Offre de Thèse
Equipe d’accueil: Centre de Recherche en Cancérologie de Toulouse (CRCT) - UMR1037-
INSERM/UPSIII - Signalisation et cycle cellulaire dans les hémopathies malignes : application au
traitement des leucémies. Département d’Immunologie & Hématologie. Equipe labellisée par le
CNRS (ERL5294).
Directeurs d’équipe: Stéphane MANENTI & Christian RECHER
Responsables encadrement : Stéphane MANENTI & Christine DIDIER
Détermination de la régulation de la kinase CHK1 et de son rôle potentiel dans la
chimiorésistance des Leucémies Aiguës Myéloïdes.
Description du sujet de thèse:
Les Leucémies Aiguës Myéloïdes (LAM) représentent un groupe hétérogène de pathologies développées
aux dépens des progéniteurs myéloïdes immatures normaux, caractérisées sur le plan moléculaire par des
modifications de l’expression de facteurs transcriptionnels aboutissant à un blocage de la maturation, et par
une activation aberrante de molécules de la transduction du signal conférant aux cellules leucémiques des
avantages de prolifération et de survie (activation constitutive des protéines de signalisation FLT3, c-Kit, Ras ,
etc) (Pabst et al., 2007). Malgré les progrès thérapeutiques considérables, la majorité des patients rechutent et
deviennent réfractaires à la thérapie. Des anomalies de la régulation des points de contrôle du cycle cellulaire
(Amico D et al., 2003), en particulier dans les cellules souches leucémiques, peuvent être impliqués dans cette
chimiorésistance et ces rechutes. Des travaux récents de l’équipe ont mis en évidence que l’efficacité du point
de contrôle G2/M varie au cours de la différenciation leucémique. Ce mécanisme confère à la cellule immature
un mécanisme de protection supplémentaire pouvant être responsable de la résistance aux traitements. Par
ailleurs, nos études démontrent la pertinence de l'utilisation de traitement combinant des inhibiteurs des
acteurs du point de contrôle G2/M et des agents génotoxiques (Didier C. et al., 2008). En effet, l’inhibition de la
kinase CHK1 potentialise le traitement à l’ara-C dans les échantillons de patients LAM à caryotype complexe
(Cavelier C. et al., 2009) (Didier C. et al., 2012). Ainsi, une meilleure connaissance des mécanismes de
régulation et d’action de la kinase CHK1 est essentielle au cours de l’hématopoïèse normale afin de mieux
appréhender les processus de leucémogenèse et ainsi proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques dans les
hémopathies.
Les études envisagées pour ce projet de thèse seront réalisées sur des cellules primaires issues de sang de
cordon. L’expression de CHK1 (ARN et protéine) sera analysée au cours des différenciations érythroïde,
granulo-monocytaire et mégacaryocytaire. Ensuite, des expériences d’inhibition pharmacologique ou
« génétique » (RNAi et shRNA) permettront d’aborder la fonction de la kinase au cours de ces différenciations.
Dans ce cadre, des études du cycle cellulaire, des processus d’apoptose et de différenciation seront conduites.
Enfin, la dérégulation de la kinase CHK1 sera également étudiée sur des cellules primaires issues de patients
atteints de LAM. Plusieurs groupes seront considérés et notamment des cellules de patient à caryotype
complexe, à caryotype normal et à caryotype normal présentant la mutation FLT-3-ITD.
Les objectifs de ces études seront donc (I) de caractériser plus finement les mécanismes qui contribuent à
l’instabilité génétique dans cette pathologie et ce en fonction de la dérégulation de la kinase CHK1, dont le rôle
essentiel dans la réponse cellulaire au stress réplicatif est bien établi ; (II) de définir plus précisément le rôle
assuré par la kinase CHK1 dans un contexte de différenciation myéloïde normale.
Techniques utilisées relatives au sujet: Cytométrie en flux, Technique d’immunofluorescence,
transduction avec des lentivirus, Western blots, Tests de clonogénie.