Blouin_Julie_2005_memoire - Papyrus

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1/.
3;
/,
/
Université de
Montréal
CARACTÉRISATION
DE
MUTANTS DE
STAFHYLOCOCCU$
A UREU8
RÉSISTANTS
À
LA
STREPTONIGRINE
Par
JULIE BLOUIN
Département
de
pathologie
et microbiologie
F
aculté
de
médecine
vétérinaire
Mémoire présenté
à la
Faculté
des
études
supérieures
en
vue
de
l’obtention
du grade
Maître
ès
sciences
(M.
Sc.)
en
sciences
vétérinaires
option
microbiologie
Avril,
2005
/
?g
(!
2005
©Julie Blouin,
2005

bÇfl
J
L—
1}V
/

Université
de
Montré
al
Direction
des
bibliothèques
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L’auteur
a
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Université
de
Montréal
faculté
des
études
supérieures
Ce
mémoire
intitulé
CARACTÉRISATION
DE
MUTANTS
DE
STAPHYLOCOCCUS
A UREUS
RÉSISTANTS
À
LA STREPTONIGRNE
Présenté
par
JULIE
BLOUIN
a
été
évalué par
un jury composé
des
personnes
suivantes
Serge
Messier,
président-rapporteur
Mario
Jacques,
directeur de
recherche
françois
Malouin,
codirecteur
Marie
Archambault, membre
du
jury

RÉSUMÉ
$taphyÏococcus
aureus
est une
bactérie qui
fait partie
des
principaux
agents
infectieux
responsables
des
cas de
mammite bovine.
Plusieurs
facteurs
de virulence
ayant
un rôle
à jouer lors
de
l’infection
ont
été
mis en
évidence. Chez
l’hôte,
le fer se
retrouve
rarement
à l’état
libre et sa
disponibilité
est
d’une importance majeure
pour
la croissance
de
pratiquement tous
les
microorganismes.
Il
est donc
probable
que
£
aureus ait
développé
plusieurs
mécanismes
spécifiques
à l’obtention
de
cet élément
nutritif
essentiel.
L’objectif
de
cette
étude
est donc
de créer des
souches
de £ aureus
déficientes
au
niveau de
l’acquisition
du fer
dans le but
d’identifier
de nouveaux
gènes
responsables
du phénotype
observé. Une
technique
de mutagenèse
par
transposon
a
d’abord
été utilisée
pour générer
une
banque de
mutants de
la souche
S.
aureus
RN6390
avec le
Tn916. Quatre
mutants
ont
ensuite
été
isolés
suite à
une sélection
sur
un milieu
contenant
de
la streptonigrine.
Cet
antibiotique,
qui nécessite
la
présence
de fer
pour
son activité inhibitrice,
a permis
d’isoler
des
mutants
déficients
au niveau
de
l’acquisition
du
fer.
Le gène
muté fut ensuite identifié
par
séquençage, pour
trois de ces
mutants.
Les
résultats ont
démontrés
que le Tn916
s’est
inséré
dans le
gênefip (1
497
pb) qui
code
pour
la protéine
fLP (f
mtA-like
protein)
chez
le
mutant
LS21; entre
les gènes
SA
V1476
(175
pb)
et SA
V1477
(77
pb),
chez le
mutant
LS22,
qui
codent
respectivement
pour une
protéine
ribosomale
30S et
pour
une protéine
hypothétique;
et
dans la
région
promotrice
du
gène
dapE
(1224
pb) qui
code
pour la
désuccinylase
de l’acide
N-succinyl-L-L-diaminopimélique
(SDAP-déacylase)
chez le
mutant
LS23.
La présence
d’une
boîte fur
a
été
identifiée
en aval du gène
SA
V]476
chez
le
mutant
LS22.
Par
contre,
il
n’a pas été
possible
de
démontrer,
par
RT-PCR,
une
régulation
par
le
fer
pour ces
gènes. Un
modèle
de mammite
chez
la souris
a aussi été
mis au point
et
ces trois
mutants furent testés
avec la souche mère
RN6390
Sm’.
Les
résultats montrent
que la
croissance
des
mutants
est
légèrement
atténuée
par rapport
à la
souche mère,
autant
en
condition
in vivo
qu’in vitro. Une
hybridation
sur des
puces
à
ADN
a
démontré
un profil
semblable
pour
les 4 mutants
et
révèle
que
ceux-ci
ont des
systèmes
de transport
du fer
généralement
moins
induits que
ceux
retrouvés
chez la
souche mère RN6390
SmR,
dont le
système isd,
impliqué
dans
le transport
de l’hème.
MOTS
CLÉS mammite
bovine, Staphylococcus
aureus, mutagenèse,
fer, récepteur,
streptonigrine.