La chromatographie d`exclusion

Classe Bio 2
 Briday Justine
 Joly Sandrine
 Lazzarin Nathalie
La chromatographie d'exclusion
Principe
 La chromatographie d'exclusion permet la séparation
des molécules à travers un gel poreux en fonction du
poids moléculaire de la protéine.
 En fonction: -de la taille

-de la forme

-poids moléculaire
Il existe 2 types de phases
 La phase
stationnaire: elle est
constituée de billes
de polysaccharide
 La phase mobile:elle
est constituée d'un
éluant (eau,tampon
pH),il sert à
entraîner les
molécules du
mélange.
Passage à travers la colonne
 Les grosses molécules sont
éluées en premier car leur
volume est supérieur à celui
du volume des billes.
 Les petites molécules sont
exclus en dernier de part
leur petit volume,elles
subissent des
frottements,leur migration
est freinée.
Durée de rétention dans la colonne
 La durée de séjour dans la colonne augmente
lorsque le poids moléculaire de la molécule
diminue
Choix du type de gel
 Le choix du type de gel est effectué selon le
domaine de fractionnement.
Qu'est ce que le domaine de
fractionnement?
 C'est la gamme des masses molaires possibles
pour lesquelles il y a :
-diffusion partielle
-diffusion totale
-englobement
de la masse molaire de la molécule
Les différents volumes
 Ainsi on note plusieurs volumes lors de la
chromatographie:
-le volume d'élution de la molécule
-le volume d'exclusion du gel (volume
d'élution d'une molécule non retardée par le
gel)
-le volume total du gel qui correspond
au volume des billes.
Conclusion
 La chromatographie d'exclusion va permettre la
séparation de différentes molécules selon leur
taille.