Cinétique enzymatique Inhibiteurs irréversibles et réversibles Inhibition irréversible: • Certains a.a. du site actif sont rendus particulièrement réactifs par leur environnement: réactifs spécifiques (par exemple, le DIFP bloquant les Ser « activées ») • La concentration en enzyme « fonctionnel » chute: Vmax diminue. Remarques: 1. Il est difficile de distinguer ces inhibiteurs de certains inhibiteurs réversibles ! 2. Ces inhibiteurs sont souvent (mais pas toujours) toxiques. Insecticides organophosphorés L’aspirine est un inhibiteur irréversible de la Cyclooxygénase (Prostaglandine H1 synthase) Inhibiteurs réversibles: • Souvent, mais pas toujours, analogues des substrats ou des produits. • Très utilisés en pharmacologie: – antibiotiques, – inhibiteurs de phosphodiestérases pour le traitement de l’asthme (cAMP) et de l’impuissance (cGMP), – antirétroviraux, – antihypertensifs, – anticancéreux, – etc… Antibiotiques: les pénicillines Anticancéreux Antiprotéase pour le traitement du SIDA Inhibiteur acetylcholinesterase (traitement maladie d’Alzheimer) Asp His Ser Inositol phosphatase – Li+ Inhibition de l’inositol monophosphatase: 1 des effets thérapeutiques du Li+, le traitement le plus efficace connu contre la maniaco-dépression? Fonctionnement des inhibiteurs? E +S + I ES kcat E +P KESI KEI EI + S ESI Vmax k cat E tot Vmax Etot k cat ES v k cat ES Vmax Etot [ES ] æ1 [E ] ö [E S ] [ES ] [E ] ÷ çç ÷ v = V max = V max = V max ÷ ÷ [ES ] [EI ] [ESI ] [E tot ] [E ] + [ES ] + [E I ] + [ESI ] çè1 [E ] ø 1+ + + [E ] [E ] [E ] Posons K EI = et K ESI KM = [E ][I ] [EI ] [E ][S ] [ES ] donc [ES ][I ] = donc [ESI ] donc [ES ] [S ] = [E ] K M [EI ] [I ] = [E ] K EI [ESI ] 1 [ES ][I ] [S ] [I ] = ´ = K M K ESI [E ] [E ] K ESI comme [ES ] v=V {[E ]+ [EI ]+ [E S ]+ [ESI ]} max [E ][S ] K v=V ´ I S S I [E ] 1 + [ ]K + [ ]K + [ ]K [ ]K M { max EI M [S ] V K K v= ´ ìïï [I ]üïï [S ]ìïï [I ] üïï K í1+ ý+ í1+ ý ïîï ï ï K þ K ïþ ï K îï ï M max M EI M M M E SI V [S ] V [S ] v= = ìïï ìïï K + [S ] [I ]üïï [I ] üïï K í1+ ý + [S ]í 1 + ý ïïî ï ï K ïþ K ïïþ ïî app max max app M M EI ESI ES I } Nous avions écrit et obtenu ES ES v Vmax Vmax Etot E EI ES ESI Vmax S v K M 1 I K EI S 1 I K ESI v app Vmax Vmax 1 I K ESI Vmax S 1 I K ESI 1 I K EI KM S 1 I K ESI 1 I K EI app ; K M KM 1 I K ESI app K Sapp Vmax K Mapp K S / 1 I K EI En résumé: • Si complexe « EI »: – E ↓ : v association (KS apparente) ↓ – ES ( E+P) cst : Vmax cst – Donc: KM apparente (Vmax/KS) ↑. • Si complexe « ESI » : – E cst, donc KS apparente = KS. – ES ↓ donc Vmax apparente < Vmax – Donc : KM apparente =Vmax/KS diminue Inhibition mixte • Formation de EI, donc – KS diminue, pente augmente • Complexe ESI, donc – Vmax diminue, – KM augmente ou diminue Cas limite: Inhibition non - compétitive Inhibition non compétitive: Vmax diminue, KM inchangé L’inhibition ne peut PAS être levée en augmentant la [S]! Inhibition non - compétitive: • Formation de EI, donc KS diminue, et pente augmente • Complexe ESI, donc Vmax diminue, • Affinité EI = affinité ESI, donc KS et Vmax diminuent du même facteur, et KM constant Cas limite: inhibition « compétitive » Inhibition compétitive Inhibition compétitive: Vmax inchangé, KM augmente L’inhibition peut être levée en augmentant la [S]! Inhibition compétitive • Pas de ESI, donc Vmax inchangée, • Complexe EI, donc KS (vass) diminue et pente augmente • KS=Vmax/KM diminue, donc KM augmente Cas limite: inhibition « incompétitive » Inhibition incompétitive • Pas de EI, donc KS inchangée, droites parallèles • Complexe ESI, donc Vmax diminue, • KS inchangée et Vmax diminue, donc KM diminue Corrélation complexes / effet : Type EI? Mixte Oui KS (~kass) ESI? Vmax Donc, KM (kcatESmax) (Vmax/ KS) diminue Oui, ESI≠ EI diminue (≠ KS) augmente ou diminue diminue (cf KS) constant Noncompétitif, ou irréversible Oui diminue Oui, ESI = EI Compétitif Oui diminue Non constante augmente Incompétitif Non constant Oui, ESI=EI diminue diminue Une autre façon de voir les choses: • Plutôt que de calculer la vitesse en fonction de la [S], on devrait calculer la [S] nécessaire pour maintenir une vitesse de production donnée: SURVIE [Substrat] nécessaire Vitesse de production Effet d’inhibiteurs: • Inhibiteurs compétitifs: il « suffit » d’augmenter [S] pour atteindre la vitesse nécessaire à la survie. Médicalement: peu efficaces! SURVIE [S] En l' absence d' inhibiteur , KM [S ] Vmax 1 v Inhibiteur compétitif : K M augmenté [I ] K M 1 K i [S ] Vmax 1 v Vitesse nécessaire Effet d’inhibiteurs: • Inhibiteurs non compétitifs, mixte ou incompétitifs: si leur concentration est élevée, il n’est plus possible d’atteindre la vitesse désirée SURVIE En l'absence d'inhibiteur, K [S ]= æ M ö ÷ çV max - 1÷ çç ÷ è v ø [S] Inhibiteur non compétitif: V max diminuée æ [I ]ö÷ ÷ K M ççç1 + ÷ çè K i ø÷ KM = [S ]= æ ö æV I ]ö÷ [ ÷ V max çç ç max ÷ - 1çç - 1÷ ÷ ÷ çç ÷ Ki ÷ ø çèv (1 + [I ] K i ) ø÷ çè v Vitesse nécessaire