Période d’incubation pour les plaques AC et CC 8. La période d’incubation requise est : Inoculation de la plaque PetrifilmMC STX 10. Étalement du lait sur la plaque CC (rouge) 1. Inoculation Déposez délicatement le côté plat de l’étaleur (RED doit être vers vous si vous utilisez celui de MQM) sur la pellicule et presser légèrement pour répartir le lait. • 24 heures pour la plaque de numération des bactéries aérobies - AC • 24 heures pour la plaque de numération des coliformes - CC Soulevez la pellicule et déposez 1 ml de lait dilué, perpendiculairement et directement au centre de la plaque, sans la toucher avec la seringue. Déroulez lentement la pellicule sur le lait. Interprétation des résultats 9. • L’interprétation des résultats peut nécessiter l’assistance d’un médecin vétérinaire pour confirmer le diagnostic. • Établissez également avec lui un protocole de traitement approprié selon les résultats obtenus. • La catégorisation en Gram positif, Gram négatif et Aucune croissance peut être réalisée grâce aux plaques AC et CC. Un guide d’interprétation est disponible sur www.milkquality.ca 2. Étalement du lait Déposez délicatement l’étaleur rond et plat sur la pellicule et pressez légèrement pour répartir le lait. 3. Période d’incubation Incubez la plaque STX à 35 °C pendant 24 heures. • Pour les cultures Staph Express (STX) positives et confirmées par le disque mauve, traitez ces cas selon les directives de votre médecin vétérinaire. Dépôt des plaques dans l’incubateur Déposez délicatement les plaques dans l’incubateur préchauffé à la bonne température (35 °C). Assurez-vous qu’il contienne un peu d’eau pour maintenir une légère humidité. 4. Insertion du disque mauve Insérez le disque mauve entre la pellicule et la plaque. Suite à l’insertion du disque, incubez 3 heures de plus à 35 °C. Procédez à l’interprétation. Ce document peut être reproduit en version intégrale seulement, à des fins éducationnelles, sans autre permission, si les crédits sont accordés au RCRMB. Outil rapide d’identification à la ferme des bactéries causant la mammite Système décisionnel pour le traitement de la mammite Pourquoi utiliser cet outil? Comment ça fonctionne? La mammite est la cause première de l’utilisation des antibiotiques sur les fermes laitières. Différents types de bactéries peuvent infecter le pis. Certaines d’entre elles ont des taux élevés d’autoguérison ou répondent mal aux traitements. Il est important de bien les identifier pour aider le producteur et son médecin vétérinaire à cibler le traitement à administrer, s’il y a lieu, sans toutefois nuire ou retarder la guérison. L’identification de la bactérie est faite par la culture de lait infecté sur une plaque contenant des nutriments qui favorisent la croissance des bactéries. Une période d’incubation d’environ 24 heures est nécessaire pour que la plaque révèle la présence de colonies de bactéries. Plusieurs types de plaques, avec des nutriments spécifiques, peuvent être utilisés pour identifier les bactéries présentes dans le lait. La catégorie de bactéries est déterminée selon la croissance et le nombre de colonies sur les plaques spécifiques. Une technique de coloration en laboratoire permet de classifier la plupart des bactéries en deux catégories : Bactéries Gram positif Bactéries Gram négatif • Principalement des staphylocoques et des streptocoques • Principalement des coliformes • Paroi cellulaire mince • Paroi cellulaire très épaisse qui protège des effets de la plupart des antibiotiques, détergents et produits chimiques • Contiennent des lipopolysaccharides toxiques • Ne répondent pas bien aux traitements antibiotiques Exemples de bactéries Gram + et Gram Gram positif Gram négatif Staphylococcus aureus Staphylococcus spp. Streptococcus uberis Streptococcus dysgalactiae Streptococcus agalactiae Corynebacterium bovis Escherichia coli Klebsiella spp. Enterobacter spp. Serratia spp. Pasteurella spp. Avantages • Permet de mieux cibler les cas causés par des bactéries Gram + (donc à traiter) • Identification plus rapide des bactéries que la culture bactériologique en laboratoire (sans pour autant la remplacer) • Usage plus rationnel des antibiotiques • Réduction des pertes de lait • Diminution des risques de résidus d’antibiotiques dans le lait Limites • Minutie requise pour réaliser la technique en évitant la contamination • Interprétation influencée par l’expérience et la formation de l’usager • Identification impossible des mycoplasmes et des levures (dont le traitement n’est pas recommandé) w w w. re s e a u m a m m i t e . o rg 01/09/10 Les bactéries Gram + et Gram – Outil rapide d’identification à la ferme des bactéries causant la mammite Système décisionnel pour le traitement de la mammite MISE EN GARDE • Le système de culture à la ferme doit être utilisé pour des cas légers ou modérés de mammite (grade 1 ou 2) sans présence de fièvre (< 39,5 °C) ou de maladies graves. • Il est essentiel d’élaborer un protocole d’échantillonnage et un protocole de traitement associés à l’utilisation de ce système avec votre médecin vétérinaire. 