Considérations diagnostiques relatives aux infections par le virus de

1
Considérations diagnostiques relatives aux infections
par le virus de l’encéphalite équine de l’Est (VEEE)
Michael Drebot, Ph. D., Zoonoses virales, LNM, ASPC
Webinaire sur le VEEE, 16 mars 2012
+
10k
1k
100
10
1
1000
100
1
0.1
10
1
0.1
400 bp
Rn
Rn
10,000
10k
1k
100
10
1
0.1
0.1
Cycle
Ct
2
Les virus de l’EEE sont des alphavirus (qui appartiennent à
la famille des Togaviridae). Les particules virales sont
enveloppées, mesurent 70 nm de diamètre et possèdent une
nucléocapside isométrique de 40 nm. Leur génome est
constitué d’un seul brin d’ARN à polarité positive d’environ
12 kb de longueur.
CAP
Protéines non structurales
Protéines structurales
An
Le génome comprend deux cadres de lecture ouverts codant des protéines non structurales et
structurales. Le premier code les protéines non structurales (nsP1 à nsP4) nécessaires pour la
transcription et la réplication de l’ARN viral. Le deuxième code cinq protéines structurales : la
protéine C du noyau de la nucléocapside, les protéines d’enveloppe E2 et E1 qui forment un
hétérodimère, la protéine 6K qui est importante pour l’assemblage et la protéine E3 (non présente
dans les particules matures).
3
www.cdc.gov/EasternEquineEncephalitis/tech/transmission.
Schmitt et al., 2007
4
Les génotypes
canadiens sont
similaires aux
souches Lin1 des
É.-U. (Lindsay
et al.). Cependant,
aucun cas humain
(non associé à des
déplacements) n’a
été signalé au
Canada.
On distingue plusieurs
génogroupes et lignages pour
le VEEE (Weaver et al., 2010).
La majorité des tests par PCR
publiés ne font état que du
lignage 1 et d’une sérologie
probablement générique pour
la plupart des infections.
5
Virémie et réponse anticorps du VEEE
Virémie faible et de courte durée chez
les primates humains et non humains.
Le virus est rarement isolé par culture
de sang ou de LCR, mais il peut être
isolé à partir d’échantillons de tissu
cérébral prélevés après le décès.
Exposition
Date d’apparition des symptômes
(fébriles – neurologiques)
IgM
0
0
-3
-6
Période d’incubation
(~3 à 10 jours)
IgG
5
10
Anticorps IgM
présents peu
après l’apparition
des symptômes
15
Jours
Calisher CH. Clin Microbiol Rev 1994; 7: 89-116
6
Définitions de cas et algorithmes diagnostiques de l’EEE (critères des CDC : la
documentation d’un cas nécessite au moins un critère clinique et un critère de
laboratoire)
(www.cdc.gov/EasternEquineEncephalitis, Reddy et al., J Clin Virol 2008; 42: 418-421)
CRITÈRES CLINIQUES
Maladie neuro-invasive
-- Fièvre et soit altération aiguë de l’état mental ou autres signes d’affection
neurologique (paralysie, déficits sensoriels, etc.) ou pléocytose avec méningite (mal de
tête ou raideur de la nuque) (voir aussi Deresiewicz et al., 1997, NEJM 336: 1867)
Maladie non neuro-invasive
-- Fièvre et absence de signes d’affection neurologique
CRITÈRES DE LABORATOIRE
Les critères pour un cas « Confirmé » ou un cas « Probable » sont définis grâce à
divers procédés sérologiques, moléculaires, de détection des antigènes et d’isolement
(voir la diapositive 7 ci-après).
7
CRITÈRES DE LABORATOIRE (suite)
Critères – Cas confirmé :
1.
Augmentation par un facteur d’au moins quatre du titre d’anticorps sériques
anti-VEEE ou
2.
Isolement du virus ou preuves de la présence d’antigènes/d’ARN dans les
échantillons cliniques (p. ex. LCR, tissu cérébral, sang/sérum) ou
3.
Présence d’IgM anti-VEEE dans le LCR ou
4.
Présence d’IgM anti-VEEE dans le sérum et présence d’IgC ou d’anticorps
neutralisant le virus dans le même échantillon ou dans un échantillon prélevé
ultérieurement.
Critères – Cas probable :
- Titre d’anticorps sériques anti-VEEE stable/statique, mais élevé
- Présence d’IgM et absence d’IgG sériques anti-VEEE aux résultats des tests
sérologiques de neutralisation
Format des tests diagnostiques/épreuves/plateformes utilisés pour confirmer un cas
d’infection par le VEEE selon les critères 1 à 4 (voir la diapositive 7)
1.
88
Les tests de neutralisation (p. ex. réduction des plages) sont la « référence ».
Le test d’inhibition de l’hémagglutination, la séroconversion ELISA pour la détection des
IgG et les tests d’immunofluorescence indirecte peuvent être envisagés selon la spécificité
(Calisher C, Clin Microbiol Rev 1994; 7: 89-116)
2.
Isolement du VEEE dans des cellules Vero (l’inoculation de cerveaux de souriceaux
non sevrés a également été utilisée)
Immunohistochimie (IHC) à partir de tissu du cerveau (cheval et cerf, humain?)
(Pennick et al., J Vet Diag Invest 2012; 24: 333; Schmitt et al. J Wildlife Dis 2007;43:635)
Détection de l’ARN du VEEE par RT-PCR, NASBA, etc. (protéines NSP3, E1, etc., gènes
cibles) (Lambert et al., J Clin Micro 2003 41:379; Hull et al., Diagn Microbiol Infect Disease, 2008
62:272; Kang et al., Virol J, 2010; 7:284)
3.
CDC - Capture des IgM par ELISA (Martin et al., J Clin Microbiol 2000; 38: 1823-)
(la détection des IgM par immunofluorescence indirecte peut être prise en compte, recherche
du VEEE par immunofluorescence indirecte - trousse de FOCUS Diagnostics)
Futures plates-formes d’IAM Luminex - CDC
4.
CDC – Test ELISA pour la détection des IgM et tests de neutralisation (Martin et al., 2000,
Calisher 1994)
DES QUESTIONS?
EEE
99