MORT CELLULAIRE NECROSE APOPTOSE AUTOPHAGY NECROSE La nécrose est une mort anormale de la cellule (cf. apoptose) Causes possibles : Perte de l’homéostasie cellulaire Réduction de l’afflux sanguin Trop peu d’oxygène dans le sang Toxines, trauma, radiation, T°, etc.. Conséquences : Les cellules gonflent, éclatent et relarguent leurs contenus dans les espaces interstitiels Importante réaction inflammatoire Fonctions cellulaires altérées Dérégulation de la perméabilité membranaire et donc influence les mécanismes de transport Réduction du métabolisme cellulaire Plus de synthèse protéique Dommage au lysosomes : fuite d’enzyme dans le cytoplasme Destruction des organelles cellulaires MECANISMES MOLECULAIRES L’absence d’oxygène entraine : Déplétion d’ATP Synthèse et dégradation des phospholipides Fuite de calcium de la mitochondrie Reperfusion Création d’oxygène radicalaire O2- , OH-, H2O2 Molécules très réactive qui attaquent tous les constituants cellulaires Les capacités de détoxication de ces molécules sont très limités au niveau cellulaire Atteinte cellulaire liée aux ROS Anion Superoxyde formés par les P450 et détoxication par les superoxyde dismutase Hydrogène peroxyde détoxication par : catalase et glutathion peroxydase Radical hydroxyl .OH initie une peroxydation lipidique et les atteintes à l’ADN Comment les radiations tuent les cellules Radiolyse de l’eau H20 donne .H et .OH Dommage aux membranes Dommage à l’ADN Les cellules non proliférative sont aussi tuées mais les doses doivent être plus importante 1ère Mise en évidence de l’apoptose Date du milieu du XIXème siècle puis remis au jour dans les années 30 pour vraiment être caractérisé en 1972 Apoptose histoire 1842 : Carl Vogt remarque la disparition de noyaux dans certains tissus 1951 décrit la mort de certaines cellules dans les tissus embryonnaire 1964 Première utilisation du terme mort programmée 1972 Kerr Wyllie et Currie utilise le terme d’apoptose APOPTOSE Caractéristiques d’une cellule en apoptose Condensation cellulaire Condensation de la chromatine Fragmentation de l’ADN « blebbing »de la membrane Exposition sur la membrane externe des phosphatidylserine Sécrétion de cytokines qui inhibe l’inflammation Ces caractéristiques sont régulés par des signaux AUTOPHAGIE Sorte de « self »cannibalisme Manque de nutriment Digestion d’organelle intracellulaire Réarrangement de la membrane séquestration des composants dans des autophagosomes puis fusion avec lysozomes (dégradation enzymatique) APOPTOSE versus NECROSE FRAGMENTATION DE L’ADN BLEBBING DES CELLULES Pourquoi l’apoptose Nombre de cellules dans l’organisme : 1014 Sans apoptose 12 miles de longueur Durée de vie d ’une cellule (70 109 meurent) très variable selon l ’origine vie post-embryonnaire 200 types de cellules possédant toutes une durée de vie différente Cell. Intestinales 1 semaines Erythrocyte 120 jours Cell. Hépatiques 1 ½ an Cell. Osseuses 25-30 ans Neurones, Cell. Cardiaques, rétine, ne sont jamais remplacées Peau renouvelée tout les 23 jours Différenciation cellulaire implique que toute cellule soit au bon endroit au bon moment Toutes cellules en trop doit disparaître Période et vie cellulaire cellule en G0 importance du réveil Importance de l’apoptose Homéostasie cellulaire, développement embryonnaire, synapse système immunitaire … Trop d’apoptose : maladie dégénératives Trop peu d’apoptose Cancer, maladies autoimmunes Fonctions of apoptosis Sculpture du corps, formation des doigts Élimination d’organe non nécéssaire Elimination selon le sexe canal de Müller éliminé chez les mâles, canal de Wolf éliminé chez les femelles Neurones produits en excès Système immunitaire : élimination des cellules lésées Caenorhabditis elegans 1090 cellules somatiques 131 meurent par apoptose 116 de ces 131 appartiennent au système nerveux et à l’ectoderme 959 se développent en tissus MECANISMES GENERAUX Très conservés des espèces les plus élémentaires aux mammifères Premières études chez Caenorhabditis elegans 2 gènes ced-3 ced-4 «killer gene» 1 gènes ced-9 «survival gene» Conservation des gènes Voie Apoptotique Différence entre les voies récepteur et mitochondriale Mitochondriale Médié par le stress Synthèse de protéines 12-24 heures Récepteur Pas de synthèse de prot Très rapide qqs heures Les grandes familles de proteines impliquées dans l’apoptose : bcl-2 Homologue de ced-9 famille conservée, séquence homologue BH domains (dimèrization pour activation) Famille contenant des gènes pro et antiapoptotiques Homo et hétérodimère (balance entre mort et survie cellulaire) Découverte de Bcl-2 En 1986 3 groupes indépendants clone ce que l’on appellera Bcl-2 oncogène En 1988 bcl-2 conduit a certain cancer en empêchant la mort cellulaire Les grandes familles de protéines impliquées dans l’apoptose : Bcl-2 (CED-9) Bcl-2 homology domains BH1, BH2, BH3, Dimérisation BH3, BH1, BH2 Liaison Apaf-1 BH4 Association de proteines Activation des caspases Les Caspase (CED-3) Cystéine