1 • Si les symptômes cliniques s’aggravent, prenez des mesures immédiatement et consultez votre médecin vétérinaire. Matériel nécessaire 2 Le système décisionnel pour le traitement de la mammite de MQM utilise les plaques de numération PetrifilmMC conçues par 3MMC pour identifier les bactéries causant la mammite dans le lait. Pour commander la Trousse de MQM, contactez votre médecin vétérinaire ou : Inclus dans la Trousse du Maritime Quality Milk (MQM) : • Plaques PetrifilmMC pour numération des coliformes (GRAM –) cercle rouge avec styromousse portant le code CC 1 • Plaques PetrifilmMC pour numération des bactéries aérobies (GRAM +) blanches sans styromousse portant le code AC 2 3 • Étaleur (surface striée et surface lisse) • Seringues de 3 ml • Flacons stériles d’échantillonnage • Flacons de diluant (eau physiologique 0,9 % NaCl ou tampon phosphate) • Tampons de gaze imbibés d’alcool Entreposage et manutention des plaques de la Trousse MQM Non inclus dans la Trousse MQM : • Incubateur* • Gants de nitrile • La durée de conservation est de 1 an à la température ambiante Pour commander directement les produits PetrifilmMC ou pour consulter un représentant, veuillez contacter : • Éviter la salle de traite et la laiterie (humidité élevée) • Plaques PetrifilmMC Staph Express (staphylocoques) : cercle blanc avec styromousse portant le code STX 3 et disque mauve Staph Express (optionnel pour la détection de Staph. aureus) • Étaleur pour Staph Express (rond et plat) 3M Canada • Conserver la plaque dans son emballage individuel jusqu’à son utilisation À la ferme, à la maison ou à la clinique vétérinaire, installez le « laboratoire » dans un endroit propre et sec pour éviter la contamination. * L’incubateur recommandé est le Turbofan Hova-Bator modèle 1602, disponible auprès de votre magasin local de fournitures agricoles ou consultez internet pour connaître le point de vente le plus près. Maritime Quality Milk 550, avenue University Charlottetown, Île-du-Prince-Édouard Canada C1A 4P3 Tél. : 902-566-6489 / Téléc. : 902-620-5053 Courriel : [email protected] www.milkquality.ca Tél.: 1-800-563-2921 • Ne pas exposer à la lumière du soleil et jeter toute plaque décolorée • Ne pas toucher à la surface de la plaque Les plaques vendues séparément de la Trousse MQM et non scellées, doivent être congelées. Sources et crédits photos : Maritime Quality Milk (MQM), Charlottetown, IPE 3M Canada Inoculation des plaques PetrifilmMC AC et CC Échantillonnage du lait 1. • La qualité de l’échantillon de lait prélevé est primordiale pour obtenir de bons résultats. Utilisez un flacon d’échantillonnage propre. Matériel Préparez tout le matériel nécessaire avant de débuter. • La technique de prélèvement doit être stérile afin d’éviter la contamination de l’échantillon et une interprétation erronée. • Pour vous aider, consultez la fiche pratique illustrée Technique d’échantillonnage du lait pour analyse bactériologique ou la vidéo L’ABC de l’échantillonnage du lait pour l’analyse bactériologique produites par le RCRMB. www.reseaumammite.org 2. 5. 4. 3. Dilution du lait Ouvrez le flacon contenant 45 ml d’eau et ajoutez environ 5 ml de lait infecté afin d’atteindre la ligne de 50 ml. Fermez les deux flacons. Identifiez bien le flacon contenant le lait infecté non utilisé et congelez-le pour l’envoi au laboratoire, si nécessaire. 6. Préparation du mélange Mesure du lait dilué Effectuez doucement une rotation du flacon pour diluer le lait dans l’eau. Prélevez environ 2 ml de lait dilué avec la seringue. Inoculation des plaques Soulevez la pellicule et déposez 1 ml de lait dilué directement au centre de chaque plaque sans la toucher avec la seringue. Pour la plaque CC, déroulez lentement la pellicule sur le lait. AC CC CC Pour la plaque AC, laissez tomber la pellicule d’un coup sans la dérouler. Pour toutes les plaques : ne touchez pas à la surface de la plaque. 