Microscopie Multiphotonique In-Situ et Tissus Clarifiés - gdr-Miv

ValérieDROUET
ThomasGUILBERT
EcoleThématiqueMiFoBio2016
Atelier56
Microscopie Multiphotonique
In-Situ et Tissus Clarifiés

I\ Présentationdelamicroscopiemultiphotonique
II\ MicroscopieIn‐Situ–préparation– acquisition
III\ Imageried’organesentiers–Clarification
IV\ MicroscopieIntra‐Vitale

Microscopie Multiphotonique
Confocale Rejet de la lumière
produite hors du
point focal
point focal
• excitation laser
continu visible dans
tout le volume
Limitations :
collection des photons ballistiques
forte limitation pour l’imagerie des milieux
diffusants
dégradations biologiques

Microscopie Multiphotonique
Intérêts :
- excitation dans l’infrarouge, peu absorbé, peu diffusé
- excitation intrinsèquement localisée au foyer
- imagerie en profondeur
- deux contrastes complémentaires distincts,
TPEF et SHG
diffusion non linéaire, cohérent
absorption non linéaire, incohérent
SHG
TPEF
laser

diffusion de seconde harmonique
Génération de Seconde Harmonique (SHG):
processus cohérent de diffusion non
linéaire de photons par une molécule
non centro-symétrique présentant
une organisation non centro-
symétrique
sensible à l’organisation / orientation
des molécules
-Collagène : protéine majoritaire du
corps humain, fonction de maintien
tissus
-Myosine : protéine fibrillaire, complexe
actine-myosine, contraction
musculaire
2 protéines fibrillaires :