protéase (17 membres) sont synthétisée à l’état de précurseur (QACXG) Comment les caspases tuent la cellule Destruction de protéines indispensable a la vie de la cellule Régulation des caspases : activation en cascade, IAP inhibiteur de caspase Voie de mort : la voie mitochondriale et la voie des recepteurs TNFa Fas L TNFR1 Fas/CD95 Death domains Cell stress: oxidants Mitochondrion Cyt c MPT Bax/BcL2 Caspase-8 Bid / tBid Apaf-1 Cyt c Apoptosome Procaspase-9 Caspase effectrice (e.g. caspase-3) Caspase-9 APOPTOSIS La voie de mort récepteur dépendant Les récepteurs de mort :ils sont placés dans les membranes et détecte les signaux extracellulaire et initie rapidement la machinerie apoptotique Ils appartiennent à la famille des récepteurs au TNF car il contiennent un domaine extracellulaire riche en cystéine et dans le cytoplasme des séquences conservés appelés « Death Domain » Leurs ligands sont eux aussi très conservés Le récepteur Fas Récepteur TNRF1 : active des facteurs de transcription (gènes inflammation, immunologie) induit l’apoptose si synthèse protéique bloqué Ligand -TNF Receptor TNFR1 TNFR associated death domain, TRADD Death domain, DD Fas-associated death domain, FADD Receptor interacting protein, RIP JNKK TNFR-associated IKK factor 2, TRAF2 JNK NFkB c-Jun Caspase 8 Effector caspases Apoptosis Mitochondrie et apoptose La mitochondrie est impliqué dans l’exécution et joue un rôle pivot 3 mécanismes Dérégulation de la synthèse d’ATP Altération du statut REDOX Fuite de facteurs apoptogène qui vont activer des caspases Famille bcl-2 Protéines activatrices des caspases Cyt c va former l’apoptosome Procaspase 3«dans certains tissus comme Apoptosis inducing factor AIF Activation des caspases par la mitochondrie Cell death triggers Oxidants, calcium Bax, ceramide Matrix swelling, outer membrane ruptures ATP, Dy ROS Necrosis Channels open, outer membrane intact Inactive Apaf-1 Active Apaf-1 Cytochrome c Caspase 9 Cytochrome c & other caspase Caspases activated activators Apoptosis Formation de l’apoptosome Substrat des caspases Protéines structurales •Actine •gelsoline •keratine •Lamine •Fodrine Protéines du métabolisme ADN/ARN •Poly ADP ribose polymérase Protéines inhibitrices de l’apoptose •ICAD: Inhibiteur de la CAD •Bcl-2 et Bcl-xL Inhibitors of Apoptosis Proteins (IAPs) Identifié à partir de baculovirus Consiste en diverses protéines : NAIP, MIAP XIAP, cIAP1, cIAP2, and survivine Suppression de l’apoptose en empêchant l’activation des caspases et leur activités (caspase3, -7, and -9) liaison spécifique Expression of cIAP1/2 is stimulated by NF-κBmediated survival signals. Negative regulators of IAPs: Smac/DIABLO, XAF1, and OMI/HTRA2 Surveillance du cycle cellulaire Atteinte de l’ADN La proteine P53 Dans les cellules normales (non stressé) la p53 est rapidement dégradé après association avec son régulateur MDM2. p53 forme un complexe avec une proteine E3 (ubiquitin ligase) et ainsi p53 est guidé vers le proteasome. Dans les cellules normales p53 est un régulateur positif de la prolifération cellulaire Dans les cellules « stressées » p53 arrête la division par un phénomène apoptotique mitochondrial dépendant (Bax oligomérisation). Dans les cellules cancéreuses p53 est un facteur de transcription (Puma, Noxa, p53AIP1,Bax, Apa-1) MDM2 : Mouse Double Minute 2 Le gène mdm2 encode pour une protéine (zinc finger) qui inhibe p53 pendant la phase de croissance dans une cellule normale Au niveau du noyau « bind » p53 N-Terminal et masque son domaine de transactivation Au niveau du cytoplasme MDM2 est responsable de l’ubiquitylisation et donc de la dégradation de p53, MDM2 est une cible de p53 MDM2 est une ubiquitin ligase (p53 dégradation) Comment p53 est elle activé et stabilisé lors d’une atteinte à l’ADN Phosphorylation Inhibition du transport hors du noyau Role of p53 in cell cycle control:“guardian of the genome” h active p53 latent p53 activation accumulation stress factors or oncogenic proteins cell type level of p53 extent of DNA damage genetic background mdm2 negative feedback loop !! cell cycle arrest: repair defective genes apoptosis: kill harmful deregulated cells Si p53 est nécessaire pour supprimer des cellules altérées, que peut on attendre alors si p53 est muté ? Pas de blocage de la division cellulaire Cancer Apoptose et immunité •DED: death effector domain •CARD: caspase recruitment domain •CAD: caspase-activated deoxyribonuclease (CAD) •ICAD: CAD inhibitor •FADD: Fas-associated death domain •FLICE: Fas-like interleukin-1β converting enzyme •DISC: death inducing signaling complex •AIF: apoptosis inducing factor •Apaf-1: Apoptotic protease-activating factor-1 •Apoptosome: Cyt. C Apaf-1, dATP/ATP and pro-caspase 9 •Smac: second mitochondria-derived activator of caspase. •DIABLO: direct IAP binding protein with low pI Bcl-2 proteins : B cell leukemia/lymphoma 2 Caspases : cysteine-dependent asparate-specific proteases; IAPs: Inhibitor of apoptosis