7. Étalement du lait sur la plaque AC (blanche) Déposez délicatement le côté strié de l’étaleur (WHITE doit être vers vous si vous utilisez celui de la trousse MQM) sur la pellicule et pressez légèrement pour répartir le lait. Outil rapide d’identification à la ferme des bactéries causant la mammite Système décisionnel pour le traitement de la mammite MISE EN GARDE • Le système de culture à la ferme doit être utilisé pour des cas légers ou modérés de mammite (grade 1 ou 2) sans présence de fièvre (< 39,5 °C) ou de maladies graves. • Il est essentiel d’élaborer un protocole d’échantillonnage et un protocole de traitement associés à l’utilisation de ce système avec votre médecin vétérinaire. 1 • Si les symptômes cliniques s’aggravent, prenez des mesures immédiatement et consultez votre médecin vétérinaire. Matériel nécessaire 2 Le système décisionnel pour le traitement de la mammite de MQM utilise les plaques de numération PetrifilmMC conçues par 3MMC pour identifier les bactéries causant la mammite dans le lait. Pour commander la Trousse de MQM, contactez votre médecin vétérinaire ou : Inclus dans la Trousse du Maritime Quality Milk (MQM) : • Plaques PetrifilmMC pour numération des coliformes (GRAM –) cercle rouge avec styromousse portant le code CC 1 • Plaques PetrifilmMC pour numération des bactéries aérobies (GRAM +) blanches sans styromousse portant le code AC 2 3 • Étaleur (surface striée et surface lisse) • Seringues de 3 ml • Flacons stériles d’échantillonnage • Flacons de diluant (eau physiologique 0,9 % NaCl ou tampon phosphate) • Tampons de gaze imbibés d’alcool Entreposage et manutention des plaques de la Trousse MQM Non inclus dans la Trousse MQM : • Incubateur* • Gants de nitrile • La durée de conservation est de 1 an à la température ambiante Pour commander directement les produits PetrifilmMC ou pour consulter un représentant, veuillez contacter : • Éviter la salle de traite et la laiterie (humidité élevée) • Plaques PetrifilmMC Staph Express (staphylocoques) : cercle blanc avec styromousse portant le code STX 3 et disque mauve Staph Express (optionnel pour la détection de Staph. aureus) • Étaleur pour Staph Express (rond et plat) 3M Canada • Conserver la plaque dans son emballage individuel jusqu’à son utilisation À la ferme, à la maison ou à la clinique vétérinaire, installez le « laboratoire » dans un endroit propre et sec pour éviter la contamination. * L’incubateur recommandé est le Turbofan Hova-Bator modèle 1602, disponible auprès de votre magasin local de fournitures agricoles ou consultez internet pour connaître le point de vente le plus près. Maritime Quality Milk 550, avenue University Charlottetown, Île-du-Prince-Édouard Canada C1A 4P3 Tél. : 902-566-6489 / Téléc. : 902-620-5053 Courriel : [email protected] www.milkquality.ca Tél.: 1-800-563-2921 • Ne pas exposer à la lumière du soleil et jeter toute plaque décolorée • Ne pas toucher à la surface de la plaque Les plaques vendues séparément de la Trousse MQM et non scellées, doivent être congelées. Sources et crédits photos : Maritime Quality Milk (MQM), Charlottetown, IPE 3M Canada Inoculation des plaques PetrifilmMC AC et CC Échantillonnage du lait 1. • La qualité de l’échantillon de lait prélevé est primordiale pour obtenir de bons résultats. Utilisez un flacon d’échantillonnage propre. Matériel Préparez tout le matériel nécessaire avant de débuter. • La technique de prélèvement doit être stérile afin d’éviter la contamination de l’échantillon et une interprétation erronée. • Pour vous aider, consultez la fiche pratique illustrée Technique d’échantillonnage du lait pour analyse bactériologique ou la vidéo L’ABC de l’échantillonnage du lait pour l’analyse bactériologique produites par le RCRMB. www.reseaumammite.org 2. 5. 4. 3. Dilution du lait Ouvrez le flacon contenant 45 ml d’eau et ajoutez environ 5 ml de lait infecté afin d’atteindre la ligne de 50 ml. Fermez les deux flacons. Identifiez bien le flacon contenant le lait infecté non utilisé et congelez-le pour l’envoi au laboratoire, si nécessaire. 6. Préparation du mélange Mesure du lait dilué Effectuez doucement une rotation du flacon pour diluer le lait dans l’eau. Prélevez environ 2 ml de lait dilué avec la seringue. Inoculation des plaques Soulevez la pellicule et déposez 1 ml de lait dilué directement au centre de chaque plaque sans la toucher avec la seringue. Pour la plaque CC, déroulez lentement la pellicule sur le lait. AC CC CC Pour la plaque AC, laissez tomber la pellicule d’un coup sans la dérouler. Pour toutes les plaques : ne touchez pas à la surface de la plaque. 