05_I7_B_Num_01.doc I-7 Immunologie Fiche sujet élève

05_I7_B_Num_01.doc I-7 Immunologie
Fiche sujet élève
DETECTION D’ANTICORPS DANS LE SERUM D’UN LAPIN PAR ELECTROPHORESE
VERSION AVEC LECTURE OPTIQUE DES RESULTATS
Lorsqu’un antigène a pénétré dans un organisme, le processus d’immunisation consiste à synthétiser des anticorps spécifiques. Les anticorps
sont alors présents dans le sérum et permettent une réponse immunitaire efficace.
Une électrophorèse de protéines et sa lecture optique permettent de détecter la présence d’anticorps dans le sérum d’un sujet immunisé.
On cherche à déterminer si un lapin a subi une immunisation récente contre l’antigène BSA (ou autre antigène).
Matériel :
- cuve à électrophorèse ; tampon d’électrophorèse à pH 9,2 ;
- trois verres de montre, deux bandes d’acétate, papier filtre ;
- trois applicateurs de sérum (lamelles de dépôt en verre ou équivalent) ;
- sérum d’un lapin L1 ayant subi une immunisation récente contre la BSA (ou un autre antigène) ;
- sérum d’un lapin L2 non immunisé ;
- sérum d’un lapin L testé ;
- ordinateur, résultats d’électrophorèse numérisés dans un fichier - image et tableau à remplir dans un fichier – texte ;
- logiciel MESURIM et fiche technique d’utilisation pour lecture optique de bande d’électrophorèse.
Activités et déroulement des activités Capacités et critères d’évaluation Barème
1- Mettre en œuvre le protocole en suivant les indications de la fiche
technique 1 - électrophorèse.
Appeler l’examinateur pour vérifier le montage
et accéder aux fichiers suivants :
résultats numérisés et tableau à remplir pour les questions 3 et 4
2- Justifier l’intérêt de l’analyse des sérums des trois lapins.
3- Réaliser une lecture optique des résultats numérisés avec le logiciel
MESURIM en utilisant les indications de la fiche technique 2 - MESURIM.
4- Légender complètement, avec votre traitement de texte habituel, le
document constitué à l’aide de la fiche technique 1 - électrophorèse.
5- Conclure, en argumentant à l’aide des données fournies, si le lapin testé
a subi ou non une immunisation récente contre la BSA (ou autre antigène).
Réaliser une manipulation en suivant un protocole
- Respect des étapes du protocole.
- Utilisation maîtrisée du matériel.
- Organisation de la paillasse.
Adopter une démarche explicative
Utiliser un logiciel de traitement d’image
Utilisation maîtrisée des fonctionnalités du logiciel
Utiliser un logiciel de traitement de texte
Légendes complètes et correctes – titre adapté
Adopter une démarche explicative
10
2
3
3
2

