TP1-recherche-des-salmonelles

TP1 : Recherche des salmonelles
Introduction :
Découverte en 1880 par Eberthÿ, les Salmonella sont des entérobactéries mésophiles mobiles Gram
- dont les caractères essentiels sont de ne pas fermenter le lactose et de ne pas produire d'uréase. Les
Salmonella sont des parasites de l'homme, des mammifères (rongeurs), des oiseaux (volailles) et des
animaux à sang froid (reptiles). Elles sont responsables, après pénétration par voie orale, de
nombreuses infections (salmonelloses), notamment des fièvres typhoïde et paratyphoïdes, des
gastro-entérites et des toxi-infections alimentaires collectives (TIAC).
Le but de ce TP est d’effectuer une recherche de salmonella dans des prélèvements réalisés sur le
cloaque du poulet de chair.
La recherche de salmonelle se réalise en trois étapes :
� Un enrichissement du milieu permettant la croissance sélective de salmonella,
� Un isolement sur milieu spécifique permettant de mettre en évidence les caractères cataboliques
de Salmonella.
� Une identification par une galerie de tests biochimiques.
Description des étapes :
I. Enrichissement :
Elle comporte
I.1 PRÉ-ENRICHISSEMENT
Cette étape est réalisée en Eau Peptonée Tamponnée (EPT) : c’est un milieu liquide, non sélectif,
qui permet la croissance des bactéries sans exigences nutritives particulières, ce qui est le cas des
Salmonella.
Un pré-enrichissement permet :
--une revivification des micro-organismes présents dans l’échantillon et ayant été stressés par des
traitements au froid, à la chaleur, par une exposition à des biocides ou par la dessiccation ;
--une augmentation non spécifique du nombre de tous les micro-organismes présents dans la masse
(volume) de produit analysé (si cette étape dure suffisamment longtemps pour permettre la
multiplication).
I.2 ENRICHISSEMENT SÉLECTIF
Cette étape est réalisée en transférant une aliquote du bouillon de pré-enrichissement dans un
bouillon sélectif : bouillon au sélénite, bouillon de Rappaport-Vassiliadis ou bouillon de Müller-
Kauffman au tétrathionate.

L’objectif de l’étape d’enrichissement sélectif est de favoriser la croissance des bactéries du genre
Salmonella tout en inhibant la croissance des autres bactéries. Après incubation (24 h à 37 °C), les
Salmonella (si elles sont présentes dans l’aliment) se retrouvent alors majoritaires dans le bouillon
utilisé. Un enrichissement sélectif permet une augmentation significative et spécifique du nombre
de micro organismes recherchés.
II. ISOLEMENT SÉLECTIF SUR MILIEU GÉLOSÉ SÉLECTIF ET
DISCRIMINATIF
Nous allons donc ensemencer les milieux SS et hektoën à partir des bouillons d’enrichissement.
� L’ensemencement se fait d’après la méthode des cadrans.
� L’incubation des milieux sélectifs se fait à 37°C pendant 48h.
Ces milieux sont donc tous :
--sélectifs de bactéries d’origine intestinale dont font partie les Salmonella ;
--discriminatifs (mise en évidence de caractères biochimiques spécifiques aux Salmonella comme la
dégradation ou non de tel ou tel glucide, la réduction du thiosulfate et la production d’H2S). Après
24 heures d’incubation à 37 °C en aérobiose, on peut y observer des colonies suspectes.