Adénocarcinome de l`ethmoïde
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ADENOCARCINOME DE L’ETHMOÏDE FACTEURS PRONOSTIQUES ET MARQUEURS TUMORAUX D. TRIPODI, C. GERAUT CHU NANTES Thèse de sciences soutenue le 1er septembre 2009 Article accepté dans BMC GENOMICS Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 1 Exposition poussières de bois X années Adénocarcinome de l’ethmoïde 2ème cancer professionnel reconnu en France 60 cas par an reconnus en maladie professionnelle Recommandations del'adk ladeHAS Marqueurs tumoraux de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 2 Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 3 Exposition Bois X années Cancer de l’ethmoïde Chirurgie Radiothérapie Survie à 5 ans 60% Effets secondaires +++ Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 4 Quels sont les facteurs qui influencent la survie? Analyse rétrospective des facteurs pronostics de la survie (98 patients ) Quelles sont les modifications moléculaires? Nouvelles cibles thérapeutiques Analyse par puces à ADN Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 5 Première étude Analyse des facteurs pronostiques de survie (98 patients) OBJECTIF : les facteurs environnementaux et professionnels ontils un impact sur la survie ? Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 6 Modèle d’analyse Phase 1 = expositions à des cancérogènes Classiquement l’extension de la tumeur et l’anatomiepathologique sont les facteurs essentiels déterminant la survie. Phase 2 : survie Années Diagnostic cancer Date décès Objectif de l’étude : -voir si la phase 1 a aussi un impact sur la Marqueurs tumoraux de phase l'adk de 2 l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 7 Les 34 variables suivantes ont été analysées : Données cliniques : – date de naissance, – âge au moment du diagnostic, – date du diagnostic, – date de chirurgie, – signes cliniques lors de la première consultation – la durée des symptômes avant la première consultation. Type histologique (classification de Barnes) Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 8 Variables analysées (suite) : Extension de la tumeur suite aux examens complémentaires : orbite, méninges, endocrâne, sphénoïde, sinus maxillaire, lame criblée. Voie d’abord chirurgicale : voie transfaciale, mixte, transfaciale avec résection de la base du crâne. Bilan de la résection Récidive Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 9 Facteurs environnementaux Les expositions ont été estimées : - poussière de bois en nombre d’années - solvants en fréquence.années - métaux en nombre d’années - tabac en paquets.années - consommation d’alcool en nombre de verre/jour - présence de système d’aspiration efficace ou port de masque Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 10 RESULTATS A - Données descriptives âge moyen au moment du diagnostic 54 Nombre de patients 60 50 40 30 20 20 10 1 17 4 2 0 30-39 40-49 50-59 60-69 Marqueurs tumoraux de l'adk de Groupes d’âge l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 70-79 80-89 11 Age du décès en fonction de l’âge du diagnostic ρ = 0,8 ; p < 0,05 Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 12 B - Analyse de la survie 1 - Analyse de la survie globale 2 - Analyses univariées 3 - Analyses multivariées Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 13 1 - Analyse de la survie globale (n = 97) Le taux de survie est de 62 % à 5 ans N=57 Décès 49 décès par K ethmoïde 8 : autre cause dont 4 K Le taux de survie globale est de 73 % à 3 ans Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 14 Classification TNM UICC 1997 T1 Tumeur limitée à l’ethmoïde avec ou sans érosion osseuse T2 Tumeur étendue à la cavité nasale T3 T4 SINUS FRONTAL Tumeur étendue à la partie antérieure de l’orbite ou au sinus maxillaire Tumeur avec extension intracrânienne, envahissant de l’os sphénoïde, ou frontal, la peau du nez SINUS SPHENOÏDE SINUS ETHMOÏDE Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT SINUS MAXILLAIRE 15 TYPE PAPILLAIRE TYPE COLIQUE TYPE MUCINEUX Classification de Barnes : différents types d’adénocarcinome de type intestinal Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT TYPE MIXTE TYPE SOLIDE 16 1- Analyse de la survie globale suivant la classification