Génétique 3

INDICATIONS DU DIAGNOSTIC
PRÉNATAL CHROMOSOMIQUE
Diagnostic prénatal
• Permettre un DPN
– Éviter la naissance d ’un enfant porteur d ’une
maladie sévère dans une famille connue
• Recours à l ’IMG
• Non obligatoire
• Bonne information de la famille
– Demande familiale
DPN
• Le diagnostic prénatal
– Risque 1/4 en général (1/2 pour dominant)
– Échographie précoce
• 8-9 SA pour dater grossesse (jumeaux ?)
– Trophoblaste à 12 SA
• Etude génétique
• Caryotype
– Résultats en 3 à 10 jours (3 semaines X fra)
– Proposition IMG 1/4 …
La sécurité sociale rembourse le DAN dans
<
les indications suivantes:
Age maternel supérieur ou égal à 38 ans à la date
du prélèvement.
Anomalie chromosomique parentale.
Antécédent pour le couple, de grossesse(s) avec
caryotype anormal.
Diagnostic de sexe pour les maladies liées au sexe.
Signes d’appel échographiques suivants :
- Anomalies morphologiques fœtales démontrées
internes ou externes,
- Retard de croissance intra-utérin avéré,
- Anomalies de la quantité de liquide amniotique.
- Marqueurs sériques > 1/250.
LES AUTRES INDICATIONS
CONVENANCE PERSONNELLE
DÉCÈS IN UTÉRO INEXPLIQUÉ
AMNIOCENTÈSE POUR
AUTRE INDICATION
Evolution du diagnostic chromosomique prénatal
en France
Depuis 1970
1973 mise en place du DAN en France
1974 existence de 5 centres agréés
1980 convention nationale fixe âge maternel à 38 ans
(2759 prélèvements)
1983 existence de 23 centres agréés
1990 (24428 prélèvements)
1999 (84609 prélèvements)
2000 (78849 prélèvements)
72 Laboratoires agréés
ASPECTS LÉGISLATIFS
CONSENTEMENT DE LA FEMME ENCEINTE À LA
RÉALISATION EN VUE DE DIAGNOSTIC
PRÉNATAL IN UTERO D’ UNE ANALYSE
ÉNUMÉRÉE À L ’ARTICLE
R. 162-16-1 DU CODE DE LA SANTÉ
PUBLIQUE.
ARRÊTÉ DU 30 SEPTEMBRE 1997.
LE LABORATOIRE DOIT ÊTRE AGRÉÉ PAR LE
MINISTÈRE DE LA SANTÉ
QUEL TYPE DE PRÉLÈVEMENT ?
LIQUIDE AMNIOTIQUE (93%)
VILLOSITÉS CHORIALES (6%)
SANG FŒTAL (1%)
À QUEL TERME ?
14-15 SA (LA)
10-11 SA (VC)
> 18 SA (PSF)
Prélèvements prénataux
• Précoce
– 11-12 SA
• Trophoblaste
• Trans-abdominal
• Risque de FCS de 1/100
PONCTION DE VILLOSITES
CHORIALES
Ponction de villosités choriales
• Depuis 1983
• Diagnostic prénatal chromosomique dès le 1er trimestre de grossesse
• Diagnostic rapide et précoce
• En cas d’anomalie : IMG à un terme plus précoce
Prélèvement de villosités
choriales (1) : transcervical
Prélèvement de villosités
choriales (2): transabdominal
Rappel embryologique
• Implantation de l’œuf dans la cavité utérine 6 jours après la fécondation
• Au moment de la nidation
– Masse cellulaire centrale : bouton embryonnaire
– Couronne périphérique : trophoblaste (5ème jour)
Masse cellulaire interne =
bouton embryonnaire
Trophoblaste
Risques
• Fausses couches (1%)
• Anomalies de membre
– Prélèvement précoce (< 8-9 SA)
• Infections (rare)
• Douleurs abdominales (1-2%)
• Immunisation Rhésus
(Ig spécifiques antiD)
Amniocentèse
• Plus tardif
• Amniocentèse 17SA
• Risque de FCS de 1/200
L ’AMNIOCENTÈSE EST UN GESTE STÉRILE
Prélèvement de liquide
amniotique
CULTURE CELLULAIRE
POUR LA RÉALISATION
D’ UN CARYOTYPE
CULTURE CELLULAIRE
POUR LA RÉALISATION
D’ UN CARYOTYPE
Cordocentèse (PSF)
Comparaison des méthodes de DPN
Prélèvement
Choriocentèse
Amniocentèse
Cordocentèse
Nature
Villosités
trophoblastiques
Liquide amniotique
Sang foetal
Terme
10-13 SA
15-32 SA ou +
20-40 SA
Matériel
ADN fœtal
Caryo placentaire
ADN fœtal
Caryo fœtal
Liq amnio (bioch.)
