BD Brilliant Green Agar

MODE D'EMPLOI – MILIEUX
EN BOITES DE PETRI
PRETS A L’EMPLOI
PA-212097.07 Rév. : Oct 2013
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BD Brilliant Green Agar
APPLICATION
La BD Brilliant Green Agar (gélose au vert brillant) est un milieu extrêmement sélectif servant
à l’isolation des salmonelles autres que S. typhi dans les fèces et autres échantillons cliniques.
PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE
Méthode microbiologique.
L’utilisation de la Brilliant Green Agar pour isoler les Salmonella a dans un premier temps été
décrite par Kristensen et al. 1 Par la suite, Kauffmann a modifié ce milieu,2 qui s’est avéré
capable de faciliter l’ensemencement d’inoculums concentrés dans les environnements cliniques
et non cliniques. Ce milieu est cité dans la Pharmacopée américaine (United States
Pharmacopoeia, USP) au chapitre Microbiological procedures for absence of specified
microorganisms—nutritional and dietary supplements (Procédures microbiologiques pour la
détection de micro-organismes spécifiés - compléments diététiques et nutritionnels), ainsi que
dans plusieurs manuels de microbiologie médicale. En outre, il est employé lors du contrôle
sanitaire des produits laitiers.3-8
Dans la BD Brilliant Green Agar, les éléments nutritifs sont fournis par l’extrait de levure et par
deux peptones. Le lactose, le saccharose et le rouge de phénol sont à la base du système de
différenciation, qui exclue les fermentants du lactose et/ou du saccharose (p. ex. E. coli), tandis
que les salmonelles ne produisent pas d’acide à partir de ces sucres. Le vert brillant est l’agent
sélectif qui inhibe les flores présentes.
REACTIFS
Formule* par litre d’eau purifiée
BD Brilliant Green Agar
Extrait de levure 3,0 g
Peptone de protéose Bacto 10,0
Lactose 10,0
Saccharose 10,0
Chlorure de sodium 5,0
Rouge de phénol 0,08
Gélose 20,0
Vert brillant 12,5 mg
pH 6,9 +/- 0,2
*Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performance imposés.
PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser les boîtes de Pétri qui montrent des signes de contamination microbienne, de
décoloration, de dessèchement, de fissuration ou tout autre type de détérioration.
Consulter le document « MODE D’EMPLOI GENERAL » pour connaître les procédures de
manipulation aseptique, les risques biologiques, ainsi que les méthodes d’élimination des
produits utilisés.
STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
Dès réception, conserver les boîtes de Pétri dans l’obscurité entre 2 et 8 °C, dans leur
emballage d’origine, jusqu’au moment de leur utilisation. Ne pas congeler ni surchauffer. Les
boîtes peuvent être ensemencées jusqu’à leur date de péremption (voir étiquette sur
l’emballage) et incubées pendant le délai d’incubation recommandé.