TNM SURVIE Stades T1-T2 Stades T3-T4 3 ans 95 % 60 % 5 ans 91 % 50% suivant le type histologique SURVIE papillaire mixte colique mucineux solide 3 ans 86 % 79 % 78% 62 % 40% 5 ans 76 % 71 % 47 % 59 % 40% Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 17 2 - Analyses univariées de survie selon modèle de Kaplan-Meier Etude 1 = Analyse de la survie globale conduite sur les 34 variables sans tenir compte de l’ensemble des facteurs professionnels ou personnels Etude 2 = Survie globale et facteurs environnementaux Etude 3 = Survie spécifique et facteurs environnementaux (exclusion des patients décédés d’une autre cause que le cancer de l’ethmoïde) Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 18 Etude 1 : Analyse univariée sur la survie globale variables « cliniques » VARIABLES RR de décès IC (RR) p-value Douleur lors diagnostic Diplopie Exophtalmie Atteinte bilatérale 1.99 [1.05; 3.79] 0.0361 4.17 4.47 3.74 [1.99; 8.75] [2.30; 8.72] [1.96; 7.13] 0.0002 <.0001 <.0001 Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 19 variables « bilan d’extension » VARIABLES RR de décès IC p Extension à l’orbite Extension à la lame criblée Atteinte du sphénoïde Extension cérébrale TNM stade 3 2.35 [1.26; 4.38] 0.0069 2.03 [1.07; 3.82] 0.0294 7.02 [3.81; 13.0] <.0001 12.94 [4.85; 34.5] <.0001 1.36 [0.65 ; 2.82] <.0001 6.26 [3.20 ; 12.21] <.0001 stade 4 (réf .=1,2) Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 20 variables « traitement chirurgical » VARIABLES RR de décès IC p 0.16 [0.09; 0.28] <.0001 2.30 6.59 [1.10 ; 4.81] [3.04 ; 14.27] <.0001 = limite = insuffisante 2.26 8.84 [1.07 ; 4.75] [2.91 ; 26.83] 0.0002 Voie d’ abord transfaciale transfaciale étendue à la base du crâne 0.33 0.41 [0.17 ; 0.67] [0.18 ; 0.91] 0.0060 0.35 [0.17; 0.75] 0.0064 Contrôle local chirurgical Résection micro =limite = incomplète Résection macro Traitement de la récidive Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 21 Etude 2 : Analyse univariée de survie globale ciblant les facteurs environnementaux VARIABLES RR IC (RR) p-value Exposition au bois (années) 1,55 [0,56 ;4,31] 0,4025 Exposition aux métaux (réf. = non exposé) 0,46 [0,14 ;1,47] 0,1894 Solvants (réf.=non exposé) 1,12 [0,65;1,93] 0,6745 Durée métier (en années) 1 [0,98;1,02] 0,9264 Tabac (réf.=non exposé) 1,87 [1,10;3,20] 0,0219 [0,27;2,88] 0,8427 22 Alcool (réf = < 2 verres/j.) Marqueurs tumoraux 0,89de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT Etude 3 : Analyse de survie spécifique axée sur les facteurs environnementaux PAS D’EFFET DÉMONTRÉ DES FACTEURS ENVIRONNEMENTAUX Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 23 3-Analyses multivariées : modèle de Cox Etude 1: Survie globale (n=97) Variables indépendantes coefficient Ecarttype RR IC (RR) Diplopie 1,11 0,46 3,05 [1,23 ; 7,55] 0,0159 Extension orbite -1,17 0,46 0,31 [0,13 ; 0,77] 0,0113 Atteinte bilatérale 0,88 0,35 2,40 [1,20 ; 4,81] 0,0134 TNM UICC 1997 = stade 3 stade 4 0,31 2,29 0,38 0,43 1,37 9,88 [0,65 ; 2,86] [4,26 ; 22,92] Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT p 24 <.0001 Etude 2 Survie globale (n=97) / Facteurs Environnementaux Variables indépendantes coefficient Ecarttype RR IC (RR) pvalue Exposition aux métaux (réf.=non exposé) -1,34 0,62 0,26 [0,08 ;0,88] 0,0307 TNM stades (1,2) (réf. = stades (3,4)) 0,96 0,31 2,62 [1,43 ;4,80] 0,0019 Tabac (réf.=non exposé) 0,83 0,28 2,30 [1,33 ;4,00] 0,0031 Atteinte bilatérale (réf.=uni) 1,41 0,35 4,11 [2,06 ;8,21] <.0001 Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 25 Etude n°3 Survie spécifique (n= 89) / Facteurs environnementaux Variables indépendantes coefficient Ecart-type RR IC (RR) p-value Atteinte bilatérale (réf.=unilatérale) 1,05 0,42 2,85 [1,26 ;6,46] 0,0122 Voie d’abord transfaciale (réf.=mixte) -1,08 0,40 0,34 [0,16 ;0,74] 0,0137 Voie d’abord transfaciale avec résection de la base du crâne (réf.