7. Qu'est ce qui différencie les 3 vecteurs les uns des autres?
8. Quel est l'intérêt d'avoir positionné des codons stops en 3' des sites de clonage?
9. Quel vecteur pGEX a été utilisé pour cloner l'ADNc RSK1 au niveau du site EcoRI?
10. Quel codon stop sera utilisé dans ce cas par le ribosome?
11. Quelle est la taille en acides aminés de la protéine obtenue sachant que la protéine
GST fait 306 acides aminés dans le cas des vecteurs pGEX-1λT et 2T et 307 acides
aminés pour le vecteur pGEX-3X (non compris les acides aminés de la thrombine ou
du facteur X du site multiple de clonage)?
12. La construction finale a été vérifiée par séquençage en utilisant pour la réaction
une amorce en 3' de l'ADNc GST. Ecrire la séquence nucléotidique obtenue.
13. Quel(s) autre(s) test(s) que le séquençage aurait permis de vérifier l'efficacité du
clonage ? Décrire sommairement des protocoles.
Exercice 2
Il est possible de synthétiser des ARNm à partir de nucléotides diP. Par exemple à
partir d'UDP et de CDP on peut obtenir du poly(UC).
nUDP + mCDP poly UC + (n+m) Pi
enzyme
1. Quel est le nom de l'enzyme utilisée?
Pourquoi n'est-il pas nécessaire d'utiliser une matrice?
2. Quels seront les acides aminés incorporés si le copolymère poly(UC) est obtenu à
partir d'un rapport molaire de 4 UDP pour 1 CDP?
Rappel des codons
UUU Phényl alanine UCU Sérine CUU Leucine CCU Proline
UUC UCC CUC CCC
Exercice 3
L'utilisation de certains antibiotiques qui inhibent la synthèse protéique en se liant au
ribosome a permis de préciser l'organisation fonctionnelle du ribosome. La
puromycine est une molécule qui a une forte homologie avec l'extrémité d'un ARNt
chargé par la tyrosine. Ceci lui permet de rentrer dans le site A du ribosome. Une
liaison peut alors se faire entre le peptide porté par l'ARN situé dans le site P et la
puromycine. Le peptide associé à l'antibiotique est alors libéré ce qui entraîne un arrêt
prématuré de la synthèse protéique