sujet 5nov12 CCI MBG

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LSV2 Examen de Cours/TD en CCI
Microbiologie Générale – 05 Novembre 2012 – Durée 1h.
Détaillez vos calculs. Soyez précis et concis. L’usage de la calculatrice est autorisé.
Nom :
N° Étudiant
____________________________________
Prénom : ____________________________________
On se propose d’étudier les voies de biosynthèse de la proline, à partir d’une souche XL1B d’Escherichia coli,
capable de croître sur milieu minimum (MM) additionné de glucose et de NH4+ comme sources de carbone et d’azote,
respectivement.
- Après culture de la souche XL1B d’E. coli en milieu riche LB, les bactéries sont lavées, diluées et étalées sur boite
de pétri contenant du milieu minimum (Glucose, NH4+), additionné de proline. Après repiquage de 2500 clones, il
s’avère que 2498 clones sont capables de croître sur MM additionné ou non de proline (catégorie clone A), et 2 clones
sont uniquement capables de croître sur MM (glucose, NH4+) additionné de proline (catégorie clone B). La croissance
en MM (glucose, NH4+) additionné de proline d’un clone B a été comparée à celle d’un clone de catégorie A en
suivant l’évolution de la DO des cultures à =600 nm. Les résultats sont résumés dans le tableau ci-dessous.
Tableau : Cinétique de croissance des cultures d’E. coli en MM (Glucose, NH4+) + proline
Temps (heure)
DO clone A
DO clone B
0
1
2
3
4
5
6
7
8
0,12
0,11
0,13
0,115
0,21
0,16
0,45
0,34
0,96
0,74
1,2
1,1
1,3
1,2
1,3
1,3
1,3
1,3
Q1/ Tracez les 2 courbes de croissance sur la feuille de papier semi-log (page 3), sachant que 2 cm (2 carreaux sur la
feuille) = 1h de croissance bactérienne.
Q2/ Précisez les différentes phases de la croissance des clones A et B et déterminer graphiquement leurs paramètres
de croissance (temps de génération et taux de croissance). Expliquez votre détermination graphique et détaillez vos
calculs (ne pas donner un résultat final brut sans les calculs intermédiaires)
1
Q3/ Que concluez-vous concernant les clones A et B ?
- A t=3h, 200 l de la culture B sont prélevés, mélangés à 1,8 ml de MM. Le mélange est alors dilué 105 fois par
dilution sérielle et 150 l sont étalés sur MM (glucose, NH4+) + proline. Après 48h d’incubation à 37°C, 60 colonies
sont dénombrées.
Q4/ Calculez le titre de la culture (Présentez l’ensemble des calculs intermédiaires)
- A t=8h, 10 ml de la culture B sont prélevés, centrifugés et le culot est resuspendu dans 1 ml de MM. Le tout est étalé
sur une boite de pétri contenant du MM (Glucose, NH4+). Après 48h d’incubation, 1 clone apparait.
Q5/ Expliquez l’apparition de ce clone, dites à quel phénomène il correspond et calculez la fréquence d’apparition de
ce type de clone.
2
Echelle : 2 carreaux = 1 heure
N°
Ét
ud
ia
nt
—1h
3
Q6/ Du point de vue du microbiologiste, définir les termes suivants :
Mutualisme
Commensalisme
Opportunisme
Q7/ A l’aide d’un tableau, comparez les propriétés des 2 types de toxines bactériennes
Q8/ Le transport passif de nutriments chez les bactéries. Aidez-vous d’un schéma légendé si nécessaire. Donnez
les caractéristiques de ce type de transport.
4
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