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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
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MODE D'EMPLOI
- Refroidir et maintenir le milieu à 47°C.
- Ajouter stérilement 1 mL de supplément TTC reconstitué (BS026) par flacon.
- Homogénéiser parfaitement.
- Couler en boîtes de Petri stériles (l'épaisseur de gélose doit être égale à au moins 5 mm).
- Laisser solidifier sur une surface froide.
- Filtrer stérilement sur membrane un volume déterminé de l'échantillon à tester.
- A la surface des boîtes ainsi préparées ou du milieu pré-coulé (BM147 ou BM093) ramené
préalablement à température ambiante, déposer la membrane en veillant à ce que le contact soit
parfait.
- Incuber à (36 2)°C pendant (21 3) h et (44 4) h [si nécessaire, pour les boîtes ne présentant
pas de colonies typiques après (21 3) h].
LECTURE
Examiner les membranes et considérer comme typiques toutes les bactéries lactose-positif, quelle
que soit leur taille, si le milieu sous la membrane présente une coloration jaune.
Repiquer un nombre représentatif de toutes les colonies typiques obtenues sur une gélose caséine-
soja non sélective (BK047, BM017, BM049 ou BM050) et dans un bouillon au tryptophane (BK163 ou
BM076), afin de réaliser le test à l’oxydase ainsi que celui de la révélation de la production d’indole à
partir du tryptophane, dans le cadre de l’essai standard décrit dans la norme NF EN ISO 9308-1
parue en septembre 2000.
Compter comme coliformes toutes les colonies typiques pour lesquelles la recherche de l'oxydase est
négative. Toutes les colonies ayant une réaction négative à l’oxydase, mais positive à l’indole, seront
considérées comme étant des Escherichia coli.
FORMULE - TYPE du milieu complet
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Peptone pancréatique de viande ...................................................10,0 g
- Extrait de viande .............................................................................5,0 g
- Extrait autolytique de levure.............................................................6,0 g
- Lactose ..........................................................................................20,0 g
- Tergitol 7..........................................................................................0,1 g
- Bleu de bromothymol..................................................................50,0 mg
- Chlorure de 2, 3, 5 triphényltétrazolium......................................25,0 mg
- Agar agar bactériologique..............................................................10,0 g
pH du milieu prêt-à-l'emploi à 25°C : 7,2 ± 0,2.