Gélose lactosée au TTC et au Tergitol 7
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Gélose lactosée au TTC et au Tergitol 7 DOMAINE D'UTILISATION La gélose lactosée au TTC et au Tergitol 7 permet d’effectuer les recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes dans les eaux, notamment celles destinées à la consommation humaine, par la méthode des membranes filtrantes. HISTORIQUE Pollard, en 1946, avait démontré l'action bactéricide du Tergitol 7 sur les microorganismes à Gram positif, puis le milieu a été développé par Chapman qui fit des numérations de coliformes environ 30% supérieures à celles effectuées sur d'autres milieux sélectifs. La formule a ensuite été modifiée par l'auteur par incorporation de TTC (chlorure de triphényltétrazolium) qui s'est révélé utile pour la reconnaissance rapide d'Escherichia coli et d'Enterobacter aerogenes. Ces microorganismes produisent des colonies jaunes entourées d'un halo jaune, tandis que les autres bactéries à Gram négatif (incluant Proteus et Pseudomonas) donnent des colonies rouge foncé. Le milieu est préconisé dans la norme NF EN ISO 9308-1 pour les recherche et dénombrement des Escherichia coli et des coliformes pour la colimétrie des eaux, par la méthode de filtration sur membrane. PRINCIPES - Le Tergitol 7 inhibe la croissance des microorganismes à Gram positif, limite l'envahissement par les Proteus et favorise la récupération des coliformes. - Les coliformes présentent des colonies de coloration jaune ou orangée, à l'intérieur d'un halo jaune visible sous la membrane. Celui-ci est provoqué par l'acidification du lactose en présence de l'indicateur coloré, le bleu de bromothymol. - Les autres microorganismes présentent des colonies dont la coloration rouge est due à la réduction du TTC en formazan insoluble. - Les germes qui ne fermentent pas le lactose présentent des colonies entourées d'un halo bleu. PREPARATION - Mettre en suspension 51,1 g de milieu de base déshydraté (BK123) dans 1 litre d'eau distillée ou déminéralisée. - Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution. - Répartir en flacons, à raison de 100 mL par flacon. - Stériliser à l'autoclave à 121°C pendant 15 minutes. 1/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr MODE D'EMPLOI Refroidir et maintenir le milieu à 47°C. Ajouter stérilement 1 mL de supplément TTC reconstitué (BS026) par flacon. Homogénéiser parfaitement. Couler en boîtes de Petri stériles (l'épaisseur de gélose doit être égale à au moins 5 mm). Laisser solidifier sur une surface froide. Filtrer stérilement sur membrane un volume déterminé de l'échantillon à tester. A la surface des boîtes ainsi préparées ou du milieu pré-coulé (BM147 ou BM093) ramené préalablement à température ambiante, déposer la membrane en veillant à ce que le contact soit parfait. - Incuber à (36 2)°C pendant (21 3) h et (44 4) h [si nécessaire, pour les boîtes ne présentant pas de colonies typiques après (21 3) h]. - LECTURE Examiner les membranes et considérer comme typiques toutes les bactéries lactose-positif, quelle que soit leur taille, si le milieu sous la membrane présente une coloration jaune. Repiquer un nombre représentatif de toutes les colonies typiques obtenues sur une gélose caséinesoja non sélective (BK047, BM017, BM049 ou BM050) et dans un bouillon au tryptophane (BK163 ou BM076), afin de réaliser le test à l’oxydase ainsi que celui de la révélation de la production d’indole à partir du tryptophane, dans le cadre de l’essai standard décrit dans la norme NF EN ISO 9308-1 parue en septembre 2000. Compter comme coliformes toutes les colonies typiques pour lesquelles la recherche de l'oxydase est négative. Toutes les colonies ayant une réaction négative à l’oxydase, mais positive à l’indole, seront considérées comme étant des Escherichia coli. FORMULE - TYPE du milieu complet (pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu : - Peptone pancréatique de viande ...................................................10,0 g - Extrait de viande .............................................................................5,0 