Étude de l`implication de Gdt1 dans l`homéostasie golgienne de

Etudedel’implicationdeGdt1dansl’homéostasiegolgiennede
Saccharomycescerevisiae
Eudoxie DULARY,SvenPOTELLE,FrançoisFOULQUIER etSandrine DUVET
UnitéduGlycobiologieStructuraleetFonctionnelle/UMR8576CNRS
UniversitédesSciencesetTechnologiesdeLille59655Villeneuved’A scq
GDT1/TMEM165
• Laglycosylationestunemodificationdesprotéinesimpliquée
dansdes phénomènesphysiologiquestelsquelamigration
cellulaireet les interactionscellules/cellules.
• ImplicationdelaN-Glycosylationdansdespathologiestellesque
lecanceroules Congenital Disorders ofGlycosylation(CDG).
• UnedéficienceenTMEM165conduitàunCDG-II.
• Protéinetransmembranaire de324AAchezl’Homme.
Intérêtdu« modèlelevure »
• Présence deséquences degènes très conservées entre GDT1(S.
cerevisiae) et TMEM165(Homme)
• Modèlefaciled’utilisation
• Facilitédesuppressiondegènes dansles levures
• Complémentation(restaurationdesgènes)possibleetrapide
• Possibilitéderéaliser des mutationsdegènes
Problématique
• Systèmes de Glycosylationdifférentsentrelalevure
(mannosylation)etl’Homme(galactosylation,sialylation).
• MAIS l’environnementgolgien(Homéostasiegolgienne)est
semblable entrel’hommeet lalevure.
TMEM165/GDT1estuneprotéinetransmembranairedontla
déficienceconduitàundéfautdeglycosylationchezl’Homme.
Résultatsattendus
WT
Δgdt1
Ca2 + 0,5M
-
-
+
+
-
-
+
+
Mn 1mM
-
+
-
+
-
+
-
+
2+
• Défautde
Glycosylationen
présence deCa2+
• Défautrestauré en
présence deMn2+
• TMEM165/GDT1
transporteurde
Mn2+?
Conclusionetperspectives
• TMEM165/Gdt1estuntransporteurimpliquédans
l’homéostasie golgienne.
• Rôlepotentieldansletransportde Manganèse,ion
indispensableauxglycosyltransférases.
• Quelssontlesdomainesimpliquésdanscetransport?
• Quelestl’impactdesmutationsobservéeschezlespatientsdans
lafonctionnalitédeTMEM165?
Quelest lerôledeTMEM165/GDT1dansl’homéostasiegolgienne?
Etquelest safonction?
Savoirfaire/Savoirêtre
• Disciplinaire: CultureCellulaire(MammifèresetLevures),
Transfections/Transformationsde levures, WesternBlot/
Immunoprécipitation /Lectines Blot,Immunofluorescencepar
microscopieconfocale,Spectrométriedemasse,Activité
invertase surgel natif
• Nondisciplinaire:capacitéd’adaptation,autonomie,rigueur,
persévérance, travaild’équipe,rédactionderapports,
transmissiondes connaissances, espritdesynthèse
Financements
• Boursedethèse: financementpublic(MRT)
• Recherche:financementpublic(CNRS)/ANR/Mizutani /E-Rare