ADN fœtal
Caryo fœtal
Sérum… foetal
Délais examen cyto Direct: 1 j
Culture : 1-2sem
Culture: 10 j-3 sem
Culture : 3 j
Risque fœtal
0,5%
2%
2-5%
RÉSULTATS DE 64 LABORATOIRES SUR
72 AGRÉÉS EN FRANCE
POUR L’ANNÉE 2OOO
78849 caryotypes
2766 anomalies (3,5%)
(315)
0,4 % D’échecs de culture
TRISOMIE 21
TRISOMIE 18
TRISOMIE 13
SYNDROMES TURNÉRIENS
AUTRES AN. GONOSOMES
TRIPLOÏDIE
47,82%
14,56%
5,61%
10,31%
8,95%
2,92%
> 90% SONT DES ANOMALIES DE NOMBRE
Répartition des prélèvements selon les indications
6,4%
ANOMALIE
PARENTALE
1%
ATCD FRATRIE
2%
SEXE
0%
AUTRES
9%
MSM
36%
40%
ANOMALIE ECHO
18%
16,76%
AGE MATERNEL
34%
34,12%
MSM
AGE MATERNEL
ANOMALIE ECHOGRAPHIQUE
ANOMALIE PARENTALE
SEXE
ATCD FRATRIE
AUTRES
Répartition des anomalies déséquilibrées
9,82%
2,92%
triploïdie
3%
Divers
10%
Anom. Gonosomes
11%
8,95%
trisomie 21
47%
47,82%
45,X
8%
10,31%
trisomie 18
14%
14,56%
trisomie 13
7%
trisomie 21
trisomie 13
trisomie 18
5,61%
45,X
Anom. Gonosomes
triploïdie
Divers
Fréquences des anomalies sur Signes d’ Appel Echographiques
Clarté
nuque
SAE
autres
Nb caryo
3169
6929
Déséquilib
res
322
Tri 21
186
Tri 13
10,16
770
11,11
57,76
5,87
220
28,57
3,18
20
6,21
0,63
66
8,57
0,95
Tri 18
52
16,15
1,64
203
26,36
2,93
45,X
40
12,42
1,26
131
17,01
1,89
Anom.Gono
somes
7
2,17
0,22
26
3,38
0,38
Triploïdie
7
2,17
0,22
40
5,19
0,58
Divers
10
3,11
0,32
84
10,91
1,21
Anom.
Equilib.
17
0,54
23
0,33
FRÉQUENCE DES ANOMALIES EN
FONCTION DES INDICATIONS
TRISOMIE 21
LA + FRÉQUENTE DANS TOUS LES GROUPES SAUF
DANS « ANOMALIES PARENTALES »
TRISOMIE 18
AUGMENTE RÉGULIÈREMENT
MAIS DÉPISTAGE PRÉCOCE
SYNDROMES TURNÉRIENS DÉPISTÉS
SURTOUT DANS LES S.A. ÉCHOGRAPHIQUES
DEVENIR DES GROSSESSES APRÈS LE DAN
Turner (235 cas)
Klinefelter (72 cas)
47,XXX
47,XYY
Mosaïques gonosomes
77,4% IMG
41,7% IMG
18,5% IMG
6,5%
IMG
2/11
IMG
Anomalies du caryotype équilibrées
0,10% de novo
29,78% héritées
78%
24%
10%
15%
3/12
Exemple d’anomalie du caryotype
- Anomalie de nombre
Trisomie 18
Trisomie 18
• Dysmorphie moins spécifique
– Plus rare; 1/6000
– Plus malformatif
• Repérage plus fréquent par l’échographie
– RCIU
– Oligoamnios ou hydramnios
– Malformations majeures (+ MAINS ++)
Trisomie 18, prénatal
• Association
• Crâne « rond » (occiput plat, étroitesse bifrontale)
– Ouverture large de la métopique
– Plexus choroïdes dilatés
– Dilatation ventriculaire fréquente
• Oreilles inhabituelles, basses et orientées en arrière
• Micro-rétrognathisme et petite bouche
Évolution postnatale
• Pathologie neurologique sévère
– Retard psychomoteur sévère
• 5 à 10% des enfants survivent à la première année
– Malformations ++
• Malformations multiples
– Cardiopathies, anomalies digestives, faciales,
etc...
