Fiche maître et assistant technique Collège de Genève - Laboratoire de biologie Antibiotiques et microorganismes Objectif principal • Mettre en évidence les effets des antibiotiques sur les cellules procaryotes ou eucaryotes. • Utiliser des techniques simples de microbiologie. Durée • préparation avec des boîtes déjà coulées: 30 minutes • incubation: 3 jours à 30 °C puis conservation au réfrigérateur jusqu’à l’observation des résultats. • observation, conclusions, discussion des résultats: 15 minutes. Conseils pratiques • Le matériel spécifique (voir ci-dessous) peut être obtenu auprès du laboratoire de M. Patrick Linder à l'adresse suivante: Biochimie Médicale CMU 1 rue Michel Servet 1211 Genève 4 Téléphone: 702 54 84 On peut envisager, si l’on a le temps (OS), de faire couler les boîtes par les élèves: • marquez sur les boîtes le nom de l’antibiotique choisi ainsi que les points A et B pour situer le gradient d’antibiotique. • mélangez 15 ml d’agar avec l’antibiotique indiqué • coulez l’agar dans une boîte inclinée (posée de biais sur un crayon par exemple), laissez refroidir. • après refroidissement, coulez à plat par dessus, 15 ml d’agar sans antibiotique. • fermez les boîtes avec du Parafilm pour éviter toute contamination. • laissez les boîtes incuber 3 jours à 30 °C ou plus longtemps à température ambiante. Matériel pour la classe A disposition auprès du labo de P. Linder • boîtes déjà coulées au prix de CHF 20.–-/ 20 boîtes, ou • matériel nécessaire pour couler les boîtes au prix de CHF 15.– / 20 boîtes: - YPD liquide: 1 % yeast extract, 2 % Bacto-peptone, 2 % glucose, 15g d'agar-agar - YPD avec 0,015 ml Ampicilline (100 mg/ml H2O) - YPD avec 0.001 ml Cycloheximide (10 mg/ml H2O) - YPD avec 0,75 ml Chloramphenicol (4 g/50 ml éthanol). Matériel pour 2 élèves • 10 pipettes Pasteur stériles • stylo pour annoter les boîtes A disposition auprès du labo de P. Linder • suspension de levures • suspension de bactéries. Webographie www.expasy.ch/linder/ecole/Protocols.html ➞ ce site contient l'ensemble des protocoles de laboratoire proposés par M. Patrick Linder. 1/1