Dr Cozon Principaux Elements Bilan Immunite humorale
publicité
Principaux éléments d’un bilan de l’immunité humorale et cellulaire G. Cozon Octobre 2011 Faculté de Médecine et de Maïeutique Lyon Sud Charles Mérieux Indication d’un bilan immunologique • Suspicion de déficit immunitaire – Bilan d’infections à répétition – Bilan d’infections graves • Suspicion d’hyperréactivité – Hypersensibilité immédiate – Hypersensibilité retardée • Suspicion de maladies inflammatoires • Suspicion de maladies auto-immunes Bilan biologique d’un déficit immunitaire • • • • NFS, VS, CRP Exploration de l’immunité humorale Exploration de l’immunité cellulaire Exploration de l’immunité innée NFS, VS, Protéine C réactive • GR Anémie inflammatoire : – deux phases évolutives : • L'anémie est initialement normochrome normocytaire arégénérative. • L'inflammation persistant, l'anémie peut devenir microcytaire et hypochrome • Fer sérique abaissé et capacité totale de fixation (CTF) de la transferrine normale ou abaissée (donc coefficient de saturation (CS) normal ou pas aussi diminué que dans une carence en fer) ; ferritinémie souvent élevée. • Thrombocytose et hyperleucocytose à polynucléaires fréquentes. • Vitesse de sédimentation augmentée, fibrinogénémie augmentée, hypergamma et hyper -alpha-2globulinémie, haptoglobinémie élevée, CRP (C Anémie de la grossesse • microcytaire (VGM < 80 µ3), mais parfois normocytaire (80 < VGM < 100 µ3) si anémie récente • arégénérative (réticulocytes non augmentés, généralement < à 50000/mm3) • carence martiale (ferritinémie inférieure à 12 mg/L) Protéines de l’inflammation • • • • CRP (Protéine Créactive) Procalcitonine plus précoce que la CRP Fibrinogène VS accélérée Oromucoïde, haptoglobuline, sérum amyloïde A • Électrophorèse de Pr sérique – hypergamma et hyper-alpha-2-globulinémie Cinétique des protéines de l’inflammation Phase aigue CRP Plasma concentration (% variation) SAA AAG 1 PI C3 Haptoglobine Céruloplasmine Fibrinogène Albumine Transferrine TTR Jours Adapted from Hachulla Immunité humorale spécifique • Électrophorèse des Pr : hypogammaglobulinémie • Dosage pondérale des IgG, IgA et IgM • Dosage des sous-classes d’IgG • Dosage des IgE totales • Sérologie des antigènes vaccinaux Recherche d’auto-anticorps • • • • • Anti-ADN natif test de Farr Méthode en IF : Ac antinucléaires Techniques ELISA ou Luminex Facteur rhumatoïde, Ac Pep Citru Ac Anti phopholipides anticoagulant circulant dans le syndrome des anti-phospholipides Recherche d’IgE dans l’allergie • Après des tests cutanés • RAST IgE spécifiques • CLA trophallergènes ou pneumallergènes Immunité humorale innée • CH50, C3 et C4 et autres composants du complément en cas d’anomalie du CH50. – Élévation pdt la grossesse, Kc, Hodgkin – Diminution lors de déficit, de poussées de MAI • Alpha-1-antitrypsine et alpha-1 antichymotrypsine inhibiteur enzymatique dont le déficit peut donner des emphysème Immunité cellulaire spécifique • • • • Phénotypage T, B et NK Autres marqueurs Réponse aux mitogènes : TTL Réponse aux antigènes spécifiques : TTL, TAL • Quantiféron et Elispot Phénotypage T, B et NK • Principe : incubation des GB avec des anticorps monoclonaux spécifiques couplés avec des fluorochromes, • Lecture après élimination des anticorps non fixés au microscope à fluorescence et surtout au cytomètre en flux. Cytomètre en flux Exemple Marqueurs de sous populations • Lymphocytes T : CD3 – Ly CD3+ CD4+ (CD8-) – Ly CD3+ CD8+ (CD4-) • Lymphocytes B : CD19, CD20, CD21 • Lymphocytes NK : CD16+ CD56+ Autres marqueurs • Très nbreux surtout pour la recherche • Marqueurs d’activation : HLADR, CD69, CD25 • Marqueur de T régulateurs : CD4+CD25+, Foxp3 Réponse aux mitogènes ou Ags • Test de transformation lymphoblastique (TTL). – Culture de cellules mononucléées + mitogène – Incorporation de thymidine tritiée • Test d’activation lymphocytaire – Culture de cellules mononucléées + mitogène – Marqueurs d’activation CD69, CD25, etc… Quantiféron • Culture en sang complet 16h avec des antigènes de Mycobacterium tuberculosis • Dosage d’interféron dans le surnageant de centrifugation par technique ELISA • La présence d’interféron traduit l’activation récente et donc le contact avec le BK TB spot • Culture de PBMC en présence d’antigène de BK • Plaque ELISPOT : – Coating anti-IFNg – Incubation des cellules 24 heures – 2eme anticorps pour localiser les cellules sécrétrices – Marquage avec un sustrat précipitant ELISPOT Immunité cellulaire non spécifique • Numération de polynucléaires • Test d’activation des Pn – Technique NBT – Technique cytométrie • Test d’activation des basophiles – Technique cytométrie
