PD-L1 IHC 22C3 pharmDx SK006 50 tests à utiliser avec l

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PD-L1 IHC 22C3 pharmDx
SK006
50 tests à utiliser avec l’instrument Autostainer Link 48
Utilisation prévue
Destiné à un usage diagnostic in vitro.
PD-L1 IHC 22C3 pharmDx est un test immunohistochimique qualitatif qui utilise le clone 22C3 de l’anticorps monoclonal murin anti-PD-L1
pour la détection de la protéine PD-L1 dans des coupes de tissu de cancer du poumon non à petites cellules (CPNPC) fixées au formol et
incluses en paraffine (FFPE) au moyen du système de visualisation EnVision FLEX sur l’instrument Autostainer Link 48. L’expression de la
protéine PD-L1 est déterminée à l’aide du score TPS (Tumor Proportion Score), qui représente le pourcentage de cellules tumorales
viables présentant une coloration membranaire partielle ou complète. L’échantillon doit être considéré comme étant positif pour la protéine
PD-L1 si le score TPS est ≥ 50 % de cellules tumorales viables présentant une coloration membranaire de quelconque intensité.
Le test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx est indiqué pour faciliter la détermination des patients atteints de CPNPC qui sont admissibles au
traitement par KEYTRUDA® (pembrolizumab).
Résumé et explication
La liaison des ligands PD-1, PD-L1 et PD-L2, au récepteur PD-1 se trouvant sur les lymphocytes T inhibe la prolifération des
lymphocytes T et la production de cytokine. Une régulation en amont des ligands PD-1 se produit dans certaines tumeurs, et la
signalisation par cette voie peut contribuer à l’inhibition de la surveillance immunitaire active des tumeurs par les lymphocytes T.
KEYTRUDA® (pembrolizumab) est un anticorps monoclonal humanisé qui se lie au récepteur PD-1 et bloque son interaction avec
PD-L1 et PD-L2, permettant l’inhibition par la voie PD-1 de la réponse immunitaire, notamment la réponse immunitaire antitumorale.
Dans les modèles tumoraux syngéniques murins, le blocage de l’activité PD-1 a permis de réduire la croissance tumorale.
Principe de la procédure
Le test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx contient des réactifs optimisés et intègre le protocole requis pour réaliser une procédure de
coloration IHC d’échantillons FFPE avec l’instrument Autostainer Link 48. Après incubation avec l’anticorps monoclonal primaire dirigé
contre PD-L1 ou le réactif de contrôle négatif (RCN), les échantillons sont incubés avec un anticorps de liaison spécifique à l’espèce
hôte de l’anticorps primaire, puis avec un réactif de visualisation prêt à l’emploi constitué de molécules d’anticorps secondaire et de
molécules de peroxydase de raifort couplées à une chaîne principale du dextrane (polymère). La conversion enzymatique du
chromogène ajouté par la suite entraîne la précipitation d’un produit de réaction visible sur le site de l’antigène. La couleur de la réaction
chromogénique est modifiée par un réactif d’amplification du chromogène. L’échantillon peut alors être contre-coloré et recouvert d’une
lamelle de protection. Un microscope optique est utilisé pour l’interprétation des résultats.
Matériel fourni
Le test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx (réf. SK006) est destiné à la coloration automatisée au moyen de l’instrument Autostainer Link 48.
Chaque trousse comprend 19,5 mL d’anticorps primaire dirigé contre PD-L1 (concentration de protéines d’environ 3 µg/mL) et contient
les réactifs nécessaires pour effectuer 50 tests jusqu’à 15 cycles individuels. Le matériel indiqué ci-dessous permet d’effectuer 50 tests
(50 lames incubées avec l’anticorps primaire dirigé contre PD-L1 et 50 lames incubées avec le réactif de contrôle négatif
correspondant; soit un total de 100 lames). Le nombre de tests indiqué suppose l’utilisation de 2 x 150 µL de chaque réactif par lame
sauf pour DAB+ et la solution de récupération des cibles.
La trousse contient une quantité suffisante de matériel pour un maximum de 15 cycles de coloration.
Quantité Description
1 x 34,5 mL Réactif de blocage de la peroxydase
PEROXIDASE-BLOCKING
REAGENT
Solution tampon contenant du peroxyde d’hydrogène, un détergent et 0,015 mol/L d’azoture de sodium.