– Mains crispées +++
Trisomie 21 ou syndrome de Down
• En 1866, décrit par Down
• En 1959, est corrélée au chromosome 21
excédentaire
• 92% sont homogènes libres
• 5% par translocation robertsonienne
• 3% sont en mosaïque
- 1/700 naissances, tout âge confondu, la
fréquence augmente avec l’âge maternel (par
anomalies de disjonction)
- Hypotonie à la naissance, hypertélorisme,
oreilles bas implantées, macroglossie
- 50% ont une malformation cardiaque
ANOMALIE DE NOMBRE AUTOSOMIQUE
Trisomie 13
• Des anomalies du système nerveux
–Holoproencéphalie est la
malformation la plus fréquente (50%)
–Dilatation du carrefour ventriculaire
–Élargissement de la fosse postérieure
Trisomie 13
• Anomalie du visage
– Diminution de la distance inter-orbitaire
(hypotélorisme) pouvant aller jusqu’à la présence
d’un seul œil réalisant l’aspect en cyclope
– Division labio-palatine
Trisomie 13
• Anomalie des reins
– Hydronéphrose
– Augmentation du volume des reins
• Anomalies du cœur
– Communication inter-ventriculaire
– Dysplasie valvulaires
– Tétralogie de Fallot
• Anomalies des membres :
– Polydactylie
– Pied-bot
• Anomalie de l’abdomen
– Omphalocèle
– Extrophie vésicale
Anomalie gonosomique (GTG)
47, XXY
DOUBLE ANOMALIE DE NOMBRE
DÉPISTAGE RAPIDE DES PRINCIPALES
PRIN CIPALES
ANOM
AN OM ALIES CHROM OSOM IQ UES
N UM ÉRIQ UES
PRIN CIPE DE LA FISH
FISH
FLUO
RESCENCE
FLUORESCEN
CE IN -SITU HYBRIDIZATION
HYBRIDIZATIO N
M ÉTHO
DE D’IDEN TIFICATIO
N M OLÉCULAIRE
ÉTHODE
TIFICATION
O LÉCULAIRE
BASÉE SUR LA VISUALISATION
VISUALISATIO N D’UN
CHRO M O
SO M E O
U D’UN E PO RTIO
N DE
OSOM
OU
RTION
CHRO
M OSOM
DES
CHROM
O SO ME PAR DES SON
SO NDES
FLUORESCEN
UT O U
FLUO RESCENTES, SPÉCIFIQ UES DE TO
TOUT
PARTIE DE CHROM
ME
CHRO M OSO
O SOM
(FISH IN TERPHASIQ UE O
U M ÉTAPHASIQ UE)
OU
PRIN CIPE DE LA FISH
TRISOMIE 21 SUR AMNIOCYTE
21
18
TRISOMIE 18 SUR AMNIOCYTES
18
18
X
Y
18
FISH D ’UN CENTROMÈRE
PEINTURE SPÉCIFIQUE D ’UN CHROMOSOME
PEINTURE SPÉCIFIQUE D ’UN CHROMOSOME
CONCLUSION
Pratique du DPN stable depuis 1997
1° Indication : MSM
Poursuite de la grossesse si diag. De Tri 21
est rare <1/1000
Nécessité d ’un consensus des cytogénéticiens dans
les différents centres multidisciplinaires sur les
conduites à tenir en fonction de l’anomalie
Retrouvée
700 000 Naissances en 2000 =11% de Dg Prénataux
Centre de DPI (Clamart)
• Fécondation In Vitro
– Proposée si troubles de fertilité associés
– Si ATCD 3 IMG après DPN
– Maladies dominantes
• Steinert
– Délai d’attente
• Mise au point de la technique
• Réussite FIV 10 à 20%
Le diagnostic pré implantatoire
et ses problèmes..
