Effets de Nigella sativa L. dans la maladie cœliaque de l`adulte et

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR
ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE DES FRERES MENTOURI
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département de Biochimie et Biologie
Moléculaire et Cellulaire
N° d’Ordre :………………
N° de Série :………………. Thèse
En vue de l’obtention du
DOCTORAT EN SCIENCES
En
Biologie Moléculaire et Cellulaire
THÈME
Effets de Nigella sativa L. dans la maladie cœliaque de
l’adulte et potentiel protéolytique de la protéase des graines de
Nigelle sur la gliadine.
Présentée par : Nousseiba ABED
Soutenu le : 05 / 06 / 2016
Devant le jury :
Président : Pr. Abdelkader ROUABAH Université des Frères Mentouri.
;Constantine
Directeur de thèse : Pr. Leila ROUABAH Université des Frères Mentouri.
;Constantine
Examinateurs : Pr. Yacine KITOUNI Université Constantine 3.
Pr. Mohamed BOUGRIDA Université Constantine 3.
Pr. Abdenacer BOUDAH E.N.B. Constantine.
ANNEE UNIVERSITAIRE 2015-2016

TABLE DES MATIERES
RÉSUMÉS
LISTE DES ABREVIATIONS
LISTE DES FIGURES
LISTE DES TABLEAUX
INTRODUCTION 1
CHAPITRE. 1: ANALYSE BIBLIOGRAPHIQUE
Première partie : La maladie cœliaque
I. Définition 4
II. Historique 4
III. Epidémiologie 5
IV. Formes de la maladie cœliaque 5
V. Facteurs d’apparition de la maladie cœliaque 7
V.1 Fraction toxique du gluten 7
V.2. Facteur de la perméabilité intestinale .8
V.3 Facteur génétique ;8
V.4 Autres facteurs 8
VI. Physiopathogénie 10
VI.1 Voie immunitaire acquise 10
VI.2 Voie immunitaire innée 11
VII. Présentation clinique 12
VIII. Diagnostic 14
VIII.1. Tests sérologiques 14
VIII.2. Tests histologiques 15
VIII.3. Typage de HLA 15
VIII.4. Bilans Complémentaires 15
IX. Classification de l’atteinte histologique 15
X. Complications 17
XI. Traitement 17

XII. Prévention 18
Deuxième partie: La plante Nigella sativa L.
I. Généralités 19
II. Description de la plante 19
III. Composition chimique des graines de Nigella sativa 20
III.1 Les huiles fixes 21
III.2 L’huile essentielle 21
III.3 Les Alcaloïdes 22
III.4 Les triterpènes saponines 22
III.5 Dérivés phénoliques et flavonoïdes 22
III.6 Les protéines 23
III.7 Les vitamines et sels minéraux 23
IV. Activités biologiques et propriétés pharmacologiques 23
IV.1. Propriétés antioxydantes 24
IV.1.1 Activité antioxydante in vitro 24
IV.1.2 Activité antioxydante in vivo 24
IV.2 Effets sur le système immunitaire 25
IV.3 Effets anti-inflammatoire, analgésique et antipyrétique 26
IV.4 Activité antibactérienne et antifongique 27
IV.5 Activité antitumorale 27
IV.6 Effets sur le système gastro-intestinal 28
IV.7 Effets sur le système respiratoire 29
IV.8 Activité antidiabétique 29
IV.9 Activités hypocholestérolémiante et hypolipémiante 30
IV.10 Activités cardio-vasculaire 30
IV.11 Propriétés neurologiques 30
IV.12 Propriétés sur les fonctions de reproduction et de fertilité 31
IV.13 Autres activités de N. sativa 31
V. Toxicité de Nigella sativa 32
Troisième partie : les protéases
I. Définition des enzymes protéolytiques 33

II. Propriétés 33
III. Classification des protéases 33
IV. Protéases végétales 34
CHAPITRE. 2: MATERIEL ET METHODES
I. Recueil et exploration des données 35
II. Recrutement des malades 36
Le premier essai clinique 37
Le deuxième essai clinique 37
III. Comparaison de l’effet de la poudre de Nigella sativa avec celui du RSG 38
IV. Analyse statistique 38
V. Etude du potentiel protéolytique 39
.V.1 Extraction de la protéase 39
V.2 Dosage de l’activité protéolytique de l’extrait brut 39
V.3 Etude de quelques caractéristiques de l’activité protéolytique de l’extrait brut 40
V.3.1 Détermination du pH optimum 40
.V.3.2 Détermination de la température optimale 40
.V.3.3 Stabilité à la température optimale 41
VI. Purification partielle de la protéase 41
VI.1 Précipitation par le sulfate d’ammonium 41
VI.2 Dialyse 42
.VI.3 Chromatographie d’exclusion moléculaire 42
VII. Etude de l’action de la protéase sur la gliadine 42
VII.1 Extraction des gliadines 42
VII.2. Incubation de l’extrait enzymatique brut avec la gliadine 43
VII.3. Incubation de la protéase partiellement purifiée avec la gliadine 43
VII.4.Electrophorèse en présence de Sodium Dodécyl sulphate (SDS-PAGE) 44
VII.5.Chromatographie liquide à haute performance en phase inverse (RP-HPLC) 45
CHAPITRE. 3 : RÉSULTATS
I. Détermination du profil clinique de la maladie cœliaque des patients 46
I.1. Caractéristiques épidémiologiques de l’échantillon 46
I.2. Caractéristiques cliniques 50
I.2.1. Signes digestifs 51

I.2.2. Signes extra-digestifs 51
I.2.3. Perturbations des bilans biologiques 52
I.2.4. Pathologies associées 53
II. Effets de la graine de Nigella sativa sur les manifestations cliniques
de la maladie 54
II.1. Effets du RSG sur différents paramètres dans la maladie 54
.II.1.1. Description de l’échantillon 54
II.1.2.Caractéristiques cliniques, para-cliniques et morbides 57
II.1.3. Relation entre durée et assiduité du RSG avec les différentes manifestations 61
II.1.4. Evolution des différents paramètres de la maladie après RSG 64
II.1.5. Analyse des données des patients assidus vis-à-vis du RSG 69
.II.2. Etude de l’effet de Nigella sativa sur les manifestations cliniques 72
II.2.1. Résultats du premier essai clinique 72
II.2.1.1. Evolution des fréquences des différents symptômes 73
II.2.1.2. Dosage des anticorps spécifiques 76
II.2.1.3. Effet dose administrée et de la durée sur l’amélioration
.des paramètres cliniques 77
II.2.1.4. Suivi clinique des malades après arrêt de la prise de NS 80
II.2.1.5. Suivi sérologique des malades après arrêt de la prise de NS 83
II.2.2. Deuxième essai clinique 83
II.2.2.1. Evolution des manifestations cliniques après le deuxième essai 84
II.2.2.2. Evolution du dosage des anticorps spécifiques à la fin du traitement 87
II.3. Comparaison de l’effet de la prise de la poudre de NS avec un RSG 88
II.3.1. Premier essai clinique 88
II.3.2. Deuxième essai clinique 90
III.Potentiel protéolytique de la protéase sur la gliadine 92
III.1 La mise en évidence de l’activité protéolytique de l’extrait enzymatique 92
III.1.1. Caractéristiques de l’activité protéolytique de l’extrait enzymatique brut 92
Effet du pH 92
Effet de la température 93
Stabilité à la température optimale 93
III.1.2. Résultats de la purification partielle 94
Précipitation au sulfate d’ammonium et dialyse 94