g - Extrait autolytique de levure.............................................................6,0 g - Lactose ..........................................................................................20,0 g - Tergitol 7 ..........................................................................................0,1 g - Bleu de bromothymol ..................................................................50,0 mg - Chlorure de 2, 3, 5 triphényltétrazolium ......................................25,0 mg - Agar agar bactériologique ..............................................................10,0 g pH du milieu prêt-à-l'emploi à 25°C : 7,2 ± 0,2. 2/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr CONTRÔLE QUALITE - Milieu de base déshydraté : poudre beige à verdâtre, fluide et homogène. - Milieu préparé complet : gélose bleu vert. - Réponse culturale typique après (21 3) h d'incubation à (36 2)°C : Microorganismes 1 Escherichia coli RIVM WR1 Escherichia coli ATCC® 25922 1 Staphylococcus aureus CIP 53.154 2 1 2 Croissance (Rapport de productivité) Production d'acide 66% R2 150% PR 70% inhibée positive positive Rapport de productivité R2 selon NF T 90-461 Rapport de productivité PR selon XP CEN ISO/TS 11133-2 STOCKAGE / CONSERVATION Milieu de base déshydraté : 2-30°C. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. - Milieu de base préparé en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif). - Milieu complet préparé en boîtes, avec supplément : 30 jours à 2-8°C (à titre indicatif). Milieu préparé (à titre indicatif) : - Milieu de base en flacons : 6 mois à 2-8°C. - Milieu complet en boîtes : 30 jours à 2-8°C. Supplément TTC 12,5 mg : - Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. Milieux pré-coulés en boîtes de Petri : - Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. PRESENTATION Code Milieux (complets) pré-coulés en boîtes de Petri (Ø 55 mm) : - Coffret de 20 boîtes - Coffret de 120 boîtes BM14708 BM09308 Milieu de base déshydraté (sans TTC) : - Flacon de 500 g BK123HA Supplément TTC 12,5 mg : - Coffret de 10 flacons BS02608 3/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr SUPPORT PHOTO : Référence : [BK123HA + BS02608], BM14708, BM09308 Domaine d’utilisation : Isolement et dénombrement d’Escherichia coli et des bactéries coliformes dans les eaux. Escherichia coli Colonie caractéristique Couleur jaune sur gélose ambrée Gélose lactosée au TTC et au Tergitol 7 Réf : BM14708 Incubation 48 heures à 37°C (filtration sur membrane) Colonies caractéristiques jaunes sur une gélose ambrée (fermentation du lactose et l’absence de réduction du TTC) 4/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Pollard, A.L. 1946. A useful selective bactericidal property of Tergitol 7. Science, 103: 758-759. Chapman, G.H. 1947. A superior culture medium for the enumeration and differentiation of coliforms. J. Bacteriol., 53: 504. Chapman, G.H. 1951. A culture medium for detecting and confirming Escherichia coli in ten hours. Am. J. Publ. Health, 41: 1381. Mossel, D.A.A. 1962. An ecological investigation on the usefulness of two pecific modifications of Eijkman’s test as an element of the methods for the detecting of faecal contamination of foods. J. Appl. Bact., 25: 20-29. Rodier, J. 1984. L’analyse de l’eau. Dénombrement des coliformes, coliformes fécaux, et Escherichia coli présumés. Méthode de dénombrement par filtration sur membrane. Dunod 7ème Ed., 798-803. NF EN ISO 9308-1 (T 90-414). Septembre 2000. Qualité de l’eau. Recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes. Partie 1 : Méthode par filtration sur membrane. XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture. NF T 90-461. Juillet 2001 et NF T 90-461/A1. Juin 2005. Qualité de l’eau. Microbiologie. Contrôle qualité des milieux de culture. Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document. Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-03-24. Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis. Code document : BK123/F/2002-10 : 7. 5/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