Marc Le Lorc’h
Service Histo Embryo Cytogénétique
Pr Vekemans
Hôpital Necker-Enfants Malades
Pr Tachdjian BDR Béclère
Le Diagnostic pré-implantatoire
Fécondation in vitro
+
Techniques de biologie moléculaire
PCR
FISH
DPI
Couple à risque
Fécondation in vitro
Biopsie 3° jour
Analyse
PCR ou FISH
Historique
• 1978 : Louisa Brown naît en Angleterre (F.I.V.)
• 1981 : Amandine
• 1991 : 1er DPI pour mucoviscidose (GB)
• 1992 : première naissance par DPI (GB)
• 2000 : Valentin
D.P.I. - Pourquoi?
• 1) Patients fertiles porteurs d’une maladie
génétique grave et incurable.
70%
• 2) Patients de la PMA porteurs d’une anomalie 30%
génétique
• 3) Patientes d’âge avancé, échecs répétés de
FIV ou fausses couches spontanées
récurrentes.
(50%)
La législation française
Loi : L94-654 (29 juillet 1994) article L162-17
Le diagnostic biologique effectué à partir de cellules prélevées sur l’embryon
in vitro :
- Autorisé qu’à titre exceptionnel
-Indication attestée par un médecin d’un centre de DPN
pluridisciplinaire
- Forte probabilité de donner naissance à un enfant atteint d’une
maladie génétique d’une particulière gravité reconnue comme
incurable au moment du diagnostic
La législation française
Article L162-17
- Anomalie(s) responsable(s) doivent être préalablement identifiées
- Consentement écrit du couple
- Recherche uniquement de cette anomalie
- Etablissement spécifiquement autorisé auprès de l’Agence de la
Biomédecine.
Arrêté du 20 juillet 1999 / 7 janvier 2000
Autorisation à 3 centres en France :
PARIS
STRASBOURG
MONTPELLIER
Les étapes du DPI: un long processus!
• Consultation multidisciplinaire
84%
• Bilan de fertilité
12-18
mois
•
•
•
•
Etude de faisabilité
Stimulation ovarienne
Ponction ovocytaire
Fécondation par ICSI
33% annulation
10 en moyenne
62%
• Biopsie J3
97%
• DPI: (PCR / FISH)
86%
• Transfert J4
• Echographie / b hCG
25%
• Accouchement
18%
Intervenants au cours d’un DPI
Obstétricien
Sage-Femme
Généticien
Biologiste de reproduction
Centre
pluridisciplinaire
Cytogénéticien
Biologiste moléculaire
Psychologue
Assistante sociale
Néonatalogiste
Les Techniques
- La biopsie embryonnaire
- La PCR
- La FISH
I.C.S.I
Le clivage du zygote
•Lent
•Asynchrone (étapes à 3,5,6 cellules)
•Holoblastique rotationnel
A
B
La biopsie embryonnaire
• Globule polaire: genotype ovocytaire
•Morula: stade 6-8 blastomères
•Blastocyste: 36% parviennent à ce stade
La biopsie
Les Techniques
- La biopsie embryonnaire
- La PCR
- La FISH
Analyse de l’ embryon
ADN
“Tubage” et lyse cellulaire
PCR
Les difficultés du DPI
•
Les risques de contamination
Cellules du
manipulateur
Cellules de la
mère
Spermatozoïde
Fragment d’ADN
(amplification
précédente)
Les difficultés du DPI
•
La qualité des embryons
Embryon mosaîque
Absence de noyau
Noyau en
dégénérescence
/ mauvaise
morphologie
Pas de diagnostic
CM
CN
CM
CN
Erreur de diagnostic
Pathologies étudiées
Mucoviscidose (deltaF508)
Amyotrophie Spinale
Myopathie de Duchenne
Myotonie de Steinert
Drépanocytose
Mutations rares
Analyse Indirecte
xq28
Total:
Nb de
Nb de DPI
Nb
demandes
Grossesses
18
18
20
32
6
24
10
12
11
3
2
1
Déficit en OTC
1
2
Hémoglobinopatie
1
1
Dysplasie diatrophique
2
Maladie de Hunter
1
Lissencéphalie liée à l’X
1
Mucoviscidose (non dF508)
X-fragile
HémophilieA
Incontinentia Pigmenti
Hydrocéphalie liée à l’X
Adrénoleucodystrophie (ALD)
17
13
8
2
3
1
144
5
2
1
63
11
Les difficultés du DPI
moléculaire
• Trouver les conditions d’amplifications
• Avoir une méthode de détection des mutations
rapide et fiable
La mise au point de chaque diagnostic est longue et délicate,
on essaie de développer des tests applicables à une majorité
de couples à risque de transmettre une même pathologie.
