Milieu Hugh et Leifson 1) Intérêt. Ce milieu permet de déterminer la voie d’attaque du glucose qui est utilisé comme source énergie par les bactéries. Pour synthétiser de l’énergie, les bactéries peuvent attaquer par : Voie oxydative : Le glucose est utilisé uniquement en présence de dioxygène, ce qui libère une petite quantité d’acides. Voie fermentative : Le glucose est utilisé aussi bien en présence de dioxygène qu’en l’absence, ce qui libère une forte quantité d’acides. 2) Composition. Composant Quantité Rôle (g/L) Base nutritive avec un peu 2 de peptones Facteur de croissance et source de carbone et azote Bleu de Bromothymol NaCl 0,03 5 Indicateur de pH Source de minéraux et maintien de K2HPO4 0,3 de l’isotonie Agar 2,5 Gélifiant 3) Principe. La voie d’attaque du glucose est étudiée grâce à : La présence du glucose comme seul glucide Et du BBT comme indicateur de pH. Ainsi, l’utilisation du glucose se traduira par une acidification du milieu qui ce verra par le virage du bleu de bromothymol a sa teinte acide qui est le jaune. 4) Technique ensemencement. Ajout de sucre ( 6,7 gouttes). Solidifier le milieu en le plaçant dans un bain d’eau froide. Ensemencer par une piqûre centrale à l’aide du fil droit. Incuber 24 H à 37°C, bouchon dévissé. 5) Lecture. Après 24 heures d’incubation à 37°C : Vérifier s’il y a eu culture. Interpréter le virage de l’indicateur coloré. Observation Interprétation Acidification du Acidification du Alcalinisation du milieu révélée par milieu révélée par milieu révélée par en haut du tube : dans tout le tube : en haut du tube : Attaque du glucose Attaque du glucose en Pas d’attaque du uniquement en présence ou en glucose, mais attaque présence de l’absence de des peptones comme l’indicateur de pH dioxygène l’indicateur de pH dioxygène l’indicateur de pH source de carbone et d’énergie Conclusion La bactérie La bactérie dégrade le par voie oxydative fermentative dégrade le glucose glucose par voie La bactérie inerte vis-à-vis du glucose