Etude de Forigine, de la migration et de la multiplication des cellules

/. Embryol. exp. Morph., Vol. 16, 3, pp. 591-607, December 1966 591
With 2 plates
Printed in Great Britain
Etude de Forigine, de la migration et
de la multiplication des cellules germinales
chez Fembryon de lapin
Par FR. CH. CHRETIEN1
Laboratoire d'Embryologie, Faculte des Sciences de Paris {Prof. L. Gallieri)
La decouverte par Waldeyer (1870) des cellules sexuelles ou 'Ureier' dans
l'epithelium germinatif peritoneal d'embryons de poulet de 3 et 4 jours, ouvrit
la voie a toute une serie de travaux sur l'origine et la filiation des cellules germi-
nales chez les Vertebres.
Goette (1875) chez le crapaud, puis Rubaschkin (1908, 1912), Fuss
(1911,
1912), Vanneman (1917) et Politzer (1928, 1930) chez les Mammiferes, ont
estime les premiers que les gonocytes primordiaux doivent etre considered
comme la souche unique de toutes les cellules sexuelles de l'individu, affirme
leur origine extra-embryonnaire et leur pouvoir migratoire.
Les travaux de Vanneman (1917) sur le tatou, et ceux plus recents effectues
par Witschi (1948) sur le foetus humain, par Everett (1943), Chiquoine (1954)
et Mintz (1957, 1960) sur la souris, et par Beaumont & Mandl (1963) sur le rat,
montrent que, chez ces especes, les cellules germinales primordiales sont obser-
vables a des stades plus ou moins precoces du developpement embryonnaire; ces
cellules, situees d'abord dans l'endoderme de la vesicule ombilicale et dans le
mesoderme, au niveau de l'evagination allantoidienne, migrent ensuite le long
de l'intestin par l'intermediaire du mesentere dorsal, pour aboutir enfin dans les
cretes genitales.
Nous avons repris, pour le lapin, l'etude de l'origine et de la migration des
cellules germinales.
TECHNIQUES
Quarante embryons appartenant a l'espece grise commune ont ete etudies.
Les embryons sont preleves a 9 jours, puis tous les deux jours entre le lOeme
et le 28eme jour de la vie foetale; l'age des embryons, exprime en 'jours post-
coitum' est egal au temps ecoule entre la copulation et le sacrifice de la femelle.
Selon l'age et la taille, les embryons ou les gonades isolees sont inclus dans la
paraffine a 56° et debites en coupes seriees de 7,5 /i d'epaisseur.
1 Adresse de
Vauteur: Laboratoire d'Embryologie, Faculte des Sciences de Paris, 9 quai
Saint-Bernard, Paris, France.
37-2

592 FR. CH. CHRETIEN
La methode de Gomori-Takamatsu, utilisee chez l'homme, le rat et la souris
pour differencier electivement les cellules germinales primordiales par la mise
en evidence a leur niveau de phosphatase alcaline,
s'est revelee peu efficace dans
le cas du lapin; ses resultats ont ete trop inconstants pour qu'elle soit retenue.
Finalement, les coupes ont ete colorees par l'hemalun-eosine qui permet une
bonne differentiation des gonocytes primordiaux; ceux-ci ont ete identifies
d'apres les criteres suivants: (1) diametre du noyau au moins egal all/* (nette-
ment superieur a celui des cellules somatiques); (2) faible colorabilite; (3) pre-
sence d'un amas chromatinien au centre du noyau; (4) contour cellulaire
spherique et net (Planche 1, figs. A, B).
Les cellules germinales ont ete denombrees coupe par coupe, pour chacun
des stades etudies, afin d'eliminer l'erreur systematique resultant de la repartition
heterogene des cellules germinales dans le mesentere et dans les gonades. Etant
donnes l'epaisseur des coupes (7,5
JLC) et le diametre minimum (11 fi) des noyaux
des cellules germinales, nous avons determine par le calcul un' coefficient correc-
teur Q\ Ce coefficient, egal a 1,6 dans le cas particulier de cette etude, permet
d'eliminer l'erreur resultant de noyaux comptes deux fois. Le 'nombre vrai' des
noyaux germinaux (Tableau 2) contenus dans un embryon sera egal au nombre
observe divise par 1,6:
,r
f , .N N' (nombre observe)
N (nombre vrai) = - r-^ .
1,6
Seuls les nombres vrais ont ete portes sur les courbes presentees dans ce
travail.
PLANCHE 1
Migration des cellules germinales de 9 a 12 jours post-coitum. L'echelle figure sur les
microphotographies.
Fig. A. Cellule germinale en voie de migration dans le mesentere, accolee contre la splanch-
nopleure; le nucleole est nettement visible (embryon de 10 jours).
Fig. B. Cellule germinale en voie de migration dans le mesoderme du bourrelet allantoiidien,
au-dessous du plan de l'intestin. Trois expansions cytoplasmiques sont visibles, correspon-
dant peut-etrea des pseudopodes (embryon de 10 jours).
Fig. C. Embryon de 9 jours. Coupe transversale en arriere du bourrelet allantoidien.
Fig. D. Detail de la photographie precedente.
Fig. E. Embryon de 10 jours. Coupe transversale passant par l'intestin posterieur et le
pedicule allantoiidien.
Fig. F. Detail de la photographie precedente.
Fig. G. Embryon de 12 jours. Coupe transversale dans la region moyenne de l'ebauche
mesonephretique.
ao, Aorte dorsale; cc, cavite coelomique; eg, crete genitale; cw, canal de Wolff; ec, ecto-
derme; en, endoderme; /, intestin; mi, mesentere intestinal; msn, mesonephros; pa, pedicule
allantoidien; pc, prolongement cytoplasmique;/?/, placenta; vc, veine cardinale; vo, veine
ombilicale.