(30 maladies monogéniques proposées au DPI.
¾5000 maladies rares associées à la mutation d’un gène unique)
Les Techniques
- La biopsie embryonnaire
- La PCR
- La FISH
L’hybridation in situ
avec des sondes fluorescentes
le DPI chromosomique
Critères d’éligibilité du DPI
chromosomique
Une anomalie chromosomique
• 1- Age maternel (réserve ovarienne)
• 2- Nombre de grossesses avec déséquilibre
• 3- Pas d’enfant normal vivant
D.P.I. cytogénétique : technique
X Y
Fluorescent In situ Hybridisation ou FISH
DPI cytogénétique
étapes techniques :
1
-Etalement des blastomères
-Fixation du blastomère
2
- Eliminer les débris
cytoplasmiques (pepsine)
-Hybridation (16 heures)
FISH interphasique
3
DPI des anomalies chromosomiques
• FISH interphasique (« en aveugle »)
• Détecter les déséquilibres génomiques post
méïotique de translocations équilibrées
parentales
Méthode: FISH interphasique
ETAPES TECHNIQUES :
- ETALEMENT DES BLASTOMERES
- ELIMINER LES DEBRIS CYTOPLASMIQUES (pepsine)
- FIXATION DU BLASTOMERE
- HYBRIDATION (16 heures)
L PROBLEME DES SONDES
LE
La stratégie « NECKER »
• Sondes « maison » validées
• Test sur lymphocytes témoins
• Test sur le couple (vérification de la translocation,
détection de polymorphismes)
• Double lecture
Mauvaise
hybridation
Faux négatifs
Transfert d’embryons atteints
Faux positifs
Moins d’embryons pour le transfert
Utilisation de la FISH dans le DPI
•Maladies récessives liées à l’X
(tri des embryons)
•Translocations
•Recherche d’aneuploïdies
(déséquilibres dans le nombre de
chromosomes)
Détermination du sexe des embryons
Féminin
Masculin
Translocation robertsonienne
Les ségrégations méiotiques: diagramme du pachytène
14
13
Segregation meïotique chez les porteurs de
translocation robertsonienne
D.P.I. -Translocation robertsonienne
+
D.P.I - translocation robertsonienne
Embryons non transférés
D.P.I - Translocation réciproque
t(11;22)(q23;q11)
11
der 11
22
der 22
t(11;22)(q23;q11)
Résultats de FISH théoriques
Alterne
Normal
3:1 segregation
Equilibré
Adjacent 1
der(11) (-11)
+der(11)
(-11)(-22)+der(22)
+der(22)
(-11)(-22)+der(11)
der(22) (-22)
(-22)+der(11)+der(22)
(-11)
Adjacent 2
(-11)+der(22)
(-22)+der(11)
(-11)+der(11)+der(22)
(-22)
t(11;22)(q23;q11)
Blastomère équilibré
Blastomère adjacent 1
( tri 22q et mono 11q)
trivalent
ségrégation
méiotique
B
alterne
normal
équilibré
déséquilibré
déséquilibré
déséquilibré
déséquilibré
adjacente
A
C
quadrivalent
ségrégation
méiotique
alterne
normal
équilibré
B
adjacente I
déséquilibré
déséquilibré
déséquilibré
déséquilibré
adjacente II
A
C
Allèle muté
F508del
A
B
C
Allèle sauvage
Les Problèmes:
• Pour le biologiste
• Pour le couple
• Pour la société: l’éthique et la loi.
Pour le biologiste:
les difficultés techniques
• Une cellule par lame
•Signal ou bruit de fond?