1 x 19,5 mL Anticorps primaire : anticorps monoclonal murin anti-PD-L1, clone 22C3
MONOCLONAL MOUSE
ANTI-PD-L1
CLONE 22C3
Anticorps monoclonal murin anti-PD-L1 dans une solution tampon contenant une protéine stabilisante et 0,015 mol/L
d’azoture de sodium.
1 x 15 mL Réactif de contrôle négatif
NEGATIVE CONTROL
REAGENT
Anticorps monoclonal murin IgG de contrôle dans une solution tampon contenant une protéine stabilisante et
0,015 mol/L d’azoture de sodium.
1 x 34,5 mL Anticorps de liaison murin
LINKER,
ANTI-MOUSE
Anticorps secondaire de lapin dirigé contre les immunoglobulines murines dans une solution tampon contenant une
protéine stabilisante et 0,015 mol/L d’azoture de sodium.

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1 x 34,5 mL Réactif de visualisation HRP
VISUALIZATION
REAGENT-HRP
Dextrane couplé à des molécules de peroxydase et à des molécules d’anticorps secondaire de chèvre dirigé contre les
immunoglobulines de lapin et de souris dans une solution tampon contenant une protéine stabilisante et un agent
antimicrobien.
15 x 7,2 mL Tampon de substrat DAB+
DAB+
SUBSTRATE BUFFER
Solution tampon contenant du peroxyde d’hydrogène et un agent antimicrobien.
1 x 5 mL Chromogène DAB+
DAB+ CHROMOGEN
Tétrahydrochlorure de 3,3’-diaminobenzidine dans un solvant organique.
1 x 34,5 mL Amplificateur DAB
DAB ENHANCER
Sulfate de cuivre dans l’eau.
6 x 30 mL Solution de récupération des cibles EnVision FLEX, faible pH, 50x
EnVision™ FLEX
TARGET RETRIEVAL SOLUTION
LOW pH (50X)
Solution tampon, pH de 6,1 contenant un détergent et un agent antimicrobien.
15 lames Lames de contrôle PD-L1 IHC 22C3 pharmDx
CONTROL SLIDES
Chaque lame contient des sections de deux lignées cellulaires concentrées fixées au formol et incluses en paraffine :
NCI-H226* avec expression de la protéine PD-L1 modérée et MCF-7 avec expression de la protéine PD-L1 négative.
PD-L1 IHC 22C3
pharmDx
XXXXX
* La participation des Drs AF Gazdar et JD Minna du NIH dans la mise au point de NCI-H226 (n° ATCC : CRL-5826™) est soulignée (1).
Remarque : Tous les réactifs inclus sont formulés spécifiquement pour être utilisés avec cette trousse. Pour que le test fonctionne comme
indiqué, aucune substitution ne doit être effectuée, à l’exception de la solution de récupération des cibles EnVision FLEX, faible pH, 50x
(réf. K8005). Le test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx a été spécialement conçu pour être utilisé avec l’instrument Autostainer Link 48. Pour de
plus amples renseignements, se reporter aux guides de l’utilisateur des instruments Autostainer Link 48 et PT Link.
Matériel requis, mais non fourni
Module de prétraitement PT Link (réf. PT100)
Instrument Autostainer Link 48 (réf. AS480)
Tampon de lavage EnVision FLEX, 20x (réf. K8007)
Hématoxyline (réf. K8008)
Eau distillée ou désionisée (eau de qualité requise pour les réactifs)
Minuteur
Tissus positifs et négatifs à utiliser comme témoins dans le processus (voir la section Contrôle de la qualité)
Lames porte-objets : Lames porte-objets Dako FLEX IHC (réf. K8020) ou lames chargées Fisherbrand Superfrost Plus
Couvre-objets
Milieu de montage permanent et réactifs auxiliaires nécessaires au montage des couvre-objets
Microscope optique (grossissement de l’objectif de 4 à 40x)
Précautions
1. Destiné à un usage diagnostic in vitro.
2. Réservé à des utilisateurs professionnels.
3. Ce produit contient de l’azoture de sodium (NaN3), une substance chimique hautement toxique dans sa forme pure. Aux
concentrations du produit, bien qu’il ne soit pas classé comme dangereux, le NaN3 peut réagir avec le cuivre et le plomb des
canalisations pour former des azotures métalliques hautement explosifs. Lors de l’élimination, rincer abondamment à l’eau pour
éviter toute accumulation d’azoture dans les canalisations (2).