=mixte) -1,00 0,46 0,37 [0,15 ;0,91] Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 26 Discussion Les résultats de l’analyse univariée (n = 98) : - Age au moment du diagnostic : 95% entre 40 et 79 ans - Présence d’un cancer associé : - 18% de nos patients ont présenté un deuxième cancer - 4 % un cancer du colon (prévalence en France : 0,3%) - un cas d’adénocarcinome de l’ethmoïde associé à un cancer du colon et un cancer bronchique chez un patient non tabagique Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 27 Etude cas-témoin* : - 147 patients âgés de moins de 45 ans présentant un cancer colorectal - lien entre cancer rectal et exposition aux poussières organiques : OR = 5,2 ; IC 95 % [1,2-22,1]) - lien entre cancer rectal (n = 41) et exposition aux poussières de bois : OR = 9,4 ; IC 95 % [2,0-44,7]). Peters RK. A case-control study. Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT Cancer Res 1989;49:5459-68 28 - Symptômes : la durée d’évolution n’influence pas le pronostic d’où l’importance d’un dépistage avant l’apparition des symptômes - Données histologiques , bilan d’extension, voie d’abord chirurgicale et survie : résultats conformes aux données de la littérature Survie CHU Nantes Survie globale n = 98 CHU Nantes Survie spé spécifique n = 98 GETTEC Survie globale n = 418 Percodani et al. Survie globale n = 46 3 ans 73% 74% 72% 68% 5 ans 62% Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde65% D TRIPODI C GERAUT 64% 29 - Les résultats de l’analyse multivariée Nos résultats montrent que : - l’exposition aux métaux et non pas le bois joue un rôle : effet antioxydant possible de certains métaux (manganèse, cobalt) en cas de formation de radicaux libres ? Effet différé ? - Impact du tabac = baisse de la survie ALORS QUE L’étude du GETTEC* (multicentrique, rétrospective, 418 cas) - montre que la durée d’exposition aux poussières de bois est un facteur de bon pronostic sur la survie globale mais facteurs environnementaux non analysés * Choussy O. Laryngoscope Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 2008;118:437-43 30 Conclusion Sur les résultats : Nos résultats montrent que l’effet cumulé des expositions aux cancérogènes durant la carrière professionnelle impacte la durée de survie après le traitement d’un cancer. Hypothèse : il existerait une « mémoire » des expositions dans la cellule. Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 31 Conclusion Sur la méthodologie : Intérêt d’introduire les facteurs environnementaux dans les analyses de survie Intérêt de dissocier survie globale et spécifique Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 32 Recommandations Prévention et dépistage des salariés exposés aux poussières de bois • Dépistage ORL à partir de 40 ans • Associer dépistage par hémocult +/colonoscopie Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 33 Deuxième étude Recherche de marqueurs moléculaires spécifiques Analyse transcriptomique : puces à ADN Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 34 I - Objectifs du projet • Identification de marqueurs tumoraux • Corrélation entre marqueurs tumoraux et facteurs environnementaux Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 35 II - Matériel • Inclusion de patients opérés dans la Région Ouest : n = 26 • Double interrogatoire sur le degré d’exposition au tabac, à l’alcool, aux facteurs environnementaux et professionnels Expositions professionnelles – 23 patients exposés aux poussières de bois, 2 au cuir, 1 aucune exposition Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 36 III – Vue d’ensemble du protocole • Prélèvement de tissu pathologique et sain : - congélation immédiate examen - analyse anatomopathologique • Extraction des ARNs totaux des tissus sains et tumoraux • Micro-Arrays (puces à ADN) qui permettent d’identifier les gènes différentiellement exprimés entre deux tissus. • Q-RTPCR: quantification de l’expression des gènes (ARN) tumoraux de l'adkprotéique de • ImmunohistochimieMarqueurs : expression l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 37 Inclusions Puces à ADN Q-PCR IHC 7 patients 19 Patients (2007) (2004-2006) 9 patients validés 10 patients exclus 15 patients testés 4 patients exclus 26 patients analysés Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 38 1 Tissu X Tissu Y Gènes avec des différences d’expression entre X et Y Extraction des données Principe de base des puces à ADN Amplification Marquage avec fluorochromes 39 Cancérochips Mélanomes 6% Angiogénèse tumorale 1% Lymphomes Leucémies Hépatocarcinome 12% Immunotolérance 3% Gliomes 7% Mesothéliomes 2% Hépatocarcomes 