(erreurs diagnostiques: PCR 3%;FISH 1%)
• Analyse en moins de 24 heures
•Mosaïques embryonnaires
(Mise au point longue et lourde pour chaque test: entre 3 et 6 mois)
Le problème des mosaïques
Iwarsson et al. Mol Hum Reprod 1999, 104:376-382
X, Y, 15, 16, 17, 18
Embryon normal homogène (27%)
Embryon mosaïque normal/anormal (45%)
Embryon anormal
(12,5%)
Embryon chaotique avec cellules
normales ou non (15%)
Notre expérience FAMA Necker-Béclère
(résultats préliminaires)
• Étude des embryons non transférés:
8 robertsoniennes
8 réciproques
24 embryons
24 embryons
4 embryons mosaïques (17%)
7 mosaïques (29%)
La littérature:
De 20 à 45% des embryons sont mosaïques
(Wilton, 2002) J3 FISH
Quelques chiffres
•De 20 à 45% des embryons sont mosaïques (Wilton,
2002) J3 FISH
•1 à 2% à 10-12SA sur villosités choriales (Kalousek et
Veckemans,1996) Caryotype
•0,1 à 0,4% à 16-18SA sur amniocentèse (Hsu et
Perlis, 1990) Caryotype
•A la naissance?
Les mosaïques-conclusion
•Taux de mosaïcisme important.
•Biopsie de deux blastomères.
•Information aux couples lors de la consultation.
•Diagnostic prénatal.
Les difficultés pour le couple
- La nécessité de passer par la FIV
-Les faibles taux de grossesse
-Les risques de grossesse gemellaire 27%
- Le nombre restreint de diagnostics disponibles
- Les délais d’attente
- Délais techniques incompatibles avec les délais
biologiques.
RAPPORT D ’ACTIVITES DPI
2004-2005
FAMA
Hôpitaux Necker-Enfants Malades /Antoine Béclère
Consultation (2004)
Histoire et antécédents
Moléculaire
73 couples
Enfants atteints
29
Enfants décédés
11
Enfants sains
21
Nombre d ’I.M.G.
73
Nombre de F.C.S.
Génétique et Infertilité 9,5 % (7/73)
Cytogénétique
89 couples
8
4
16
16
158
41 % (37/89)
REMANIEMENTS CHROMOSOMIQUES COUPLES
PRIS EN CHARGE ET TENTATIVES 2005
Robertsonienne
COUPLES
PONCTIONS
% embryons
équilibrés
17
18
60%
Réciproque
21
17
25%
Diag de sexe
3
2
50%
ESHRE PGD Consortium
Créé en 1997
Données 1999-2004 :
Centres enregistrés :
Nombre de cycles FISH:
Nombre de cycles PCR:
Nombre de grossesses :
Nombre de naissances :
Nombre de faux diagnostics:
Human Reproduction Vol 22;n°2 pp323-326, 2007
5O
6400
1500
1500
1000
>3?
Quelques chiffres
• En France en 2005: 774 600 naissances
• 100 centres agréés F.I.V.
– 39 000 FIV par an dont 10 000 I.C.S.I.
– 10 000 naissances par P.M.A
• 3 centres agréés D.P.I.
– 575 D.P.I.
– 65 naissances (2000-déc 2005)
L’embryon est une personne
• Chez les grecs anciens »l ’animation du fœtus
intervient au 40 ème jour pour les embryons
mâles et au 83 ème jour pour les embryons
féminins
• Notion de pré embryon (14 jours) GB et
Espagne
La situation en Europe
• DPI autorisé avec loi spécifique: Danemark, Espagne,
France, Norvège, suède.
• DPI autorisé sans loi spécifique: Belgique, Finlande
Grèce, Italie, pays-Bas, Royaume-Uni.
• DPI interdit: Allemagne, Autriche, Irlande, Suisse.
¾ Des divergences profondes.
¾ Notion de tourisme médical.
LES LEGISLATIONS EUROPEENNES: des disparités importantes.
FRANCE
ITALIE
ESPAGNE
1991:interdiction des
mères porteuses.
Lois de bioéthique:1994
D.P.I. autorisé.
GRANDE BRETAGNE
IRLANDE
Interdit.
D.P.I. en sursis
Recherches sur embryon
humain pour 5ans.