4. L’anticorps primaire, le réactif de contrôle négatif, l’anticorps de liaison et le réactif de visualisation contiennent des matériaux
d’origine animale.
5. Les échantillons, avant et après la fixation, ainsi que tous les matériaux qui y ont été exposés, doivent être manipulés comme s’ils
pouvaient transmettre une infection et être éliminés avec toutes les précautions nécessaires (3).
6. Toutes durées, températures ou méthodes d’incubation autres que celles indiquées peuvent entraîner des résultats erronés.
7. Les réactifs sont à la dilution optimale. Une dilution supplémentaire peut entraîner une perte de coloration des antigènes.
MCF-7 : PD-L1 négatif
NCI-H226 : PD-L1 positif

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8. Une exposition à une luminosité élevée peut endommager le réactif de visualisation, le chromogène DAB+ liquide et la solution de
substrat chromogène DAB+. Ne pas conserver les composants de la trousse ni effectuer de coloration sous une lumière vive,
comme la lumière directe du soleil.
9. Les résidus de paraffine peuvent produire des faux négatifs.
10. L’utilisation de volumes de réactif autres que ceux recommandés peut entraîner une perte de l’immunoréactivité visible à PD-L1.
11. Les résultats d’une étude de petite envergure ont mis en évidence une plage dynamique similaire de l’expression de PD-L1 dans
des paires d’échantillons de patients atteints de CPNPC métastatique et primaire. Il est dès lors possible que des différences
surviennent, chez un même patient, au niveau de l’expression de PD-L1 dans le cas de tumeurs primaires ou métastatiques.
12. De grandes coupes de tissus peuvent nécessiter 3 x 150 µL de réactif.
13. En règle générale, les personnes âgées de moins de 18 ans ne sont pas autorisées à manipuler ce produit. Les utilisateurs doivent
être formés aux procédures de travail adéquates, aux propriétés dangereuses du produit et aux instructions de sécurité
nécessaires. Se reporter à la fiche signalétique pour plus de plus amples renseignements.
14. Porter un équipement de protection individuelle approprié pour éviter tout contact avec les yeux et la peau.
15. Les solutions non utilisées doivent être éliminées conformément aux réglementations locales, fédérales et provinciales.
16. La fiche signalétique destinée aux utilisateurs professionnels est disponible sur demande.
Danger
Chromogène DAB+ : 1-5 % de tétrachlorure de biphényl-3,3’,4,4’-tétrayltétraammonium
H350 Peut provoquer le cancer.
H341 Susceptible d’induire des anomalies génétiques.
P201 Se procurer les instructions avant utilisation.
P202 Ne pas manipuler avant d’avoir lu et compris toutes les précautions de sécurité.
P280 Porter des gants de protection. Porter un équipement de protection des yeux ou du visage. Porter des
vêtements de protection.
P308 + P313 EN CAS d’exposition prouvée ou suspectée : Consulter un médecin.
P405 Garder sous clef.
P501 Éliminer le contenu et le récipient conformément à toutes les réglementations locales, régionales, nationales et
internationales.
Mise en garde
Solution de récupération des cibles EnVision FLEX, faible pH (50x) : 1-5 % d’acide citrique
H319 Provoque une sévère irritation des yeux.
H411 Toxique pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long terme.
P280 Porter un équipement de protection des yeux ou du visage.
P273 Éviter le rejet dans l’environnement.
P264 Se laver soigneusement les mains après manipulation.
P305 + P351 +
P338
EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : Rincer avec précaution à l’eau pendant plusieurs minutes. Enlever
les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer.
P337 + P313 Si l’irritation oculaire persiste : Consulter un médecin.
P501 Éliminer le contenu et le récipient conformément à toutes les réglementations locales, régionales, nationales et
internationales.
Conservation
Conserver tous les composants du test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx, y compris les lames de contrôle, dans l’obscurité et à une
température entre 2 et 8 °C lorsqu’ils ne sont pas utilisés sur l’instrument Autostainer Link 48.
