Diagnostic indirect en microbiologie

L3 médecine AMIENS 2012/2013 – S5 UE1 – Dr C FRANCOIS - Diagnostic indirect
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Diagnostic indirect en microbiologie
- Deux possibilités pour poser un diagnostic en microbiologie :
o Soit mise en évidence, observation directe du microorganisme = Diagnostic
direct
 Bactériologie +++ (ECBU, EPS…)
o Soit mise en évidence indirecte du microorganisme par détection des
mécanismes immunitaires induits par le pathogène = Diagnostic indirect
 Virologie +++
1 Intérêt du diagnostic
- Preuve de l'origine de l'infection
- Suivi de l'évolution biologique de l'infection
- Évaluation du statut immunitaire d'un patient
- Appréciation de la réponse vaccinale
- Éviter la transmission d'un pathogène au cours de don d'organes (Toxoplasme +++)
- Étude du pathogène en cause et de ses variants.
2 Étapes du diagnostic
- Prélèvement → phase pré-analytique (jusqu'à ce que le tube soit « techniqué ») →
phase analytique → validation technique → validation biologique → édition du
résultat
- Phase pré-analytique :
o prescripteur OBLIGATOIRE
o patient : nom/prénom/Sexe/Age..
o Renseignements complémentaires +++
 Nature des principales manifestations pathologiques : date
d'apparition, localisation des lésions infectieuses, état
d'immunodépression, prise d'antiviraux, d'ATB, femme enceinte/date
début de grossesse
 Voyages récents
 Vaccination datée
 Transfusion
 But de l'analyse
- Phase analytique : méthodes utilisées :
o diagnostic direct
o diagnostic indirect

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3 Diagnostic indirect
- Principalement par mise en évidence d’Ag dans le sérum +++
- De moins en moins pratiqué pour la recherche d’Ag dans le LCS maintenant
technique de bio mol et diagnostic direct +++
- Recherche :
o Séroconversion (apparition d’Ac)
o ↗ IgG
o Présence d’IgM
o Avidité des IgG (permet de dater l’infection) mesurée par ELISA +++ :
 Faible : infection récente
 Forte : infection ancienne
- Cinétique d’apparition des Ac :
o Lorsqu'on introduit un Ag dans l'organisme, le premier type d'Ac produit sont
les IgM, il y a ensuite un pic d'IgG (= réponse primaire).
o Réintroduction de l’Ag => réponse secondaire avec production d’IgG

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4 Techniques utilisées pour le diagnostic indirect
- Ac avec propriétés définies = neutralisation, hémagglutination
- Ac sans propriétés définies = ELISA, immunofluorescence indirecte, Western Blot
Anticorps sans propriétés
définies
Anticorps avec propriétés
définies
Échantillon
Sérum principalement (sérologie)
Technique
ELISA +++
Immunofluorescence indirecte
Western blot
Séroneutralisation
Inhibition de l’hémagglutination
Fixation du complément
Principe
Mise en évidence d’un 2ème Ac
marqué dirigé contre un isotype
donné pour révéler le complexe
Ag-Ac
Utilisation d’une propriété
fonctionnelle particulière d’une sous
population d’Ac
Avantages
Distinction possible entre une
infection récente (IgM) et ancienne
Valeur protectrice des Ac
neutralisants ou inhibant
l’hémagglutination
Pathologies
concernées
Très large
Limitée à certaines familles de virus
Application
Nombreuses, infections récentes et
anciennes
Évaluation de l’efficacité d’une
vaccination
Diagnostic d’infection : ↗ du titre
d’Ac entre 2 sérums
Transport des
échantillons
Pas de conditions particulières
Inconvénients
- Fenêtre sérologique (HCV production d’Ac qu’après 70jours, etc.)
- Impossibilité d’exclure une étiologie
- Réactions faussement positives (réactions croisées, etc.)
- Situations compliquant l’interprétation :
o Administration passive d’IgG
o Hémodilution
o États dysimmunitaires

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- Western blot = immuno blot = examen de certification quand une sérologie faite par
ELISA est positive.
- Le Western Blot Toxoplasmose permet de savoir si les Ac sont d'origine maternelle
ou non et donc s'il y a eu transmission. → seules les IgG maternelles passent le
placenta. Si par exemple on retrouve des IgM c'est que le bébé en a produit et cela
permet de diagnostiquer une infection in utero.
- Dans certains cas le dg indirect est inutile puisque certain Ac sont présent chez 80-
90% des gens (ex : Ac anti HSV).
- Avidité des IgG :
o utilise l'existence d'une maturation de la réponse immunitaire humorale :
augmentation de l'affinité intrinsèque paratope/épitope
o plus l'infection est ancienne, plus les IgG présentent une avidité élevée,
o Intérêt dans les infections materno-foetales.
o La détermination de l'avidité : affinité fonctionnelle des IgG permet de
distinguer primo infection et infection ancienne → CMZ, rubéole,
toxoplasmose

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5 Conclusion
- Quand c'est possible il faut prescrire le diagnostic direct +++ (PCR)
o Mais attention à ne pas prescrire inutilement des PCR car cout +++
- Conditions de prélèvement +++
- Renseignements cliniques