fiche_technique_Hugh_et_Leifson

Milieu Hugh et Leifson
1) Intérêt.
Ce milieu permet de déterminer la voie d’attaque du glucose qui est
utilisé comme source énergie par les bactéries.
Pour synthétiser de l’énergie, les bactéries peuvent attaquer par :
Voie oxydative : Le glucose est utilisé uniquement en
présence de dioxygène, ce qui libère une petite quantité d’acides.
Voie fermentative : Le glucose est utilisé aussi bien en
présence de dioxygène qu’en l’absence, ce qui libère une forte
quantité d’acides.
2) Composition.
Composant
Quantité
(g/L)
Rôle
Base nutritive avec un peu
de peptones
2
Facteur de croissance et source de
carbone et azote
Bleu de Bromothymol
0,03
Indicateur de pH
NaCl
5
Source de minéraux et maintien de
K2HPO4
0,3
de l’isotonie
Agar
2,5
Gélifiant
3) Principe.
La voie d’attaque du glucose est étudiée grâce à :
 La présence du glucose comme seul glucide
 Et du BBT comme indicateur de pH.
Ainsi, l’utilisation du glucose se traduira par une acidification du
milieu qui ce verra par le virage du bleu de bromothymol a sa teinte
acide qui est le jaune.

4) Technique ensemencement.
 Ajout de sucre ( 6,7 gouttes).
 Solidifier le milieu en le plaçant dans un bain d’eau froide.
 Ensemencer par une piqûre centrale à l’aide du fil droit.
 Incuber 24 H à 37°C, bouchon dévissé.
5) Lecture.
Après 24 heures d’incubation à 37°C :
 Vérifier s’il y a eu culture.
 Interpréter le virage de l’indicateur coloré.
Observation
Interprétation
Acidification du
milieu révélée par
l’indicateur de pH
en haut du tube :
Attaque du glucose
uniquement en
présence de
dioxygène
Acidification du
milieu révélée par
l’indicateur de pH
dans tout le tube :
Attaque du glucose en
présence ou en
l’absence de
dioxygène
Alcalinisation du
milieu révélée par
l’indicateur de pH
en haut du tube :
Pas d’attaque du
glucose, mais attaque
des peptones comme
source de carbone et
d’énergie
Conclusion
La bactérie
dégrade le glucose
par voie oxydative
La bactérie dégrade le
glucose par voie
fermentative
La bactérie inerte
vis-à-vis du glucose