Ne pas utiliser la trousse après la date de péremption indiquée sur la boîte. Si les réactifs sont conservés dans des conditions
autres que celles indiquées dans la notice, ceux-ci doivent être validés par l’utilisateur.
Aucun signe évident n’indique l’instabilité de ce produit. Par conséquent, les contrôles positifs et négatifs doivent être analysés en
même temps que les échantillons de patients.
Préparation des échantillons
Les échantillons doivent être manipulés de façon à préserver le tissu pour la coloration IHC. Des méthodes standard de traitement des
tissus doivent être utilisées pour tous les échantillons.
Coupes incluses en paraffine
L’utilisation de coupes de tissu fixées au formol et incluses en paraffine est convenable. Les autres fixateurs n’ont pas été validés et
peuvent produire des résultats erronés. Il est recommandé de respecter un temps de fixation de 12 à 72 heures dans une solution de
formol neutre tamponné à 10 %. Toutefois, une étude menée sur un nombre limité d’échantillons a révélé que des temps de fixation
de 4 à 168 heures dans une solution de formol neutre tamponné à 10 % n’altéraient pas systématiquement la détection de PD-L1. Des
temps de fixation ≤ 3 heures peuvent causer une détection variable de PD-L1. Les échantillons doivent être inclus dans des blocs d’une
épaisseur de 3 à 4 mm, fixés au formol puis déshydratés et nettoyés dans une série de bains d’alcools et de xylène, et enfin infiltrés par
la paraffine fondue. La température de la paraffine ne doit pas dépasser 60 °C. L’utilisation de blocs de tissus fixés au formol et inclus
en paraffine datant de cinq ans ou plus peut entraîner une perte de l’immunoréactivité à PD-L1.
L’épaisseur des coupes d’échantillons tissulaires doit être comprise entre 4 et 5 µm. Après avoir été coupés, les tissus doivent être montés
sur des lames Fisherbrand Superfrost Plus ou des lames porte-objets Dako FLEX IHC (réf. K8020), puis placés dans un four à 58 ± 2 °C
pendant une heure. Afin de préserver l’antigénicité, les coupes de tissus, une fois montées sur les lames, doivent être conservées dans
l’obscurité entre 2 et 8 °C, ou à température ambiante maximale de 25 °C, puis colorées dans les six mois suivant la coupe. Les conditions
de conservation et de manipulation des lames ne doivent à aucun moment dépasser 25 °C après le montage, afin de garantir l’intégrité et
l’antigénicité des tissus.
L’utilisation du test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx sur des tissus décalcifiés n’a pas été validée et n’est pas recommandée.

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Préparation des réactifs
Les réactifs suivants doivent être préparés avant de procéder à la coloration :
Solution de récupération des cibles EnVision FLEX, faible pH, 50x
Préparer une quantité suffisante de solution de récupération des cibles 1x, faible pH, en diluant la solution de récupération des cibles,
faible pH, 50x selon un rapport de dilution de 1/50 avec de l’eau distillée ou désionisée (eau de qualité requise pour les réactifs); le pH
de la solution de récupération des cibles 1x doit être de 6,1 ± 0,2. Un pH inférieur à 5,9 risque d’entraîner des résultats erronés.
Un flacon de 30 mL de solution de récupération des cibles, faible pH, 50x, diluée selon un rapport de dilution de 1/50, donne 1,5 L de
réactif 1x, suffisant pour remplir un réservoir PT Link, qui permettra de traiter jusqu’à 24 lames à la fois. Jeter la solution de récupération
des cibles 1x après trois utilisations et ne pas l’utiliser plus de cinq jours après la dilution.
Une solution de récupération des cibles EnVision FLEX, faible pH, 50x supplémentaire est disponible, au besoin (réf. K8005).
Tampon de lavage EnVision FLEX, 20x
Préparer une quantité suffisante de tampon de lavage en diluant le tampon de lavage 20x selon un rapport de dilution de 1/20 avec de
l’eau distillée ou désionisée (eau de qualité requise pour les réactifs) pour les étapes de lavage. Conserver la solution 1x inutilisée à
une température entre 2 et 8 °C pendant un maximum d’un mois. Jeter le tampon s’il semble trouble. Se reporter au guide de
l’utilisateur de l’instrument Autostainer Link 48 pour plus d’information.
