Marquages immunohistochimiques

APPROCHE DES INTERACTIONS CELLULAIRES ET DE LA COLOCALISATION
NEURONALE EN MICROSCOPIE OPTIQUE ET ELECTRONIQUE
I - Immunocytochimie : généralités
II - Préparation des tissus
A - Fixation
B - Inclusion
III - Traceurs
IV - Microscopie de fluorescence
A - Microscopie de fluorescence conventionnelle
B - Microscopie confocale à balayage laser
V - Marquages multiples en microscopie de fluorescence
VI - Microscopie électronique
A - Microscopie électronique en transmission
B - Techniques de marquages en microscopie électronique
C - Applications aux marquages multiples
IMMUNOCYTOCHIMIE
Technique directe Technique indirecte
Anticorps
Traceur
Antigène
Tissu
Marquages immunohistochimiques

Test de spécificité par compétition
Sensibilité

Ac I
Ac II
Traceur 2
Traceur 1
Marquages multiples
Marquages multiples
- Spécificité respective des anticorps et des méthodes de révélation
- Absence de réactions croisées
Spécificité
- Sensibilité respective des anticorps, des réactifs et des systèmes de révélation
- Limitations liées au masquage potentiel de sites antigéniques par le premier système
de révélation
- Limitations liées à lencombrement stérique
(cas de la détection dantigènes colocalisés au sein dun même élément cellulaire)
Sensibilité

APPROCHE DES INTERACTIONS CELLULAIRES ET DE LA COLOCALISATION
NEURONALE EN MICROSCOPIE OPTIQUE ET ELECTRONIQUE
I - Immunocytochimie : généralités
II - Préparation des tissus
A - Fixation
B - Inclusion
III - Traceurs
IV - Microscopie de fluorescence
A - Microscopie de fluorescence conventionnelle
B - Microscopie confocale à balayage laser
V - Marquages multiples en microscopie de fluorescence
VI - Microscopie électronique
A - Microscopie électronique en transmission
B - Techniques de marquages en microscopie électronique
C - Applications aux marquages multiples
Fixation des tissus
Finalité:
-
Immobiliser les molécules in situ (antigènes)
- Préserver laspect (ultra)structural du tissu
Inconvénients:
-
Modification des antigènes pouvant changer leur affinité pour les
anticorps
- Réticulation du tissu freinant ou empêchant la diffusion des réactifs
Choix du fixateur:
-
Selon le type dobservation envisagée (m. optique ou électronique)
- Selon les structures à préserver
- Selon les molécules à immobiliser
Compromis

Principaux fixateurs
 Déshydratants
alcools, acétone, lyophilisation
 Agents précipitants
acide picrique, acide acétique
 Agents de pontage chimique
formaldéhyde, glutaraldéhyde, acroléine
 Acide tannique
 Tétroxyde dosmium (acide osmique)
Principaux fixateurs
Fixateurs aldéhydiques
Réagissent essentiellement
avec les groupements aminés
des protéines
Tétroxyde dosmium (acide osmique)
Réagit principalement sur les doubles liaisons insaturées
des lipides. Indispensable pour une bonne préservation des
membranes en microscopie électronique.
Utilisé en post-fixation après la fixation aldéhydique