Evaluation de la désinfection des endoscopes digestifs
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14/12/2014 Université Abou-Bekr Belkaid Tlemcen FACULTE DES SNV/STU – Tlemcen Laboratoire de Microbiologie Appliquée à l’Agroalimentaire, au Biomédical et à l’Environnement (LAMAABE) مختبر الميكربيولوجيب التطبيقية لالغدية للبيوطبي وللبيئة Equipe : Hygiène Hospitalière EVALUATION DE LA CONTAMINATION BACTERIENNE DES ENDOSCOPES DIGESTIFS AU SERVICE DE GASTRO-ENTEROLOGIE CHU TLEMCEN Pr. H. HASSAINE XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 1 Introduction Hygiène ,la contamination des dispositifs médicaux problème dans le secteur hospitalier Les infections associées aux soins sont devenues au fil de ces dernières années Véritable enjeu de santé publique Conséquences lourdes financières et morales L’endoscopie est très répandue dans le monde Les endoscopies digestives sont des actes diagnostiques et thérapeutiques très fréquemment pratiqués au service de gastro-entérologie Plus de 3000 actes endoscopiques digestifs /an sont réalisés au CHU de Tlemcen Ces gestes ne sont pas dénués de risques pour les patients, risques liés au geste lui-même, mais également à l’utilisation de matériels réutilisables La question du risque infectieux associé à cet examen est toujours d’actualité 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 3 Endoscopie digestive et risque infectieux Complications Infectieuses Exogènes Endogènes La propre flore des patients Streptocoques, Staphylococcus spp Escherichia coli Klebsiella pneumoniae 14/12/2014 Transmission de microorganismes de patient à patient via * Endoscope préalablement utilisé qui n’a pas été adéquatement nettoyé ou retraité. * microorganismes présents dans l’environnement, sur la peau ou dans l’eau). XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 4 Plusieurs dysfonctionnements sur le plan de l’hygiène ont été retrouvés. Pseudomonas aeruginosa , Serratia spp , E.coli Sont des microorganismes les plus fréquemment isolés en raison de leur capacité à s’adhérer et peuvent vivre plusieurs semaine ds des endroits humides 14/12/2014 former un biofilm au sein des canaux des endoscopes. XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 5 Du fait de leur conception, les endoscopes souples ne sont pas stérilisables et nécessitent des procédures spécifiques de nettoyage et de désinfection La complexité de la structure des endoscopes La sensibilité à la chaleur des endoscopes Points d’ancrage des germes Des substrats favorables à la multiplication de micro-organismes Contamination de patients par l’intermédiaire des 14/12/2014 biofilms formés à l’intérieur des endoscopes XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 6 Canaux et Capacités Canal Air 0.7 mm Canal Irrigation 0.7 mm Canal à Biopsie 4.2 mm Canal d ’aspiration 4.2 mm Canal CO2 Canal Water jet Canal élévateur 0.7 mm 0.7 mm 0.15 mm Procédure de désinfection défaillante Pseudomonas aeruginosa , Serratia spp E.coli …. 14/12/2014 Biofilm au sein des canaux des endoscopes. Un risque de transmission d’infections associées aux soins XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 8 Les biofilms sont partout 10 Le biofilm serait le mode de vie naturel de la plupart des microorganismes, notamment en milieu hostile 99% des bactéries sont fixées à des supports solides dans les écosystèmes : DM, Eau, Sol et Surfaces 12 Définition d’un biofilm Ce qui ne tue pas endurcit ! Un biofilm est une communauté de microorganismes (bactéries, champignons etc.) adhérant entre eux, fixée à une surface, et caractérisée par la sécrétion d'une matrice polysaccharides ( peptidoglycanes, cellulose) imbibée d'eau, adhésive et protectrice. On sait aujourd’hui que les bactéries sont capables de communiquer entre elles (Quorum Sensing) et de vivre en association : Biofilm. Ensemble on est plus fort Ils sont à l’origine de nombreuses infections chroniques Le biofilm Est –il dangereux ? Le biofilm est véritable problème Biofilm et endoscope Surface interne du canal opérateur d’un endoscope Neuf 600 Utilisations 14/12/2014 Le prélèvement microbiologique des canaux internes des endoscopes reste un outil de référence