Universite de Sherbrooke INFLUENCE DE CA125 SUR LE PROCESSUS DE TRANSITION

Universite de Sherbrooke
INFLUENCE DE CA125 SUR LE PROCESSUS DE TRANSITION
EPITHELIUM-MESENCHYMATEUSE DES CELLULES
DE CANCER DE L'OVAIRE
par
Marina Comamala Torres
Departement de Microbiologic et Infectiologie
Memoire presente a la Faculte de Medecine et des Sciences de la Sante
en vue de l'obtention du grade de maitre es sciences (M.Sc.) en Microbiologic
Evaluateurs : Du Departement de Microbiologic et d'Infectiologie, Dre. Claudine Rancourt
(Directrice des travaux) et Dr. Antonio Conconi et du Departement de Biologie Cellulaire,
Dr. Jean Francois Beaulieu
Janvier 200*1

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TABLE DES MATIERES
Table des matieres — I
Liste des figures VI
Liste des tableaux X
Liste des sigles et abreviations— XI
Resume
INTRODUCTION
1. Le cancer 1
1.1 Generalites 1
1.2 Carcinogenese 2
1.2.1 Oncogenes et genes suppresseurs de tumeurs- 2
1.2.2 Mutagenes et carcinogenes 4
1.2.3 Avantages acquis par une cellule cancereuse 5
1.2.3.1 L'autosuffisance aux signaux de croissance 6
1.2.3.2 L'insensibilite aux facteurs inhibiteurs de croissance 8
1.2.3.3 La resistance a l'apoptose— 8
1.2.3.4 L'immortalisation des cellules 9
1.2.3.5 L'angiogenese 10
1.2.3.6 L'invasion et la formation de metastase 10
1.3 Progression tumorale des carcinomes 11
2. Interactions cellule-cellule 12
2.1 Les complexes de jonction : les jonctions adherentes et les cadherines 16
2.2 Certains roles des cadherines classiques dans les cellules et les tissus 18
2.3 E-cadherine : suppresseur de l'invasion des tumeurs epitheliales 19
3. Transition epithelio-mesenchymateuse (EMT) 21
I

3.1 Caracteristiques des cellules epitheliales et mesenchymateuses 23
3.2 L'importance du processus d'EMT 26
3.3 Evenements moleculaires qui regulent l'EMT 27
4. Le cancer de l'ovaire 32
4.1 Facteurs de risques associes au cancer de l'ovaire 33
4.2 Classification du cancer de l'ovaire 35
4.3 Presentation clinique, diagnostic et traitement du cancer ovarien 36
4.4 Processus d'EMT dans la physiologie des ovaires, developpement et
progression tumorale — 37
5. Glycoproteins multifonctionnelles: les mucines 39
5.1 Les mucines dans le developpement du cancer de l'ovaire et autres cancers 43
5.2 MUC16(CA125) 46
5.2.1 Decouverte de MUC16 47
5.2.2 La structure et les domaines de CA125 43
5.2.3 CA125: marqueur antigenique du cancer de l'ovaire 53
5.2.4 Les fonctions proposees de CA125 55
6. Modeles cellulaires etablis au laboratoire permettant l'etude fonctionnelle de
CA125 — 56
6.1 Modele de perte de fonction (knockdown) 57
6.2 Modele gain de fonction : expression des domaines cytoplasmiques de
CA125 — 59
6.3 Modele gain de fonction : expression des domaines extracellulaires de CA125— 61
6.4 Resultats obtenus dans le laboratoire permettant d'etablir une relation entre
CA125 et le potentiel metastatique des cellules de cancer de l'ovaire 64
7. Hypothese et objectifs du projet 65
MATERIEL ET METHODES-- 67
8. Lignees cellulaires utilisees et culture cellulaire 67
9. Essai de migration par blessure de la monocouche de cellules 68
\
II

10. Essai de migration a l'aide des chambres,de Boyden 69
11. Immunofluorescence indirecte sur lame 70
12. Microscopie electronique 72
13. Lyse cellulaire 72
14. Dosage de proteines 73
15. Gel SDS-PAGE et immunobuvardage de type western 74
16. Exposition des cellules aux differents facteurs de croissance 76
17. Exposition des cellules aux divers inhibiteurs des molecules de signalisation— 77
RESULTATS 78
18. Evaluation des capacites migratoires du modele perte de fonction (CA125
knockdown) 78
19. Analyse des proteines des jonctions cellulaires et du cytosquelette du modele
perte de fonction (CA125 knockdown) 82
19.1 Changement de la localisation et de l'expression d'E-cadherine dans les
cellules CA125 knockdown 82
19.2 Modification de la localisation et de l'expression de claudine-7 dans les clones
CA125 knockdown 85
19.3 Modifications observees de certaines proteines du cytosquelette dues a la perte
de CA125 de la membrane cellulaire 88
19.3.1 Cytokeratine8-18 88
19.3.2 F-actine 90
19.4 Expression des marqueurs mesenchymateux chez les cellules du cancer de
l'ovaire CA125 knockdown 92
19.4.1 Vimentine 92
19.4.2 N-cadherine 94
20. Caracterisation des jonctions cellulaires par microscopie electronique chez le
modele perte de fonction de CA125 96
III