BD Brilliant Green Agar
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MODE D'EMPLOI – MILIEUX EN BOITES DE PETRI PRETS A L’EMPLOI PA-212097.07 Rév. : Oct 2013 BD Brilliant Green Agar APPLICATION La BD Brilliant Green Agar (gélose au vert brillant) est un milieu extrêmement sélectif servant à l’isolation des salmonelles autres que S. typhi dans les fèces et autres échantillons cliniques. PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE Méthode microbiologique. L’utilisation de la Brilliant Green Agar pour isoler les Salmonella a dans un premier temps été décrite par Kristensen et al. 1 Par la suite, Kauffmann a modifié ce milieu,2 qui s’est avéré capable de faciliter l’ensemencement d’inoculums concentrés dans les environnements cliniques et non cliniques. Ce milieu est cité dans la Pharmacopée américaine (United States Pharmacopoeia, USP) au chapitre Microbiological procedures for absence of specified microorganisms—nutritional and dietary supplements (Procédures microbiologiques pour la détection de micro-organismes spécifiés - compléments diététiques et nutritionnels), ainsi que dans plusieurs manuels de microbiologie médicale. En outre, il est employé lors du contrôle sanitaire des produits laitiers.3-8 Dans la BD Brilliant Green Agar, les éléments nutritifs sont fournis par l’extrait de levure et par deux peptones. Le lactose, le saccharose et le rouge de phénol sont à la base du système de différenciation, qui exclue les fermentants du lactose et/ou du saccharose (p. ex. E. coli), tandis que les salmonelles ne produisent pas d’acide à partir de ces sucres. Le vert brillant est l’agent sélectif qui inhibe les flores présentes. REACTIFS Formule* par litre d’eau purifiée BD Brilliant Green Agar Extrait de levure 3,0 g Peptone de protéose Bacto 10,0 Lactose 10,0 Saccharose 10,0 Chlorure de sodium 5,0 Rouge de phénol 0,08 Gélose 20,0 Vert brillant 12,5 mg pH 6,9 +/- 0,2 *Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performance imposés. PRECAUTIONS . A usage professionnel uniquement. Ne pas utiliser les boîtes de Pétri qui montrent des signes de contamination microbienne, de décoloration, de dessèchement, de fissuration ou tout autre type de détérioration. Consulter le document « MODE D’EMPLOI GENERAL » pour connaître les procédures de manipulation aseptique, les risques biologiques, ainsi que les méthodes d’élimination des produits utilisés. STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION Dès réception, conserver les boîtes de Pétri dans l’obscurité entre 2 et 8 °C, dans leur emballage d’origine, jusqu’au moment de leur utilisation. Ne pas congeler ni surchauffer. Les boîtes peuvent être ensemencées jusqu’à leur date de péremption (voir étiquette sur l’emballage) et incubées pendant le délai d’incubation recommandé. PA-212097.07 -1- Des boîtes provenant d’une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine lorsqu’elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre. CONTROLE DE QUALITE PAR L’UTILISATEUR Inoculer les échantillons représentatifs avec les souches suivantes (pour plus d’informations, voir le document « MODE D’EMPLOI GENERAL »). Incuber les boîtes de Pétri en aérobie entre 35 et 37 °C pendant 18 à 48 heures. Souches Escherichia coli ATCC 25922 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Non inoculé Croissance Croissance nulle à moyenne, colonies de couleur jaune à jaune-vert, auréoles jaunes Croissance nulle à légère, colonies de couleur tirant sur le jaune avec ou sans auréoles jaunes 10 à 100 colonies de couleur tirant sur le blanc, auréoles rouges Croissance bonne à importante, colonies de couleur tirant sur le blanc, auréoles rouges Couleur tirant sur le marron à vert olive METHODE Matériel fourni BD Brilliant Green Agar (boîtes de Pétri Stacker de 90 mm). Produit soumis à contrôle microbiologique. Matériel non fourni Les milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis. Types d’échantillons Echantillons fécaux ou écouvillons rectaux de patients susceptibles d’être infectés par des espèces de Salmonella autres que S. typhi (voir également la section « CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE PROCEDURE »). Le milieu est également utilisé pour les matières animales ou alimentaires. Mode opératoire du test Strier directement l’échantillon ou ensemencer le milieu avec une petite quantité de croissance bactérienne issue d’un milieu d’enrichissement liquide tel qu’un bouillon de culture au tétrathionate. Il est recommandé d’ajouter un ou deux milieux moins sélectifs, en particulier lorsque la population recherchée est faiblement représentée dans la matière. Diluer par striation et incuber les boîtes de Pétri en aérobie entre 35° C et 37° C pendant 42 à 48 heures. Observer les résultats sur les boîtes de Pétri après 18 à 24 heures, puis après 42 à 48 heures. Résultats Généralement, les organismes isolés sur la BD Brilliant Green Agar présentent la morphologie suivante : Organismes Résultats Salmonella (autres que S. Typhi Colonies de couleur blanche à rouge cernées de zones et S. Paratyphi) rouges S. Typhi et S. Paratyphi Croissance nulle ou traces de croissance Espèces de Shigella Croissance nulle ou traces de croissance Escherichia coli, Klebsiella et Colonies de couleur jaune à tirant sur le vert, cernées de zon Enterobacter jaune-vert Pseudomonas Croissance nulle ou traces de croissance Bactéries Gram-positives Croissance nulle ou traces de croissance PA-212097.07 -2- CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE La BD Brilliant Green Agar est un milieu extrêmement sélectif servant à l’isolation des Salmonella, y compris au sein de matières fortement contaminées, notamment les fèces.4-8 Il convient d’ensemencer avec l’échantillon ou la matière des milieux moins sélectifs destinés à l’isolement des Salmonella, ainsi qu’une boîte de Pétri MacConkey II Agar. Proteus peut ressembler à des pathogènes entériques en produisant des colonies de couleur blanche à rouge cernées de zones rouges. Bien que certaines souches puissent s’y développer, la BD Brilliant Green Agar n’est pas prévue pour l’isolement des Salmonella de type Typhi et S. Paratyphi. Il est certes possible de procéder à divers tests diagnostiques directement dans ce milieu, mais, pour obtenir une identification complète, il convient d’employer des tests biochimiques et sérologiques faisant appel à des cultures pures. REFERENCES 1. Kristensen, M., V. Lester, and A Jurgens. 1925. On the use of trypsinized casein, brom thymol blue, brom cresol purple, phenol red and brilliant green for bacteriological nutrient media. Brit. J. Exp. Pathol. 6: 291. 2. Kauffmann, F. 1935. Weitere Erfahrungen mit den kombinierten Anreicherungsverfahren für Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117: 26. 3. The United States Pharmacopeial Convention. The United States Pharmacopeia-National formulary, current edition. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. 4. Flowers, R.S., W. Andrews, C.W. Donelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk products, p. 103-212. In: R.T. Marshall (ed.). Standard methods for the examination of dairy 5. products, 16th ed. American Public Health Association, Washington DC, USA. 6. Osborn, W.W., and J.L. Stokes. 1955. The determination of Salmonellae in foods. Food and Drug Laboratories, Ottawa, Canada. 7. MacFaddin, J. 1985. Media for the isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, USA. 8. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003. Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. CONDITIONNEMENT BD Brilliant Green Agar No réf. 212097 Milieux en boîtes de Pétri prêts à l’emploi, 20 unités INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 [email protected] http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD PA-212097.07 -3-
