Extraction et visualisation de l*ADN de kiwi

Extraction et visualisation de
l’ADN de kiwi
• Cette manipulation est un exemple de
technique d’extraction de molécules
intracellulaires.
• Elle permet d’observer les molécules d’ADN
contenues dans les cellules : il est possible
alors d’observer la structure filamenteuse de
cette molécule.
Principe de la manipulation
• L’extraction de l’ADN est réalisée sur un végétal. Dans
le cas présent, le kiwi dont les cellules sont riches en
ADN.
La technique d’extraction consiste en trois étapes :
1. Destruction mécanique des cellules (éclatement du
tissu végétal et des cellules)
2. Destruction chimique des membranes biologiques
3. Précipitation de l’ADN extrait (apparition sous forme
non soluble).
Matériel (par équipe de 2)
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1 morceau de kiwi
1 mortier et pilon
1 cylindre gradué de 25ml
1 agitateur en plastique blanc
1 bécher de 150 ml
1 erlenmeyer de 125ml
1 entonnoir
1 papier filtre
1 bouteille de solution de NaCl
1 petite bouteille de détergent
1 support à éprouvette
1 éprouvette 25 X 150
Matériel à l’avant de la classe
– solution d’éthanol à 90% maintenue dans la glace
(Cette solution permettra de visualiser la présence
d’ADN)
– brosses et savon pour nettoyage
– nettoyant pour les tables + chiffons (pour éviter
les allergies)
Protocole des manipulations
1. À l’aide de l’agitateur de
plastique, retirer la chair
du kiwi et la placer dans
le mortier.
2. Couper la chair en petits morceaux puis la broyer
avec le pilon. La chair doit devenir une purée
relativement lisse et sans morceau.
3. Transférer la purée de kiwi dans le bécher.
4. Y ajouter 20ml de solution de NaCl à 60g/L et 7
gouttes de savon à vaisselle.
5. Mélanger DÉLICATEMENT à l’aide de l’agitateur
environ 20 secondes.
6. Filtrer le contenu du bécher sur le papier filtre
et récupérer le filtrat dans l’erlenmeyer. NE
PAS BRASSER LE CONTENU DANS
L’ENTONNOIR
Lorsque vous aurez récupéré pour environ
l’équivalent d’un doigt d’épais de filtrat dans
l’éprouvette vous pouvez poursuivre.
7. Une fois le filtrat nécessaire transférer dans
l’éprouvette, verser TRÈS LENTEMENT et le
long de la paroi 15ml de la solution froide
d’éthanol à 90%
8. Laisser l’éprouvette reposer dans le support sans
trop la bouger ni la brasser.
9. Après quelques minutes l’ADN apparaît sous forme
d’une boule de gelée. Au bout de plusieurs minutes,
les plus chanceux pourraient apercevoir des
filaments blanchâtres.