TP metabolisme _ méthodes_ instrumentations Fichier
publicité
Jérémy Terrien, PhD UMR CNRS/MNHN 7179 MECADEV Mardi 14 Avril 2015 Outils pour mesurer le métabolisme en expérimentation animale TP SEP 59 - Bases de morphologie fonctionnelle Approche intégrative Approche intégrative Plusieurs paramètres doivent être pris en considération: - Quel paramètre (et donc quel test)? - Quel effectif? - Quel tissu? Approche intégrative Plusieurs paramètres doivent être pris en considération: - Quel paramètre (et donc quel test)? Quel effectif? Quel tissu? Quelle heure? Approche intégrative Plusieurs paramètres doivent être pris en considération: - Quel paramètre (et donc quel test)? Quel effectif? Quel tissu? Quelle heure? - Considérations éthiques Mesure du métabolisme Mesure du métabolisme Phénotypage Mesure continue de différents paramètres révélateurs du métabolisme: - Poids Prise alimentaire Composition corporelle Température corporelle / activité locomotrice Respirométrie Approche in vitro Composition corporelle Bioimpédance Isotope stables Méthodes basée sur le volume de dilution des isotopes injectés (proportion fixe d’eau dans la masse maigre) Imagerie Composition corporelle Température corporelle Collier thermique: stockage et émission télémétrique Température de la peau Température corporelle Caméra thermique: émission d’infrarouge Température de surface Température corporelle / activité locomotrice Implants intra-abdominal: émission télémétrique Température interne / corporelle Respirométrie Mesure des échanges respiratoires Le quotient respiratoire Paramètre critique des performances métaboliques: Nombre de moles d’O2 consommées pour une mole de CO2 produite QR = VCO2 / VO2 Ratio représentatif du substrat utilisé pour le métabolisme oxydatif Oxydation lipidique: VO2 > VCO2 Oxydation glucidique: VO2 = VCO2 ROS RER = 0,7 RER = 1 Respiration mitochondriale in vitro Technologie Seahorse Autorise les mesures simultanées de la concentration d’O2 et du pH dans un milieu ECAR OCR Respiration mitochondriale in vitro Homéostasie du glucose Test oral de tolérance au glucose Gavage d’une solution de glucose (2mg/kg) et suivi de la glycémie Homéostasie du glucose Test de tolérance à l’insuline Injection ip d’une solution d’insuline (2mg/kg) et suivi de la glycémie WT KO Homéostasie du glucose Clamp euglycémique hyperinsulinémique Injection d’insuline puis infusion de glucose pour maintenir glycémie constante Homéostasie du glucose Mesure du métabolisme Le protéome Mesure des protéines exprimées par un organisme: - Approche protéine-candidat (Western blot, dosages, etc) Dosages hormonaux Mesure des différentes hormones impliquées dans le métabolisme: - Hormones thyroïdiennes (T3, T4, TSH) Cortisol Insuline / IGF-1 Ghréline / leptine Gut hormone (GLP-1, GIP, etc) Dosage à partir de sang ou d’urine La protéomique - Approche whole genome (Protéomique) Mesure du métabolisme Le transcriptome Mesure des transcrits exprimés par un organisme: - Approche gène cible (qPCR) La transcriptomique - Approche whole genome (RNAseq) Le transcriptome L’épigénétique L’épigénétique Mesure du métabolisme Variations du génome Recherche SNPs: de mutations - Approche gène candidat - Approche whole genome ou Approche intégrative Des questions??
