15.antibiotiques-2018

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15 : Les antibiotiques
Les bactries sont partout et nous sommes en contact permanent avec ces micro‐ organismes (voir
exprience 8). Lorsque l’on voque les bactries, on pense tout de suite aux maladies, aux infections,
 la mortalit causes par ces microbes. Cependant seule une minorit des bactries peut causer des
infections et nous rendre malade. L’avnement des antibiotiques au dbut du XXe sicle a permis de
faire reculer d’une manire extraordinaire la mortalit lie aux infections. Malheureusement les
mdecins doivent maintenant faire face avec de nombreuses souches bactriennes devenues
rsistantes  de nombreux antibiotiques.
En 1928 Alexandre Flemming, un mdecin cossais, remarqua qu’un champignon, la moisissure
Penicillium notatum (actuellement dnomm Penicillium chrysogenum), tait capable de produire une
substance qui inhibait la croissance de certaines bactries. Ce fut le dbut de l’ère des antibiotiques !
La pnicilline était découverte.
En analyse mdicale il est courant de tester si la bactrie responsable d’une infection est rsistante ou
non  diffrents antibiotiques afin de donner un antibiotique appropri pour garantir le traitement
efficace. Cette analyse peut tre effectue par un antibiogramme dont le protocole est dcrit ci‐
dessous
L’EXPERIENCE :
Cette exprience est prvue avec 2 souches d’Escherichia coli. Une rsistante  l’ampicilline (AmpR) et
une autre sensible (AmpS). La moiti de la classe effectuera la manipulation avec l’une des souches et
l’autre moiti de la classe utilisera la deuxime souche. La bactrie AmpR possde un plasmide
contenant une enzyme capable d’inactiver l’ampicilline (voir exprience 4).
Des disques imprgns d’antibiotiques sont dposs sur un gazon de bactries  tester. L’antibiotique
va diffuser dans le milieu de culture. La concentration sera leve au bord du disque et de plus en plus
faible  mesure que l’on s’en loigne. Si la bactrie est sensible, une zone d’inhibition (absence de
croissance de la bactrie) sera visible autour du disque. Plus la bactrie est sensible, plus la zone
d’inhibition sera grande. En mesurant le diamtre de la zone d’inhibition et en la comparant  des
tables de rfrence il est ainsi possible de savoir si la bactrie est sensible ou rsistante  cet
antibiotique.
Les antibiotiques utiliss ici sont :
• Le chloramphnicol (disque C30) inhibe la synthèse des protéines en agissant sur le ribosome
bactérien (de type 70S) et est sans effet sur les ribosomes 80S des cellules eucaryotes.
• L’ampicilline (disque Am) est une pénicilline modifiée qui agit sur la synthèse de la paroi et
peut traverser facilement la membrane externe des bactéries Gram‐ ngatives.
• La pénicilline G (disque P) agit sur la synthse de la paroi mais ne peut pas traverser la
membrane externe des bactéries Gram‐ngatives (voir expérience 5). Celles‐ci, comme E. coli,
sont donc résistantes naturellement  la pnicilline G.

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PROTOCOLE
Attention : travaillez stérilement  côt́ d'une flamme!
1. A l’aide d’un inoculateur, prlevez un peu de bactrie que vous ressuspendez dans votre
tube Eppendrof contenant 1 ml d’eau physiologique strile (NaCl 0.9%).
2. Imbiber un couvillon strile dans la suspension. Essorer lgrement contre la paroi du
tube et frotter l’couvillon sur une nouvelle bote de ptri.
Il est important d’effectuer des stries serres afin de dposer des bactries sur toute la
bote en grande quantit. Rpter l’opration en tournant la bote d’un tiers pour strier
dans une autre direction. Rpter une troisime fois l’opration en tournant encore la
bote d’un tiers.
3. A l’aide d’une pince strile (flambe  l’alcool), dposez les diffrents disques
d’antibiotique en prenant exemple sur le schma ci‐aprs et appuyez lgrement dessus.

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4. Incubez les ptris 24h  37 °C (ou 48h  temprature ambiante) puis observez les
rsultats et mesurez les zones d’inhibitions.
RESULTATS
Les diamètres des zones d’inhibition sont indiqués par les traits blancs
Table de références pour l'interprétation des résultats :
Diamètre en mm. Les valeurs intermédiaires signifient que la bactérie possède une certaine résistance
mais un traitement avec dose maximale d’antibiotique est encore possible.
Antibiotique
Résistant (R)
Intermédiaire (I)
Sensible (S)
Ampicilline
 13
14-16
 29
Pénicilline G
 28
-
 29
Chloramphénicol
 12
13-17
 18
Matriel fourni :
• 20 boites LBA
• 20 pastilles de chaque antibiotique (Amp, C, P)
• Ecouvillons stériles
• H2O physiologique stérile
• Tubes Eppendorf stériles
• Souches de bactéries (E.coli AmpS et E.coli Amp R)
• Sac rouge