/. Embryol. exp. Morph., Vol. 16, Part 3
PLANCHE 1
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FR. CH. CHRETIEN

/. Embryol. exp. Morph., Vol. 16, Part 3 PLANCHE 2
FR. CH. CHRETIENfacing p. 593

Vorigine des cellules germinales 593
MIGRATION DES CELLULES GERMINALES
Localisation
Afin de localiser facilement les cellules germinales au cours de la phase migra-
toire, il a ete procede, pour chaque embryon, a deux reconstitutions, l'une en
coupe sagittale, l'autre en vue ventrale. Dans chaque reconstitution en coupe
sagittale n'ont ete representees
a l'interieur de la crete genitale que les cellules
germinales contenues dans
la crete droite de l'embryon. Par contre toutes les
cellules en voie de migration ont ete representees.
Des le 9eme jour, des cellules germinales ont pu etre denombrees dans l'endo-
derme,
au niveau de l'intestin posterieur et en arriere de celui-cii et d'autres
dans le mesoderme du bourrelet allantoiidien (Planche, 1 figs. C, D).
Le lOeme jour,
les cellules germinales apparaissent massees dans le meso-
derme du bourrelet allantoiidien, tout autour du pedicule allantoidien. Certaines,
localisees dans
le mesoderme qui tapisse les parois de l'intestin, ont deja com-
mence
a migrer vers les cretes genitales (Planche 1, figs. E, F).
Le 12eme jour, deux tiers des cellules germinales sont encore distribues
en
dehors des cretes genitales, apparaissant soit autour de l'intestin dans sa partie
posterieure, soit dans le mesentere dorsal qui relie l'intestin a
la cavite abdomi-
nale (Planche 1,
fig. G; Planche 2, fig. H). Chez les embryons etudies a ce stade,
les gonocytes, repartis dans le mesentere dorsal, forment une colonne verticale,
perpendiculaire
a l'axe du corps et localisee au niveau du tiers inferieur des
cretes genitales.
Le reste des cellules germinales est deja loge dans les cretes
genitales ou bien se trouve dans leur voisinage immediat. Les cellules germinales
n'ont cependant pas entierement colonise le tiers anterieur des cretes genitales.
Le 14eme jour, les proportions sont inversees par rapport au stade precedent.
Deux tiers des cellules germinales sont repartis dans les cretes genitales. Celles-ci
sont maintenant colonisees sur presque toute leur longueur. Les cellules formant
le dernier tiers se trouvent presque toutes
a proximite des gonades primitives, la
PLANCHE 2
Migration des cellules germinales de 12 a 16 jours post-coi'tum. L'echelle figure sur les
microphotographies.
Fig. H. Embryon de 12 jours. Detail de la figure G, Planche 1.
Fig. I. Embryon de 14 jours. Detail au niveau de la crete genitale et du mesentere intestinal.
Fig. J. Detail au niveau de la crete genitale gauche.
Fig. K. Embryon de 16 jours. Coupe transversale passant par la region moyenne du meso-
nephros.
Fig. L. Detail correspondant, chez un autre embryon de meme age, a l'encadrement de la
photographie precedente.
Fig. M. Detail: gonade male.
cc, Cavite coelomique; eg, crete genitale; gn, gonade; mi, mesentere intestinal; msn,
mesonephros; mtn, metanephros; vc, veine cardinale; vcp, veine cave posterieure.