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Fiche technique 1 - électrophorèse – élève
DETECTION D’ANTICORPS DANS LE SERUM D’UN LAPIN PAR ELECTROPHORESE
VERSION AVEC LECTURE OPTIQUE DES RESULTATS
Principe : en milieu basique, les protéines sont chargées négativement ; lorsqu’un mélange de
protéines est soumis à un champ électrique, les protéines migrent à une distance caractéristique
de leur taille et de leur charge.
Les anticorps font partie des gamma globulines
Remarques : La migration durant une heure, des bandes d’acétate après migration et déjà
colorées au rouge Ponceau seront distribuées.
Le rouge Ponceau est un colorant spécifique des protéines, car ayant pour elles une grande
affinité.
Protocole d’utilisation du matériel :
MISE EN PLACE DES BANDES D’ACETATE DE CELLULOSE DANS LA CUVE.
1. Remplir la cuve à électrophorèse au 2/3 avec la solution tampon, de chaque côté, en évitant tout débordement.
Ne jamais toucher les bandes d’acétate avec les doigts, sinon des traces de doigts apparaîtront à la coloration.
2. Sortir les bandes des bacs à l’aide d’une pince, les placer entre 2 feuilles de papier filtre et les sécher à l’aide d’un mouvement rapide.
3. Fixer les bandes d’acétate de cellulose sur le portoir de la cuve, tendues le plus possible (sans les déchirer bien entendu), de façon à ce
que la face mate qui est absorbante soit sur le dessus (encoche de la bande en bas à droite). Les bandes doivent être parallèles entre
elles et perpendiculaires à l’axe du portoir pour permettre une migration des protéines dans l’axe du portoir.
4. Poser le portoir dans la cuve et vérifier que les extrémités de chaque bande trempent dans le tampon de la cuve.
DEPOT DES SERUMS
1. Tremper l’applicateur dans le sérum du lapin L, déposer rapidement l’applicateur près du bord, du côté biseauté et perpendiculairement à
l’axe du portoir. (Faire une application bien nette)
2. Faire de même sur une autre bande pour le sérum L1 et le sérum L2 (pour ces sérums, le dépôt se fait sur la même bande, en veillant à
ce que les tâches ne se touchent pas).
MISE EN ROUTE DE L’ELECTROPHORESE
1. Fermer la cuve avec le couvercle : côté cathode (pôle négatif, borne noire) près du bord avec encoche.
2. Relier la cuve au générateur à l’aide du cordon. Respecter la correspondance des couleurs entre cordons et douilles.
3. Régler la tension de l’alimentation sur 160V.
4. Raccorder l’appareil au secteur.

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5. Mettre sous tension. La migration démarre et durera une heure. Les résultats fournis sont colorés au rouge Ponceau.
Fiche technique 2 – MESURIM - élève
DETECTION D’ANTICORPS DANS LE SERUM D’UN LAPIN PAR ELECTROPHORESE
VERSION AVEC LECTURE OPTIQUE DES RESULTATS
Protocole de lecture optique des bandes pour évaluer les concentrations des différentes protéines avec MESURIM
Principe : Plus la concentration en protéines est forte dans une portion de bande d’électrophorèse, plus la coloration est forte. On peut
donc évaluer les concentrations des différentes catégories de protéines par mesure optique de la densité de coloration sur la bande.
Les bandes de gel d’électrophorèse obtenues dans cette étude ont été numérisées à l’aide d’un scanner et sauvegardée dans un seul fichier
image. La densité de couleur des images sera ensuite lue avec les outils du logiciel Mesurim.
- Lancer MESURIM et ouvrir le fichier, accessible par le menu « fichier » , à l’emplacement désigné par l’examinateur.
- Cliquer sur l'icône de mesure puis tracer par cliquer – glisser de gauche à droite une ligne horizontale parcourant la première
électrophorèse en son milieu (ou une zone plus représentative); c’est la ligne suivant laquelle la mesure d’absorption de lumière sera faite
- Choisir dans le menu de mesure le menu Mesure de lumière sur une bande ; une fenêtre de paramétrage apparaît.
- Choisir : - « largeur en pixel » : 10
- « une mesure en absorption » :
- tous (les canaux de couleurs)
- « mesures » linéaires puis cliquer sur le bouton Mesurer.
- Choisir dans le menu « graphique » de la fenêtre de mesure : fond blanc puis copier.
- Coller ce premier graphique dans le fichier texte ouvert sur le bureau de l’ordinateur, dans la première ligne du tableau dessiné dans ce
fichier et enregistrer.
- Répéter le protocole pour les deux autres profils : ATTENTION : le graphe précédent reste affiché jusqu’à un nouveau clic sur
« mesurer ». Coller les graphiques obtenus dans les lignes 2 et 3 du tableau.
- Redimensionner si nécessaire les images pour que le tableau tienne dans une seule page : enregistrer sur disquette.
- Utiliser le traitement de textes pour légender, dans les espaces disponibles du tableau, le document ainsi constitué.