2004 Staaf et al Br Can Res 2010 HER2 27 Co-amplification du centromère chromosome 17 et HER2 Autres amplicons associés à l’amplification d’ HER2 0 0 20 20 40 40 60 80 100 100 120 120 140 140 160 160 180 180 200 200 220 220 240 1 240 12 20 0 0 0 0 20 20 20 20 20 40 40 40 40 60 80 0 0 60 80 20 60 80 100 100 120 140 160 120 140 140 160 4 14 15 0 20 20 180 5 16 0 20 40 20 18 0 0 40 40 60 60 60 80 80 80 100 100 120 120 80 60 40 17q23.3 PPM1D, BCAS3 10 11 19 20 21 22 0 100 40 60 100 80 0 20 20 20q13.31 ZNF217 40 80 100 0 20 60 80 120 17q21.32 Topo2A 40 60 80 100 11q13.5 CCND1 20 60 80 100 40 9 40 60 11q13.3 8 40 40 20 17q12ERRB2/HER2 20 60 120 7 CHR 17 40 20 140 6 0 0 120 160 3 0 40 8q24.1 MYC 100 120 160 0 80 100 180 200 80 140 180 2 60 100 120 140 40 60 80 0 0 20 20 FGFR1/PPAPDC1B 40 60 80 100 120 13 0 60 8p12 60 40 60 17 18 (Vincent-Salomon Clin Can Res 2008; Burkhardt Br Can Res and TTT, 2009 Jonsoon Br Can res 2010; Staaf Br Can Res 2010) Altérations génomiques des carcinomes HER2 Incluant les HER2 3+ RO- et les HER2 3+/ RO+ Guedj et al Oncogene 2011 Anomalies de nombre du centromère du chromosome 17 : 4 centromères et 4 copies de HER2 30 Deux grands groupes de carcinomes HER2 En fonction du statut des RO RO Basal-like HER2 Mutations de p53 • > 90% basal-like • 75% HER2/ RO• 5% luminal grade 1 RO + Luminal B , C, Luminal A HER2 15% Sorlie et al, PNAS 2001 De Cremoux, JNCI 1999 Vincent-Salomon, Br Cancer Res 2007 Manié et al, Cancer Research 2009 Carcinome HER2 : différents types de stroma Stroma non lymphoïde Stroma lymphoïde Prédiction de la réponse aux anti HER2 • Statut HER2 déterminé par IHC ou HIS : très bon marqueur prédictif négatif HER2 0/1+ pas de traitement anti HER2 • 44 à 50% des HER2 (3+) Pas de réponse au anti HER2 Vogel et al, 2002, Slamon et al, 2001, Yu et al, 2000 Seidman et al JCO 2008 Esteva et al Nat Rev Clin Oncol 2010 Différents niveaux d’amplification d’HER2 Fort niveau d’amplification >10 copies) Faible niveau d’amplification (6-10 copies) Sur 50 patientes, 56% de pCR Sur 27 patientes, 22% de pCR Arnould et al, Clin Can Res 2007 Méchanismes de non réponse aux anti-HER2 Tyrosine Kinase src IRS1 src p110 p85 Mutations Dans 22 à 33% des cas HER2 RO+ GRP SOS RAS RAF MEK1/2 PTEN Délétions Dans 30 à 45% des HER2 MAP Kinase Akt p27 p27 cdk2 Apoptose P p27 Cycline Prolifération dégradation de p27 Angiogénèse Méchanismes de non réponse au Trastuzumab ® Altérations de PTEN • PTEN (Chr 10q23) • Délétion de PTEN dans les carcinomes HER2 ~ 30 à 45% • Expression diminuée dans 8 à 50% PTEN - PTEN + Nagata et al Cancer Cell 2004 Tokunaga et al Br Can Res and TTT 2007 Berns et al, Cancer Cell 2007 Conclusions : en 10 ans qu’avons-nous appris sur les carcinomes HER2 (3+) ? – 9 à 30% des cancers infiltrants (stade et type histologique) – Cancers HER2 = Plusieurs entités (RO+ / RO-; Stroma inflammatoire ou non) – Réponse aux anti-ERBB2 : – fonction du niveau d’amplification du gène – fonction des altérations moléculaires associées » Autres amplicons (CCND1, sur le 20q, le 11q, le 17q…) » Mutations de p53, PI3KCA, PTEN … – Importance de la calibration et du contrôle de qualité de la technique de détermination du statut de HER2 Transposition en pratique clinique de la classification moléculaire Luminal A Luminal B RO+ Ki67 >14% RO+ Haut grade Bas grade Ki67<14% CCND1 , chr 8p, 17q, 20q Mutations TP53 1q+, 16qERBB2 + possible BCL2 + ERBB2- ERBB2 ROERBB2 3+ Haut grade Triple-zéro/ basal-like RO- RP- ERBB2Proliferation Ki67 haut Haut grade Alterations chromosomiques Alterations BRCA1 mutations TP53
