Université Victor Ségalen Bordeaux-2
UFR Sciences de la Vie
Licences de Biochimie
UE Réactivité et Catalyse enzymatique
Contrôle continu 22 Mars 2004
Amphi 4, 8-10
2 heures
Documents non autorisés
1 . La phosphatase alcaline catalyse l’hydrolyse des esters organiques de l’acide phosphorique.
Cette réaction, étudiée à pH 9,5, est inhibée par le phosphate inorganique.
R – O P + H2O Æ R-OH + Pi
Le graphique doubles-inverses ci-dessous indique que la Vmax mesurée diminue en présence de
l’inhibiteur, tandis que le Km augmente.
X sans inhibiteur
O 1 mM inhibiteur
● 2 mM inhibiteur
1/v
1/[s]
Ecrire l’équation de Michaelis qui décrit ce type d’inhibition (mixte).
Quelle sera la dépendance des paramètres cinétiques (Vmax, Km, Vmax/Km) en fonction de la
concentration d’inhibiteur ? On considère [ I ] >> [ E ]t ;
2. On a mesuré l’affinité du Pi pour la phosphatase alcaline (Kd). On fait des mesures dans la
gamme de pH 4 à 10. On a observé une bonne fixation à pH basique tandis que le Pi se fixe mal à
pH acide.
Exprimer la concentration de complexe en fonction du Kd, de la concentration totale
d’enzyme et de phosphate ( [ Pi ] >> [ E ]t ), du pKa du phosphate et de la [ H+ ].
Montrer que le Kd est fonction linéaire de [ H+ ].
On trouve que le Kd est similaire (identique si pas d’erreurs) à une des Ki de l’exercice 1.
Laquelle ?
L’enzyme n’est pas protonée ni déprotonée dans la gamme de pH étudiée.
Les pKa de l’acide phosphorique sont pKa1 = 2.1, pKa2 = 7.2, pKa3 = 12.6