Streptocoques

Streptocoques
GELOSE COLUMBIA AU SANG FRAIS + A.N.C
Milieu d’isolement sélectif enrichi, adapté aux exigences des Streptocoques.
COMPOSITION : (pour 1L)
Peptone
Hydrolysat de protéines
Amidon de maïs
Chlorure de sodium
Sang frais de mouton
Acide nalidixique et colimycine (A.N.C)
Agar
LECTURE :
Observation
Interprétation
Conclusion
Colonie entourée d’un
halo d’éclaircissement
total à bord net
La bactérie à dégradée,
entièrement, de
l’hémoglobine
Hémolyse β
Colonie entourée d’un
halo d’éclaircissement
partiel verdâtre à bord
flou
La bactérie à dégradée,
partiellement, de
l’hémoglobine
Hémolyse α
Couleur rouge inchangé
autour des colonies
La bactérie n’a pas
dégradée de
l’hémoglobine
Hémolyse γ
INTERET :
Le mélange A.N.C inhibe la plupart des bactéries Gram – et certains Gram +
(Bacillus).
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GELOSE BILE ESCULINE AZIDE (BEA)
Milieu d’isolement sélectif des Streptococcus D et Entérococcus.
COMPOSITION : (pour 1L)
Peptone
Extrait de levure
Bile de bœuf
Chlorure de sodium
Citrate de sodium
Esculine
Citrate de fer
Azide de sodium
Agar
LECTURE :

Présence ou absence de culture (colonies)
 Présence : présomption des bactéries du genre Streptococcus
appartenant au groupe D et les bactéries du genre Entérococcus
(uniquement présomption car les milieux ne sont pas sélectifs à
100%).

Absence : les bactéries étudiées ne sont pas des bactéries du genre
Streptococcus appartenant au groupe D et les bactéries du genre
Entérococcus.
 Couleur des colonies
Observation
Colonies entourées d’un
halo noir
Absence de halo noir
Interprétation
Hydrolyse de l’esculine
par les bactéries.
Les bactéries ne sont pas
capables d’hydrolyser
l’esculine
Conclusion
Esculinase +
Esculinase -
Streptocoques
TEST DE LYSE PAR LA BILE : IDENTIFICATION DES
PNEUMOCOQUES
Streptococcus pneumoniae (pneumocoque) est le seul Streptocoque à être lysé
par la bile ou les sels biliaires (test de Neufeld).

Réalisation du test

En milieu solide :
Déposer sur les colonies à tester, obtenues sur gélose au sang + sels biliaires à
10%. Placer la boîte à 37°C pendant 30min. S’il s’agit d’un Pneumocoque, les
colonies disparaissent. Seul le halo d’hémolyse reste visible.

En milieu liquide :
Faire une suspension forte du germe à tester en bouillon Todd Hewitt. La
partager dans 2 tubes à hémolyse.
Dans un des tubes, ajouter 2 à 3 gouttes de sels biliaires.
L’autre tube sert de témoin.
Mettre les tubes à 37°C pendant 30min.
S’il s’agit du Pneumocoque, on note un éclaircissement de la suspension
additionnée de sels biliaires, l’autre tube reste trouble.
Coques gram +, ovalaires, groupés par
2, catalase –, α hémolytiques, sensibles
à l’optochine, lysés par la bile
Forte suspicion de
STREPTOCOCCUS
PNEUMONIAE
Streptocoques
RECHERCHE DE LA SENSIBILITE A LA BACITRACINE ET A
L’OPTOCHINE
TECHNIQUE :
Etaler un inoculum abondant de la souche à étudier, en effectuant des stries
serrées.
Puis déposer sur les premières stries, un disque imprégné d’antibiotique.
Incuber à 37°C.
Après 24h, observer la présence ou l’absence de culture autour du disque.
LECTURE ET INTERPRETATION :
Culture
Zone d’inhibition
Diamètre critique
Disque imprégné
d’ATB
Diamètre d’inhibition ≥ 12mm
La souche est sensible à l’ATB testé
Culture
Zone d’inhibition
Diamètre critique
Disque imprégné
d’ATB
Diamètre d’inhibition < 12mm
La souche est résistance à l’ATB testé
CONCLUSION :
Sensibilité à la Bacitracine :
Si la souche étudiée est un coque gram +, catalase -, β-hémolytique, sensible à
la Bacitracine, alors c’est un Streptocoque du groupe A. On s’oriente vers
l’espèce Streptococcus pyogenes.
Sensibilité à l’Optochine :
Si la souche étudiée est un coque gram + capsulé, catalase -, α-hémolytique,
sensible à l’Optochine, alors on suspecte fortement l’espèce Streptococcus
pneumoniae.
Streptocoques
GROUPAGE DES STREPTOCOQUES
TECHNIQUE :
Deux méthodes sont possibles
Méthode chimique
2 gouttes nitrite de sodium
2 gouttes acide acétique
Méthode enzymatique
Culture pure sur gélose au sang du Streptocoque
Suspension épaisse
dans 1mL de bouillon
Todd Hewitt
1h à 20°C
Suspension légère dans
0,5mL de solution
enzymatique (pronase)
15min à 37°C
Le surnageant constitue l’extrait antigénique
REACTION ANTIGENIQUE :
Bien agiter les suspensions de latex (Ac)
Mettre 1 goutte de chaque suspension sur lame
Déposer 1 goutte d’extrait (Ag) sur chaque goutte de
suspensions
Agiter
L’agglutination doit apparaître en moins de 2min.
REMARQUE :
Le groupage est surtout intéressant pour les groupes A, B, C, F et G.
Le groupe D ne donne pas toujours des résultats interprétables.
Streptococcus pneumoniae n’est pas concerné par ce groupage
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