pour l’évaluation de la qualité microbiologique des endoscopes Recherche des biofilms indicateur de la qualité des procédures de traitement des endoscopes. XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 19 Essayer de vérifier l’état de contamination et formation de biofilm bactérien dans les endoscopes du service gastro-entérologie du « CHU Tlemcen » Essayer de vérifier l’efficacité des procédures de nettoyage appliquées au niveau de ce service Essayer de Proposer quelques perspectives et 14/12/2014 correctives XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 20 2 endoscopes 7 Prélèvements 3 : avant acte endoscopique Après durée de stockage > à 12h 4 :Juste Après désinfection réalisée après un acte endoscopique Réalisés en deux phases Injection d’une solution de décrochage des micro-organismes dans •Canal opérateur •Canal d’aspiration •Canal insufflation 14/12/2014 Ecouvillonnage Brossage XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 21 Matériel et méthodes 14/12/2014 1- Injection de la solution de décrochage( 2X 50mL Twin+Thio) Solutions récupérées Gélose nutritive Dénombrement Gélose Mac Conkey Bactéries à Gram (-) Gélose Chapman Bactéries Gram (+) XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 22 Matériel et méthodes 14/12/2014 2- Ecouvillonnage et Brossage/ diamètre du canal Brosse stérile 5ml d’eau physiologique Ecouvillon Sonication Vortexage (20sec) Gélose nutritive Mac Conkey Chapman XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 23 Matériel et méthodes Identification des souches caractères macroscopiques caractères microscopiques Coloration de Gram Détection de Capsule caractères biochimiques Api 20 E Api Staph Api NE Matériel et méthodes Evaluation de la formation du biofilm in vitro Technique qualitative Rouge Congo Technique quantitative Méthode en Tube TM Méthode de Plaque de Culture de Tissus 2) RCA : Production de Slime (Ziebuhr et al., 2001) Milieu au rouge Congo Milieu ensemencé une colonie/20ml EDS Une nuit à 37°c et 24h à T° ambiante PIA (+) Colonies rugueuses polysaccaharide intracellulair adhesin PIA (-) Colonies rouge lisses Evaluation de la l’adhésion du biofilm DO ≤ DOt DOt ≤ DO ≤ DOt×2 DOt×2 ≤ DO ≤ DOt×4 DO×4 ≤ DO Pas adhésion Faible Modérée Forte 27 Evaluation de l’efficacité de l’agent désinfectant sur le biofilm Les biofilms formés sur microplaque ont été rincées et placées en contact avec différentes concentrations du désinfectant :( désinfectant pure, 1/33 et 1/100) 14/12/2014 Les microplaques ont été laissées à température ambiante pendant le temps de contact recommandé par le fournisseur qui normalement de 15min. Le désinfectant est éliminé et rincé, les puits étaient remplis de cristal violet (0.5%) pendant 15min à température ambiante puis rincés à l’eau physiologique stérile. la lecture des DO à 590nm des différentes concentrations on les compare avec la DO du biofilm non traité par le désinfectant XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 28 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Decembre 2014 29 14/12/2014 Souches identifiées Bactéries identifiées Nombre - Escherichia coli 10 - Serratia marcescens 8 - Staphylococcus. sp 6 - Staphylococcus lugdunensis - Staphylococcus haemolyticus 4 - Klebsiella pneumoniae 3 - Serratia odorifera 2 - Morganella morganii 2 - Proteus penniri 2 - Vibrio cholerae 1 - Vibrio fluviatis 1 -Cedecea davisae 1 - Enterobacter cloacae 1 - Pseudomonas putida 1 - non identifiées 4 4 50 Total XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 30 Résultat du dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et différentes bactéries présentes dans les endoscopes étudiés après désinfection Type Endoscope Canal Dénombrement de la FMAT en UFC/canal (2x50mL) Bactéries identifiées FUJINON® Opérateur indénombrable -Serratia marcescens -Vibrio cholerae - Staphylococcus. sp FUJINON® Opérateur indénombrable - Klebsiella pneumoniae - Pseudomonas putida - non identifiée Insufflation Indénombrable - Serratia marcescens - Klebsiella pneumoniae - Escherichia coli - Staphylococcus lugdunensis - Staphylococcus sp Aspiration Indénombrable - Serratia marcescens - Escherichia coli - Staphylococcus