Lois de bioéthique:1988
D.P.I. autorisé.
1 cas de selection de
sexe pour convenances
personnelles.
F.I.V. pour couples stable F.I.V. pour couples stable F.I.V. autorisée pour les
depuis 2 ans.
Femmes celibataires
depuis 2 ans.
Don de sperme anonyme
et gratuit.
30 000embryons congelés
Pas de congélation
(1 800 orphelins*)
des embryons
I.V.G. autorisée depuis
1975.( <12 semaines
de grossesse).
ALLEMAGNE
D.P.I. interdit.
D.P.I. autorisé.
F.I.V pour couple marié.
Les spzs doivent provenir
du mari.
F.I.V. autorisée pour les
couples homo et célibataires.
Interdit.
Utilisation du sperme
post mortem autorisé
Utilisation du sperme
du mari décédé pendant
6 mois.
Pas de congélation des
embryons.
I.V.G. < 23 semaines.
Interdit.
La législation française
Article L162-17
-Anomalie(s) responsable(s) doivent être préalablement identifiées
- Consentement écrit du couple
- Recherche uniquement de cette anomalie
- Etablissement spécifiquement autorisé auprès de l’Agence de
Biomedecine.
Le diagnostic des aneuploïdies
aneuploidy screening
•But: améliorer les résultats de la F.I.V.
•Il s’agit de dépister des anomalies touchant d’autres chromosomes que
ceux de la translocation du couple. ( 21, 13, 16, 18, 22..)
•ESHRE: la majorité des centres pratiquent ce dépistage.(14,2% à 54%
des DPI)
•L’avis du C.N.E.
DPI et éthique
• Maladies curables ou non sévères
Klinefelter, Turner...
• Typage HLA: (Fanconi)
La position de la France
Les problèmes techniques
• DPI de sexe pour « convenance personnelle »
(en 2003-2004: 80 cycles)
• Dérives eugéniques
Loi de bioéthique: art.17
Le diagnostic biologique est autorisé,à titre
expérimental:
¾Le couple a donné naissance à un enfant atteint
d’une maladie génétique incurable entraînant la mort
dès les premières années de la vie
¾Le pronostic vital peut être amélioré de façon
décisive par une thérapeutique issue d’un embryon
sans atteinte à l’intégrité du corps de celui-ci.
¾Restreint à la maladie génétique
Révisions des lois de bioéthique 2005
• Création de l ’Agence de la Biomédecine
• Le recherche sur embryons surnuméraires
OUI
• Extension des diagnostics: tri 21, tri 16
NON
• Sexage
NON
• Clonage thérapeutique et reproductif
– crime contre l ’espèce humaine
NON
• Dépistage global sur l ’ensemble du génome
NON
(interprétation des résultats…)
5ans
CGH sur chromosomes
ADN de référence
ADN test (du patient)
CGH sur microarrays
ADN de référence
ADN test (du patient)
Marquage des
ADN
Hybridation
Révélation
gain
Analyse des rapports
de fluorescence
perte
Résolution
5 Mb
1 à 3 Mb
Conclusion
« Une Science avec conscience »
• Évaluation constante des paramètres techniques
(I.C.S.I., suivi clinique des enfants)
• Maladie d ’une « particulière gravité »
• Nécessité de lois encadrant ces pratiques et qui
évoluent.. lentement (Société, techniques..)
• Réflexion européenne.
Interruption médicale de
grossesse
• IVG
– Sur demande de la mère
– Sans restriction
– Jusque 14 semaines d’aménorrhée
• IMG
– Sur demande de la mère
– Doit être autorisé par un Centre
Pluridisciplinaire de DPN
– Jusque au terme (40 semaines d’aménorrhée)
Choix parental devant un risque
• Prendre le risque
– DPN
– DPI
– Pas de DPN
• Pas de risque
–
–
–
–
Abstention
Adoption
Don de gamète (sperme, ovocyte)
Don d’embryon
Cytogénétique
• M. Le Lorc’h
• S.P Romana
• M. Vekemans
Moléculaire
• P. Burlet
• N. Gigarel
• A. Munnich
Necker-Enfants Malades
BDR et FIV
• N. Frydman
• G. Tachdjian
• R. Frydman
Antoine Béclère