fiches techniques - Collège Lionel

101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies (ESP) Hiver 2015
Département de biologie Collège Lionel-Groulx
TABLE DES MATIÈRES
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1. CARACTÉRISTIQUES DES COLONIES SUR GÉLOSE 1
2. PRÉPARATION D’UN FROTTIS à partir d’un bouillon 2
3. PRÉPARATION D’UN FROTTIS à partir d’une gélose 3
4. COLORATION DE GRAM 4
5. LE MICROSCOPE
A) Figure 5
B) Liste des parties 6
C) Utilisation 7
6. ENSEMENCEMENT D’UNE GÉLOSE PAR STRIATION (4 stries) 8
7. MILIEUX DE CULTURE
A) Gélose nutritive 9
B) Gélose au sang 9
C) Gélose MacConkey 10
D) Gélose Mannitol-sel 11
E) Gélose Bacillus 12
F) Tubes TSI 13-14
8. TESTS ENZYMATIQUES
A) Catalase 15
B) Oxydase 15
C) Coagulase 15
9. CULTURE ANAÉROBIE 16
10. ANTIBIOGRAMME 17-18
FICHES TECHNIQUES
de bactériologie

101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies (ESP) Hiver 2015
1
1. CARACTÉRISTIQUES DES COLONIES SUR GÉLOSE
COULEUR
COULEUR

101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies (ESP)
2
2. PRÉPARATION D’UN FROTTIS à partir d’un bouillon
1. Flamber l’anse bactériologique dans la flamme du brûleur.
2. Laisser refroidir quelques secondes (10) près de la flamme.
3. Bien mélanger la culture par rotation (et non par inversion)
4. Flamber l’entrée du tube à chaque ouverture et fermeture.
5. Prélever une bouclée de bouillon.
6. Étaler le prélèvement à la surface de la lame à la grandeur d’un 10¢
Attention : flamber l’anse avant de la redéposer!
7. Laisser sécher (complètement) à l’air
8. Fixer les bactéries sur la lame en passant celle-ci rapidement
dans la flamme, 3 fois. Laisser tiédir quelques secondes après
chaque passage.

101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies (ESP)
3
3. PRÉPARATION D’UN FROTTIS à partir d’une colonie sur gélose
1. Déposer une petite goutte d’eau sur une lame
2. Flamber l’anse bactériologique dans la
flamme du brûleur
3. Laisser refroidir quelques secondes (10), en
restant près de la flamme
4. Prélever un minuscule fragment d’une
colonie (effleurer à peine une colonie
suffira!). Attention, surveiller l’asepsie :
couvercle entrouvert et rester à proximité
de la flamme.
5. Étaler le prélèvement à la surface de la
lame en le dispersant dans la goutte d’eau.
Étaler à la grandeur d’un 10¢
Attention : flamber l’anse avant de la redéposer!
6. Laisser sécher (complètement) à l’air
7. Fixer les bactéries sur la lame en passant
celle-ci rapidement dans la flamme, 3 fois.
Laisser tiédir quelques secondes après
chaque passage.

101-NE2-LG Microbiologie et biotechnologies (ESP)
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4. COLORATION DE GRAM
1. Couvrir le frottis bactérien de
cristal violet (colorant
primaire); attendre 1 minute.
2. Rincer avec un mince filet
d’eau ; faire «tomber» l’eau
un peu au-dessus du frottis et
non directement dessus.
3. Mettre l’eau iodée (lugol) ;
attendre 1 minutes.
4. Rincer avec un mince filet
d’eau.
5. Décolorer en couvrant
d’alcool ; attendre 30 sec.
6. Rincer avec un mince filet
d’eau.
7. Couvrir de safranine
(colorant secondaire) ;
attendre 1 minute.
8. Rincer avec un mince filet
d’eau.
9. Assécher doucement la lame :
égoutter et essuyer le dessous
de la lame à l’aide d’un papier
à lentille.
10. Observer la lame à l’huile à immersion (G : 1000 X)