Perspectives, C. Le Caignec, CHU de Nantes
publicité
Après une IMG pour anomalie génétique parentale caractérisée : place du Diagnostic Pré-Implantatoire (DPI) Pr Cédric Le Caignec Service de Génétique Médicale Coordonnateur du centre de DPI de Nantes CHU – Nantes CPDPN, 17 janvier 2014 Après une IMG pour anomalie génétique parentale caractérisée : place du Diagnostic Pré-Implantatoire (DPI) Le DPI est une méthode diagnostique qui permet de sélectionner un embryon exempt d’une maladie génétique, d’une anomalie chromosomique ou d’une maladie liée au sexe chez un couple à risque • après une fécondation in vitro • DPI: alternative au diagnostic prénatal • en France, seulement l’anomalie génétique familiale En Grande-Bretagne depuis 1990 En France loi du 29 juillet 1994 (en pratique, depuis 2000) Groupes d’indications du DPI 1 - Identification d’une mutation dans une maladie monogénique 2 - Identification d ’une anomalie chromosomique 3 - Détermination du sexe de l’embryon dans les maladies liées au chromosome X 4 - Bébé HLA compatible 1 - Maladies monogéniques Transmission autosomique dominante 50% embryons sains Demandes examinées 20% Strasbourg 19.5% 19.5% 14.9% Paris Montpellier 1 - Maladies monogéniques Transmission autosomique récessive 75% embryons sains Demandes examinées 20% Strasbourg 21.9% 15.6% 37.5% Paris Montpellier 1 - Maladies monogéniques Transmission liée à l ’X Demandes examinées 20% Strasbourg 20% 26.7% Paris Montpellier 2 - Identification d’un déséquilibre chromosomique DPI « chromosomique » En France - Translocation Robertsonienne parentale équilibrée Translocation Robertsonienne parentale équilibrée t(14;21) Mais la plus fréquente: t(13;14) 2 - Identification d’un déséquilibre chromosomique DPI « chromosomique » En France - Translocation Robertsonienne parentale équilibrée -Translocation réciproque parentale équilibrée Translocation Réciproque parentale équilibrée t(6;10)(p25;q26) Der(6) t(6;10)(p25;q26) t(6;10)(p25;q26) Der(10) t(6;10)(p25;q26) Der(6) Der(10) 2 - Identification d’un déséquilibre chromosomique DPI « chromosomique » En France Demandes examinées 40% Strasbourg 31% 61% Paris Montpellier 3 - Détermination du sexe de l ’embryon Par FISH (préférable) ou par PCR 4 - Bébé HLA compatible Loi du 6 août 2004 Identifier les embryons HLA compatible avec un frère/sœur atteint + indemne d ’une pathologie récessive Probabilité 3/16 soit 18% (compatible (1/4) et sains (3/4)) Mais en fait: 4% Exemple: thalassémie, anémie de Fanconi... Principe de la technique Biopsie embryonnaire: 1 ou 2 blastomères d’un embryon au stade 6-10 cellules (J3) pour un transfert à J4-J5 DPI pour maladies monogéniques en pratique Principe de la technique 1 - Analyse directe par PCR mini-séquençage => quand mutation familiale identifiée ACAG C TATTT G C C GACA A Hétérozygote G->A (C234Y) Mini séquençage (Snap Shot) Principe de la technique Maladies monogéniques 2 - Analyse indirecte 1 1 2 3 4 5 6 7 8 2 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 5 1 1 5 22 5 2 4 1 27 1 4 1 2 3 7 44 7 2 7 7 1 2 3 4 5 5 2 34 5 1 2 2 2 1 1 6 32 1 4 2 4 2 4 7 5 56 7 3 1 2 1 3 1 2 3 5 4 1 2 7 6 6 7 8 9 10 11 12 52 51 11 13 78 71 MUCO D7S480 TA17 D7S486 p.Phe508del AC8 p.Phe508 Normal I1CA AC17 STEINERT 5 CTG / 13 CTG D19S112 D19S207 D19S219 D19S562 D19S217 D19S217 Difficultés du DPI 1- Diagnostic à partir d’une cellule: une seule chance 2- Éviter les contaminations 3- Diagnostic mis au point pour chaque famille - Importance de l’informativité - Mutation identifiée ou non 4- Risque d’ « allele drop out » (ADO) 4- Risque d’ « allele drop out » (ADO) cen CFTR D7S486 (0.2cM) tel I1CA AC8 p.508 AC17 TA17 D7S480 (2cM) Famille Mucoviscidose 1 146 268 220 NORMAL 143 200 188 138 142 272 234 p.Phe508del 135 247 274 220 NORMAL 135 247 184 182 138 272 234 p.Phe508del 135 247 184 142 272 222 p.Phe508del 135 249 180 142 272 222 p.Phe508del 135 249 180 cen CFTR D7S486 (0.2cM) tel Famille Mucoviscidose 1 I1CA AC8 p.508 AC17 TA17 146 D7S480 (2cM) 268 220 NORMAL 143 200 188 146 268 220 NORMAL 143 200 188 138 272 234 p.Phe508del 135 247 274 220 NORMAL 135 247 sain 274 220 NORMAL 135 247 184 142 182 142 182 146 268 220 NORMAL 143 200 188 142 272 222 p.Phe508del 135 249 180 sain 138 272 234 p.Phe508del 135 247 184 142 274 220 NORMAL 135 247 182 sain 142 272 222 p.Phe508del 135 249 180 138 272 234 p.Phe508del 135 247 184 142 272 222 p.Phe508del 135 249 180 atteint DPI chromosomique en pratique Principe de la technique DPI chromosomique => technique d’hybridation in situ en fluorescence (FISH) Validation des sondes sur les lymphocytes du couple DPI chromosomique => technique d’hybridation in situ en fluorescence (FISH) Cellule trisomique 21 Actuellement, 4 centres de DPI en France -Paris -Strasbourg -Montpellier -Nantes Activité 250 cycles par an par centre - cycles de stimulation - après ponction - après transfert 15-20% 20-25% 25-30% Le DPI en pratique à Nantes Constitution du dossier demande de DPI coordonnées du couple courrier médicaux, arbre généalogique résultats des analyses génétiques caryotype parentaux si possible bilan AMP (AMH, CFA) Staff DPI, Staff CPDPN Mise au point technique Consultation pluridisciplinaire Programmation de la tentative Sécretariat DPI: [email protected] Tél.: 02 40 08 33 97