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Des boîtes provenant d’une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine
lorsqu’elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre.
CONTROLE DE QUALITE PAR L’UTILISATEUR
Inoculer les échantillons représentatifs avec les souches suivantes (pour plus d’informations,
voir le document « MODE D’EMPLOI GENERAL »). Incuber les boîtes de Pétri en aérobie entre
35 et 37 °C pendant 18 à 48 heures.
Souches Croissance
Escherichia coli
ATCC 25922 Croissance nulle à moyenne, colonies de couleur jaune à jaune-vert, auréoles jaunes
Enterococcus faecalis
ATCC 29212 Croissance nulle à légère, colonies de couleur tirant sur le jaune avec ou sans auréoles jaunes
Salmonella Abony DSM 4224 10 à 100 colonies de couleur tirant sur le blanc, auréoles
rou
g
es
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028 Croissance bonne à importante, colonies de couleur tirant sur le blanc, auréoles rouges
Non inoculé Couleur tirant sur le marron à vert olive
METHODE
Matériel fourni
BD Brilliant Green Agar (boîtes de Pétri Stacker de 90 mm). Produit soumis à contrôle
microbiologique.
Matériel non fourni
Les milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Types d’échantillons
Echantillons fécaux ou écouvillons rectaux de patients susceptibles d’être infectés par des
espèces de Salmonella autres que S. typhi (voir également la section « CARACTERISTIQUES
DE PERFORMANCES ET LIMITES DE PROCEDURE »). Le milieu est également utilisé pour
les matières animales ou alimentaires.
Mode opératoire du test
Strier directement l’échantillon ou ensemencer le milieu avec une petite quantité de croissance
bactérienne issue d’un milieu d’enrichissement liquide tel qu’un bouillon de culture au
tétrathionate. Il est recommandé d’ajouter un ou deux milieux moins sélectifs, en particulier
lorsque la population recherchée est faiblement représentée dans la matière. Diluer par
striation et incuber les boîtes de Pétri en aérobie entre 35° C et 37° C pendant 42 à 48 heures.
Observer les résultats sur les boîtes de Pétri après 18 à 24 heures, puis après 42 à 48 heures.
Résultats
Généralement, les organismes isolés sur la BD Brilliant Green Agar présentent la morphologie
suivante :
Organismes Résultats
Salmonella (autres que S. Typhi
et S. Paratyphi) Colonies de couleur blanche à rouge cernées de zones rouges
S. Typhi et S. Paratyphi Croissance nulle ou traces de croissance
Espèces de Shigella Croissance nulle ou traces de croissance
Escherichia coli, Klebsiella et
Enterobacter Colonies de couleur jaune à tirant sur le vert, cernées de zo
n
jaune-vert
Pseudomonas Croissance nulle ou traces de croissance
Bactéries Gram-positives Croissance nulle ou traces de croissance

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CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE
La BD Brilliant Green Agar est un milieu extrêmement sélectif servant à l’isolation des
Salmonella, y compris au sein de matières fortement contaminées, notamment les fèces.4-8
Il convient d’ensemencer avec l’échantillon ou la matière des milieux moins sélectifs destinés à
l’isolement des Salmonella, ainsi qu’une boîte de Pétri MacConkey II Agar. Proteus peut
ressembler à des pathogènes entériques en produisant des colonies de couleur blanche à rouge
cernées de zones rouges.
Bien que certaines souches puissent s’y développer, la BD Brilliant Green Agar n’est pas
prévue pour l’isolement des Salmonella de type Typhi et S. Paratyphi.
Il est certes possible de procéder à divers tests diagnostiques directement dans ce milieu,
mais, pour obtenir une identification complète, il convient d’employer des tests biochimiques et
sérologiques faisant appel à des cultures pures.
REFERENCES
1. Kristensen, M., V. Lester, and A Jurgens. 1925. On the use of trypsinized casein, brom
thymol blue, brom cresol purple, phenol red and brilliant green for bacteriological nutrient
media. Brit. J. Exp. Pathol. 6: 291.
2. Kauffmann, F. 1935. Weitere Erfahrungen mit den kombinierten Anreicherungsverfahren für
Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117: 26.
3. The United States Pharmacopeial Convention. The United States Pharmacopeia-National
formulary, current edition. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.
4. Flowers, R.S., W. Andrews, C.W. Donelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk
products, p. 103-212. In: R.T. Marshall (ed.). Standard methods for the examination of dairy
5. products, 16th ed. American Public Health Association, Washington DC, USA.
6. Osborn, W.W., and J.L. Stokes. 1955. The determination of Salmonellae in foods. Food and
Drug Laboratories, Ottawa, Canada.
7. MacFaddin, J. 1985. Media for the isolation-cultivation- identification-maintenance of medical
bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, USA.
8. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003.
Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
CONDITIONNEMENT
BD Brilliant Green Agar
No réf. 212097 Milieux en boîtes de Pétri prêts à l’emploi, 20 unités
INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.
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