Terminale S Fiche Méthode – Réaliser une - DupuySVT

Terminale S
Fiche Méthode – Réaliser une électrophorèse
Les autres fiches méthodes utilisées en classe sont disponibles sur le site http://theosvt.free.fr bsavoye2011
PRINCIPE
Placées dans un champ électrique (entre une anode + et
une cathode -, séparées par une solution conductrice),
des molécules chargées électriquement migrent vers l’une
des électrodes, de signe opposé à leur charge.
Les protéines sont des polymères d’acides aminés.
Chacun des 20 acides aminés est soit neutre, soit porteur
d’une charge positive ou négative. La charge électrique
d’une protéine est la somme des charges des différents
acides aminés qui la constitue.
La migration est d’autant plus importante que leur masse
moléculaire est faible.
OBJECTIF
Détecter des variations de concentrations plasmatiques en
protéines (par exemple en fonction d’un état immunitaire.)
MATERIEL
 Solution conductrice tampon pH 9,2 (à ce pH basique,
les fonctions acides sont ionisées COO-, ce sont donc
des anions, et les fonctions bases sont neutres NH2)
 Différents colorants
 Cuve à électrophorèse
 Bande de papier filtre
PROTOCOLE
1. ATTENTION Toujours manipuler la bande en la tenant
par les tranches ou à l’aide d’une pince, car les traces
de doigts peuvent limiter la migration.
2. Immerger la bande dans la cuve pendant 10 minutes
3. Sortir la bande, la sécher entre deux feuilles de papier
filtre
Fixer la bande sur la plaque support (face mate absorbante
vers le haut, coin coupé en bas à droite côté cathode).
Les deux extrémités de la bande doivent tremper dans la
solution tampon de la cuve
4. Déterminer le côté (par rapport à l’anode ou la
cathode) où doit être placé le dépôt
5. Appliquer, à l’aide d’un cure-dents, une goutte de
chacun des colorants.
6. Déposer la lamelle dans le cristallisoir
7. Fermer la cuve
8. Régler la tension sur 160 V ; brancher les électrodes
sur le générateur ; mettre sous tension.
S’assurer que la diode rouge entre les 2
électrodes est allumée ; sinon, vérifier la fermeture de
la cuve
9. Laisser migrer pendant 20 minutes.
10. Débrancher l’alimentation électrique.
11. Laisser sécher sur une plaque de verre.