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Master1
mention: Biologie des Plantes et des Micro-organismes,
Biotechnologies, Bioprocédés
specialité : interactions micro-organismes, hôtes et environnements
Année universitaire 2014-2015
Rapport de stage
Existe-t-il une activation de la
transmission pour le Virus de la
mosaïque du concombre(CMV)?
Doâa DJERRAB
Encadré par Martin DRUCKER, [e-mail]
Période du stage
: du 1er Mars au 30 Juin 2015
A l’INRA de Montpellier UMR BGPI

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SOMMAIRE
INTRODUCTION .............................................................................................................................................. 3
Les modes de transmission ................................................................................................................................. 3
Activation de la transmission ............................................................................................................................. 3
Le CMV ................................................................................................................................................................. 4
1. Biologie du CMV ........................................................................................................................................ 4
2. Le cycle viral................................................................................................................................................. 5
3. Transmission et impact du CMV sur l’économie .................................................................................. 5
Objectif .................................................................................................................................................................. 5
MATERIELS ET METHODES .................................................................................................................... 6
Virus utilisé ............................................................................................................................................................ 6
Choix et Culture des plantes tests et sources ................................................................................................... 6
Pucerons et élevage .............................................................................................................................................. 6
Inoculation mécanique ou par pucerons .......................................................................................................... 6
Préparation de protoplastes ................................................................................................................................ 6
Tests de transmission ........................................................................................................................................... 7
Test de la viabilité des protoplastes ................................................................................................................... 7
Fixation et immunomarquage des protoplastes et d’échantillons de feuilles .............................................. 8
Traitements des protoplastes et feuilles ............................................................................................................ 8
SDS_Page et Western Blot ................................................................................................................................. 9
Dot Blot ................................................................................................................................................................. 9
Microscopie à épifluorescence et Microscopie confocal ................................................................................ 9
RESULTATS ................................................................................................................................... 10
Répartition et localisation du CMV dans les tissus foliaires ........................................................................10
1. Localisation intracellulaire du CMV dans les protoplastes .................................................................10
2. Localisation dans les feuilles ....................................................................................................................10
Test de transmission ..........................................................................................................................................11
1. Détermination de l’âge des plantes et du stade d’infection optimale pour isoler les protoplastes
et faire des tests de transmission ......................................................................................................................11
2. Détermination du temps d’acquisition ..................................................................................................11
3. Effet de différents traitements sur la transmission du CMV .............................................................12
Induction de stress sur les protoplastes ..........................................................................................................12
1. Effet de différents traitements sur la protéine de capside par western blot ....................................12
2. Effet des traitements sur la répartition du CMV par microscopie en immunofluorescence ........13

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CONCLUSION ET PERSPECTIVES ......................................................................................................14
Localisation et répartition du CMV dans les protoplastes ...........................................................................14
Localisation et répartition du CMV dans les tissus foliaires au cours de l’infection ...............................14
Optimisation des tests de transmission ..........................................................................................................14
1. Détermination de l’âge des plantes et du stade d’infection pour faire les tests de transmission ..14
2. Détermination du temps d’acquisition optimal ....................................................................................15
Effet de différents traitements sur la transmission du CMV ......................................................................16
Induction de stress sur les protoplastes ..........................................................................................................16
1. Effet de différents traitements sur la protéine de capside par western blot ....................................16
2. Effet des traitements sur la répartition du CMV par microscopie en immunofluorescence ........16
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES .................................................................................................17
ANNEXE ..............................................................................................................................................................19