7. Étalement du lait sur la plaque AC (blanche) Déposez délicatement le côté strié de l’étaleur (WHITE doit être vers vous si vous utilisez celui de la trousse MQM) sur la pellicule et pressez légèrement pour répartir le lait. Période d’incubation pour les plaques AC et CC 8. La période d’incubation requise est : Inoculation de la plaque PetrifilmMC STX 10. Étalement du lait sur la plaque CC (rouge) 1. Inoculation Déposez délicatement le côté plat de l’étaleur (RED doit être vers vous si vous utilisez celui de MQM) sur la pellicule et presser légèrement pour répartir le lait. • 24 heures pour la plaque de numération des bactéries aérobies - AC • 24 heures pour la plaque de numération des coliformes - CC Soulevez la pellicule et déposez 1 ml de lait dilué, perpendiculairement et directement au centre de la plaque, sans la toucher avec la seringue. Déroulez lentement la pellicule sur le lait. Interprétation des résultats 9. • L’interprétation des résultats peut nécessiter l’assistance d’un médecin vétérinaire pour confirmer le diagnostic. • Établissez également avec lui un protocole de traitement approprié selon les résultats obtenus. • La catégorisation en Gram positif, Gram négatif et Aucune croissance peut être réalisée grâce aux plaques AC et CC. Un guide d’interprétation est disponible sur www.milkquality.ca 2. Étalement du lait Déposez délicatement l’étaleur rond et plat sur la pellicule et pressez légèrement pour répartir le lait. 3. Période d’incubation Incubez la plaque STX à 35 °C pendant 24 heures. • Pour les cultures Staph Express (STX) positives et confirmées par le disque mauve, traitez ces cas selon les directives de votre médecin vétérinaire. Dépôt des plaques dans l’incubateur Déposez délicatement les plaques dans l’incubateur préchauffé à la bonne température (35 °C). Assurez-vous qu’il contienne un peu d’eau pour maintenir une légère humidité. 4. Insertion du disque mauve Insérez le disque mauve entre la pellicule et la plaque. Suite à l’insertion du disque, incubez 3 heures de plus à 35 °C. Procédez à l’interprétation. Ce document peut être reproduit en version intégrale seulement, à des fins éducationnelles, sans autre permission, si les crédits sont accordés au RCRMB. Outil rapide d’identification à la ferme des bactéries causant la mammite Système décisionnel pour le traitement de la mammite Pourquoi utiliser cet outil? Comment ça fonctionne? La mammite est la cause première de l’utilisation des antibiotiques sur les fermes laitières. Différents types de bactéries peuvent infecter le pis. Certaines d’entre elles ont des taux élevés d’autoguérison ou répondent mal aux traitements. Il est important de bien les identifier pour aider le producteur et son médecin vétérinaire à cibler le traitement à administrer, s’il y a lieu, sans toutefois nuire ou retarder la guérison. L’identification de la bactérie est faite par la culture de lait infecté sur une plaque contenant des nutriments qui favorisent la croissance des bactéries. Une période d’incubation d’environ 24 heures est nécessaire pour que la plaque révèle la présence de colonies de bactéries. Plusieurs types de plaques, avec des nutriments spécifiques, peuvent être utilisés pour identifier les bactéries présentes dans le lait. La catégorie de bactéries est déterminée selon la croissance et le nombre de colonies sur les plaques spécifiques. Une technique de coloration en laboratoire permet de classifier la plupart des bactéries en deux catégories : Bactéries Gram positif Bactéries Gram négatif • Principalement des staphylocoques et des streptocoques • Principalement des coliformes • Paroi cellulaire mince • Paroi cellulaire très épaisse qui protège des effets de la plupart des antibiotiques, détergents et produits chimiques • Contiennent des lipopolysaccharides toxiques • Ne répondent pas bien aux traitements antibiotiques Exemples de bactéries Gram + et Gram Gram positif Gram négatif Staphylococcus aureus Staphylococcus spp. Streptococcus uberis Streptococcus dysgalactiae Streptococcus agalactiae Corynebacterium bovis Escherichia coli Klebsiella spp. Enterobacter spp. Serratia spp. Pasteurella spp. Avantages • Permet de mieux cibler les cas causés par des bactéries Gram + (donc à traiter) • Identification plus rapide des bactéries que la culture bactériologique en laboratoire (sans pour autant la remplacer) • Usage plus rationnel des antibiotiques • Réduction des pertes de lait • Diminution des risques de résidus d’antibiotiques dans le lait Limites • Minutie requise pour réaliser la technique en évitant la contamination • Interprétation influencée par l’expérience et la formation de l’usager • Identification impossible des mycoplasmes et des levures (dont le traitement n’est pas recommandé) w w w. re s e a u m a m m i t e . o rg 01/09/10 Les bactéries Gram + et Gram –