9% Radiobiologie 9% K Thyrodiens 1% Leucémies 1% Osteoblastomes 12% Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 40 Analyse des tissus sains et tumoraux de 9 patients 186 gènes avec des différences significatives d’expression entre les tissus sains et les tissus pathologiques 5 gènes sélectionnés CLU cycle cellulaire, apoptose, réparation ADN LGALS4 signalisation cellulaire, transport des glycoprotéines du cytosol vers la membrane cellulaire des entérocytes FACL5 (ACS5) métabolisme lipides, prolifération cellulaire Bax apoptose PDGFRα signalisation cellulaire, angiogenèse CLU : Clusterine ; LGALS4 : Galectine 4 ; FACL5 : Fatty Acid CoA Ligase, long chain 5 PDGFRα PDGFRα : Plateled-Derived Growth Factor Receptor, alpha polypeptide 41 2 • Q-RTPCR: quantification de l’expression des gènes sélectionnés au niveau ARN – Pour valider le différentiel d’expression des gènes sélectionnés à partir des puces à ADN Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 42 6000 5000 4000 3000 2000 1000 LGALS4 p=0.001 A 0 25 20 15 10 5 0 Expression relative TP/TS 10 6 4 18 17 19 14 8 12 5 1 16 9 13 ACS5 p=0.001 B 10 0,3 11 11 19 8 4 6 17 14 13 18 9 Résultats de la Q-RTPCR (n=15) 1 16 5 12 12 8 6 11 CLU p=0.001 C 0,2 0,1 0 17 18 14 10 9 5 13 4 1 16 19 Patients Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 43 Résultats de Q-PCR pour le gène PDGFRA Ré s ultats de Q-PCR pour le gè ne BAX 8 3,5 p-value = 0,001 p-value = 0,001 7 3 6 2,5 5 Ratios Ratio Ratios Ratios 4 3 2 1,5 2 1 1 0,5 0 2 6 5 10 18 11 14 17 Patie nts 4 16 9 13 1 12 0 14 18 5 13 10 9 2 12 11 16 17 4 1 Patients Résultats RT-QPCR : gènes bax et PDGRFA Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 44 6 3 Immunohistochimie • Validation du différentiel d’expression au niveau protéique pour LGALS4, FACL5, CLU Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 45 Tissus sains Tumeurs E LGALS4 FACL5 Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT CLU 46 Résultats de l’immunohistochimie Type de tumeur papillaire Nombre de cas 4 Marquage Clusterine colique 2 mucineux 9 mixte 8 Non ITAC 1 - 1 +++ Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT Marquage Galectine +++ ++ à+++ +++ ++à+++ - 47 ITAC type mixte : - pas de marquage sur composante peu différenciée - marquage diffus sur la composante ITAC de type colique Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 48 Conclusionn Identification de deux gènes différentiellement exprimés dans l’adénocarcinome de l’ ethmoïde : LGALS4, CLU Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 49 Pas de lien statisquement significatif entre nos marqueurs et l’exposition aux facteurs environnementaux néamoins nous avons travaillé sur une petite série Rôle des ces gènes dans l’évolution de l’adénocarcinome de l’ethmoïde ? Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 50 PERSPECTIVES Evaluation de CLU et LGALS4 sur tissu dysplasique TEST DIAGNOSTIC PRECOCE Parmi les gènes sur ou sous exprimés, recherche de marqueurs de bon et mauvais pronostics • immunohistochimie sur les 98 patients inclus dans l’étude de survie corrélation avec les données de survie Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 51 REMERCIEMENTS Pr Meflah, Dr Gratas Rabbia-Ré et S Quéméner : Unité INSERM U 892. Dr Renaudin, Monsieur le Pr Laboisse : Service d’Anatomie Pathologique. Pr Géraut et les médecins du Service de Médecine du Travail et des Risques Professionnels. Pr Beauvillain, Monsieur le docteur Ferron, Pr Malard : Service de Chirurgie ORL. Dr Sébille et Lucie Planche : Unité de Biostastiques UFR Nantes. Dr Simon, Dr Lechevalier, Service de Santé au Travail de la Région Nantaise • Plateforme du Génopole Ouest. • Direction de la Recherche Clinique, CHU NANTES. • Ligue contre le Cancer. Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT 52 CONCLUSION GENERALE ET PERSPECTIVES EXPOSITION MUQUEUSE NASALE POUSSIERES DE BOIS 2,6 méthoxybenzoquinone Formol Tannins INFLAMMATION CHRONIQUE - Espèces réactives de l’oxygène - Réactions de Fenton Lésions de l’ADN Tests des comètes Micronoyaux ADDUITS DE L’ADN Réactions électrophiles-nucléophiles Lésions ADN Locus clusterine =chromosome 8q Marqueurs tumoraux de l'adk de l'ethmoïde D TRIPODI C GERAUT Tests de dépistage 53 Tests des adduits
