L3 médecine AMIENS 2012/2013 – S5 UE1 – Dr H MAMMERI - Diagnostic direct
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Diagnostic direct en microbiologie
- Sert à mettre en évidence directement la bactérie ou ses constituants
- L'examen microscopique peut permettre de mettre en évidence la bactérie/le virus
après coloration, recherche des Ag avec savonnette,
- La PCR permet d'identifier le génome.
- La culture consiste à faire pousser le germe, une fois isolé on peut l'identifier.
- Avantages du dg direct par rapport à l’indirect :
o SPECIFICITE (on est sûr de la présence)
o Une fois le germe isolé, on peut faire son ANTIBIOGRAMME
o Pas encore d’apparition de beaucoup d’Ac (fenêtre sérologique)
1 L'examen microscopique direct
- Lorsqu'on reçoit un prélèvement on l'étale sur des lames à l'état frais (sans
coloration) : parasites (œuf), certaines levures, certains dermatophytes ou après
coloration.
- On ne peut pas voir les virus au microscope optique.
1.1 Coloration de Gram :
- On colore le peptido-glycane avec du violet de gentiane, ensuite on décolore avec
alcool (90°), les bactéries avec une couche de peptido-glycanes mince (Gram -)
vont se décolorer alors que celles qui ont une couche épaisse vont rester colorées
en violet (Gram +), ensuite on colore à la fuschine, les bactéries qui s'étaient
colorées le restent, alors que celles qui s'étaient décolorées deviennent rose/rouge.
- Permet la détermination d’une antibiothérapie probabiliste
1.2 Coloration de Ziehl :
- Une couche externe d'acide mycolique (sorte de cire) apporte les propriétés
tinctoriales des mycobactéries
- Le prélèvement est coloré par fuschine à chaud, toutes les bactéries deviennent
rouges, ensuite on les trempe dans un mélange alcool/acide qui décolore la paroi
des bactéries standards. On les colore ensuite au bleu de méthylène qui contre
colore en bleu les bactéries sans cette couche spéciale d'acide mycolique qui elles
restent rouge.
- BAAR bacile acido-alcolo résistant : rouge foncé au microscope
1.3 Coloration de May Grunwald Giemsa (MGG) :
- En hématologie pour identifier les parasites hématophages +++, c'est une
coloration cytologique, recherche du Plasmodium falciparum (paludisme).