sp OLYMPUS® Opérateur indénombrable - Serratia marcescens OLYMPUS® Opérateur indénombrable - Serratia marcescens - Enterobacter cloacae - Klebsiella pneumoniae - Escherichia coli - Staphylococcus haemolyticus Insufflation 1,05.104 Aspiration indénombrable 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Decembre 2014 - Escherichia coli - Serratia marcescens - Staphylococcus lugdunensis - Staphylococcus sp 31 Résultat du dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et différentes bactéries présentes sur les embouts distaux et proximaux des endoscopes étudiés après désinfection Type Endoscope Canal Dénombrement de la FMAT en UFC/canal FUJINON® Opérateur (brosse) - - Proteus penniri - Cedecea davisae - Staphylococcus haemolyticus Opérateur (écouvillon) 5,4.103 - Staphylococcus haemolyticus - non identifiée Opérateur (écouvillon) indénombrable - Escherichia coli Aspiration (écouvillon) indénombrable - Escherichia coli Aspiration (brosse) Indénombrable -Escherichia coli -Klebsiella pneumoniae Opérateur (brosse) indénombrable -Escherichia coli FUJINON® OLYMPUS® Bactéries identifiées --Staphylococcus haemolyticus 14/12/2014 Opérateur (écouvillon) indénombrable - Escherichia coli Insufflation (écouvillon) indénombrable - Escherichia coli XXV journées endoscopie digestive , Alger Decembre 2014 32 Etat de contamination des endoscopes après stockage de 12h Résultat du dénombrement de la flore mésophile aérobie totale et différentes bactéries présentes dans les endoscopes étudiés avant désinfection et après stockage Type Endoscope Canal Dénombrement de la FMAT en UFC/canal FUJINON® Opérateur 3,36.104 FUJINON® OLYMPUS®, 14/12/2014 Opérateur Opérateur Bactéries identifiés - Serratia odorifera -Staphylococcus lugdunensis Indénombrable - Serratia odorifera -Staphylococcus lugdunensis -Staphylococcus. spp Indénombrable - Serratia marcescens - Staphylococcu. spp XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 33 Détection des souches formatrices de biofilm Les souches choisies , sont les souches retrouvées avant et après désinfection. 7 souches du genre Serratia (marcessens , odorifera) 11 souches du genre Staphylococcus ( coagulase (-) Serratia Staphylococcus Biofilm filamenteux Biofilm à colonies noires rugueuses Formation de slime sur rouge Congo Agar 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Decembre 2014 35 14/12/2014 Détection des souches formatrices de biofilm par la microplaque de titration à 96 puits DO à 590nm 0,35 DO à 590n m 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 0 S odorifera1 S odorifera2 Dot x 4 ≤ DO Biofilm ++++ Evaluation des DO des souches de Serratia spp isolées des endoscopes étudiés XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 36 1,2 0,352 0,35 0,348 DO 0,346 à 590nm 0,344 0,342 0,34 0,338 0,336 0,334 1 0,8 DO à 0,6 590nm 0,4 0,2 Slugdunensis1 Slugnensis2 0 14/12/2014 s1 S2 s3 s4 S5 S6 DO à 590nm S7 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 Sheamo 1 Dot x 4 ≤ DO Shemo2 Biofilm ++++ Evaluation des DO des souches de Staphylocoques étudiées sur microplaques XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 37 Evaluation de l’ efficacité de l’agent désinfectant(Glutaraldéhyde) sur le biofilm Temps de contact (min) 0 Concentration 0 1/10 1/50 1/100 1/200 1/400 1/500 1/100 DO 0.30 0.55 0.43 0.35 0.30 0.28 0.33 0.47 Staphylococcus spp DO 0.15 0.52 0.26 0.19 0.14 0.15 0.15 0.31 14/12/2014 20 30 Serratia marcessens Rmq : Deux souches à de biofilm (+++) sont sélectionnées XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 38 Est –il possible de prévenir la formation du biofilm ??? 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 39 Conclusion * Les causes de la contamination des endoscopes sont nombreuses et souvent associées, *Seule la maitrise de tous les paramètres permet de s’assurer de résultats satisfaisants * L’ennemi commun des DM et des endoscope est le BIOFILM C’est l’intérieur du patient qui est au bout de l’endoscope 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Décembre 2014 40 Equipe Hygiène Hospitalière et Biofilm sur dispositifs médicaux 14/12/2014 XXV journées endoscopie digestive , Alger Decembre 2014 41
