memoire de magister - Université d`Oran 1 Ahmed Ben Bella

MEMOIRE DE MAGISTER
Spécialité : phytopharmacie
Détection de Pseudomonas savastanoi, agent causal de la tuberculose de l’olivier
Evaluation et comparaison d’une technique d’isolement sur milieux de cultures et d’une
technique sérologique (immunofluorescence)
me
Soutenu le
: 23 / 05 / 2013, devant le jury composé de :
M
er
HADADJI. Miloud……………. Professeur : ….…Université d’Oran…………..Président.
M
er
GUESSAS Bettach … …….. … . Professeur : …… Université d’Oran ………...Examinateur.
M
me
BENMECHERNANE ZINEB… Professeur : ……..Université d’Oran ……..….Examinateur.
M
er
BABA HAMED Bey…………... Professeur : …… Université d’Oran ….……..Rapporteur.
M
er
TENDJAOUI Bakhti………. ….. Directeur : ……..SRPV ORAN.……………..Membre invité.
Année universitaire : 2012-2013
Présentée par : M SERDOUN BEKRI Naoual

Remerciements
Ce travail de magister à été réalisé à la station régionale de la protection des végétaux de
Misserghin- Oran (laboratoire de bactériologie).
Après les louanges à Dieu l’unique, l’éternel je tiens à exprimé mes sincères remerciements aux
personnes qui m’ont apporté leur aides et qui ont contribuées à l’élaboration de ce mémoire.
Je remercie le tout puissant de m’avoir donné le courage et la force de réaliser mon rêve et celui de
mes chers parents.
Mes remerciements s’adressent à M
er
HADADJI. Miloud, professeur a l’université d’Oran d’avoir
accepté de présider le jury de soutenance.
J’exprime ma gratitude à M
er
GUESSAS Bettach, d’avoir accepté d’examiner ce travail.
Je remercie très chaleureusement Madame
BenMechernene Zineb, qui a accepté d’examiner mon
travail.
Je tiens tous particulièrement à exprimé ma gratitude envers mon encadreur M
er
BABA HAMED
Bey, professeur à l’université d’Oran au département de biotechnologie ; pour sa disponibilité, pour le
temps et la patience qu’il m’a accordé tout au long de ce travail et pour son appui qui ma permis de réaliser
cette étude.
Je remercie particulièrement M
er
TANDJAOUI Bakhti, directeur de la station régionale de la
protection des végétaux, qu’il trouve ici l’expression de ma profonde reconnaissance et gratitude pour
m’avoir guidé dans mon travail.
J’adresse un très grand merci à toute l’équipe du département de bio statistique à l’INESM d’ Oran,
plus particulièrement à docteur RAYEH, Madame LARBI, et M
elle
CHENNI, qui m’ont accueilli et m’ont
apporté leurs concours pour développer mes connaissances en statistiques.
Un grand merci à ma collègue M
elle
TOUATI Karima pour l’amour et le soutien qu’elle m’a
témoigné lors de la rédaction de cette thèse et à Samya SEDDAR YAGOUB pour ces conseils sa
gentillesse et sa bonne humeur ainsi qu’a Madame SEBANE Rym pour ses précieux conseils.
En fin, je remercie toute l’équipe de la SRPV d’Oran.
Naouel BEKRI

Dédicaces
Je dédie ce modeste travail :
- Aux prunelles de mes yeux, mes très chers parents qui m’ont apprit que
le succès à pour l’unité la sueur et que ça se gagne et n’est jamais offert.
A mon marie, mes frères, ma sœur, et mes belles-sœurs qui m’ont
toujours soutenu et encouragé au cours de la réalisation de cette thèse.
A mes adorables petits anges : Mes enfants Ryhem et Rayane.

Résumé :
Pseudomonas savastanoi, pathovar savastanoi, organisme de quarantaine, est l’agent causal du
chancre bactérien de l’olivier. Découverte au 4
ème
siècle par le grec Theophrastus, cette bactérie est
considérée comme le seul pathogène responsable de la formation des nécroses bactériennes appelées
communément tuberculose de l’olivier. Cette maladie est considérée comme un problème majeur par
son effet néfaste sur la croissance, le rendement et surtout la qualité de l’huile d’olive.
Aucun moyen de lutte curatif n’existe à ce jour contre la nécrose bactérienne. Seul des
techniques préventives permettent de contenir la maladie. L’un des points clés de cette lutte est la
production de matériel de multiplication (bois et plants d’oliviers) indemne de cette bactérie afin
d’éviter sa dispersion.
Pour cela, des méthodes analytiques de détection de Pseudomonas savastanoi doivent être
développées et adaptées à un travail de routine. La mise en œuvre d’une technique d’isolement sur
milieux de cultures et d’une technique sérologique « immunofluorescence », est envisageable dans ce
but.
Dans la présente étude, les protocoles existants relatifs à ces deux techniques ont été évalués sur
des macérâts contaminés.
La méthode d’ensemencement sur milieux de cultures présente l’avantage d’une grande facilité
de mise en œuvre. Cependant sa sensibilité, d’environ 10
5
ufc.ml
-1
reste assez faible. C’est pourquoi
l’utilisation de la méthode d’immunofluorescence, dont la sensibilité est beaucoup plus fine, environ 10
3
ufc.ml
-1
, peut être envisagée afin de confirmer ou d’infirmer les résultats relatifs aux échantillons
apparaissant négatifs à l’isolement sur milieux gélosés.
Il faut noter qu’il s’agit d’un pathogène particulièrement virulent des oliveraies et qui se propage
facilement, il nécessite donc pour sa détection une téchnique très sensible et à moindre coût.
Mots clés : Pseudomonas savastanoi – Tuberculose – Macérât – Bactérie de quarantaine –
olivier – Détection – Colonie bactérienne – Milieux de cultures – Isolement – Immunofluorescence.

Abstract
Pseudomonas savastanoi, pathovar savastanoi is the quarantine organism that causes bacterial
chancre of olive. Discovered in fourth century by the Greek
Theopharus, this bacterium is the one
pathogen responsible of formation of the bacterial necrosis commonly called olive tuberculosis. This
disease is a hull problem with its harmful effect on the growth, the yield and the quality of olive oil.
There is no means curative treatment of bacterial necrosis just found until now. Only preventives
techniques can be used for this disease. One of the means of control is the production of multiplication
material (branch, plant) without contamination of Pseudomonas savastanoi, pathovar savastanoi.
In this case, analytical methods of detection of Pseudomonas savastanoi must be developed and
adapted with habit work. The use of technique of isolation on artificial medium and technique
immunofluorescence is considered for that.
In this study, the protocols of the two kinds of technique have been evaluated on macerates
infected.
The method of culture on artificial medium has an advantage of high easiness. However its
sensibility, ~10
5
ufc.ml
-1
stays no important. That is why the use of the immunofluorescence, whose
sensibility is so weak, ~10
3
ufc.ml
-1
, can be considered for confirmation or not the results about the
samples which appear negatives at the isolation on medium.
It is important to know that we have a pathogen particularly virulent of olive’s plantation and its
propagation is so easy, it needs for its detection a real technique and not more expensive.