Le tampon de lavage EnVision FLEX, 20x, est disponible sous la réf. K8007.
Solution de substrat chromogène DAB+
Cette solution doit être bien mélangée avant utilisation. La formation d’un précipité dans la solution n’affecte pas la qualité de la coloration.
Pour préparer la solution de substrat chromogène DAB+, ajouter 1 goutte de chromogène liquide DAB+ par mL de tampon de substrat
DAB+ et mélanger. Une fois préparé, le substrat chromogène est stable pendant cinq jours s’il est conservé dans l’obscurité à une
température entre 2 et 8 °C.
Remarques importantes :
 Si on utilise un flacon entier de tampon de substrat DAB+, ajouter neuf gouttes de chromogène DAB+. Bien que
l’étiquette indique 7,2 mL, il s’agit du volume utilisable, qui ne prend pas en compte le « volume mort » dans le flacon.
 La couleur du chromogène DAB+ liquide dans le flacon peut varier de transparent à lavande-brun. Cela n’affecte en rien les
performances de ce produit. Diluer conformément aux instructions indiquées ci-dessus. L’ajout d’une quantité trop importante
de chromogène liquide DAB+ dans le tampon de substrat DAB+ entraîne une détérioration du signal positif.
Procédure de coloration sur la solution Autostainer Link
Remarques sur la procédure
L’utilisateur doit lire attentivement les présentes instructions et se familiariser avec tous les composants et les instruments avant
utilisation (voir la section Précautions).
Tous les réactifs doivent être portés à température ambiante (20-25 °C) avant la coloration immunologique. De même, toutes les
incubations doivent être effectuées à température ambiante.
Ne pas laisser les coupes de tissu sécher pendant la procédure de coloration. Les coupes de tissus séchées peuvent présenter une
coloration non spécifique plus importante.
Les étapes et les temps d’incubation requis pour la coloration sont tous préprogrammés dans le logiciel Dako Link. Se reporter aux
guides de l’utilisateur des instruments Autostainer Link 48 et PT Link pour plus d’information sur les protocoles de programmation et le
chargement des lames et des réactifs.
Remarque : Les réactifs fournis dans cette trousse et les instructions correspondantes ont été conçus pour des performances
optimales lors de leur utilisation avec les réactifs et matériels recommandés. Toute dilution supplémentaire des réactifs de la trousse,
ainsi que toute modification des temps ou températures d’incubation, peut produire des résultats erronés ou discordants.
Protocole de coloration
Sélectionner le protocole de coloration PD-L1 IHC 22C3 pharmDx dans les options du menu déroulant Dako Link.
Les étapes et les temps d’incubation requis pour la coloration sont tous préprogrammés dans l’instrument Autostainer Link 48. Si les
protocoles PD-L1 IHC 22C3 pharmDx correspondants ne se trouvent pas sur votre serveur, communiquez avec votre représentant du
service technique local pour les obtenir.
Étape 1 : Procédure de déparaffinage, réhydratation et récupération des cibles (3 en 1)
Pour plus de détails, se reporter au guide de l’utilisateur de l’instrument PT Link.
Régler le préchauffage et le refroidissement de l’instrument PT Link (réf. PT100) à 65 °C. Régler le chauffage à 97 °C pendant 20 minutes.
►Remplir les réservoirs PT Link avec 1,5 L de solution de récupération des cibles, faible pH (solution de travail 1x) pour recouvrir les
coupes tissulaires.
►Préchauffer la solution de récupération des cibles à 65 °C.
►Immerger les portoirs Autostainer contenant les coupes tissulaires fixées au formol et incluses en paraffine dans la solution de
récupération des cibles préchauffée, faible pH (solution de travail 1x) présente dans le réservoir PT Link. Incuber pendant 20 minutes
à 97 °C.
►Une fois la durée d’incubation de récupération des cibles terminée et la température redescendue à 65 °C, retirer du réservoir PT Link
chaque portoir Autostainer comportant les lames et placer immédiatement le portoir Autostainer avec les lames dans un réservoir
(p. ex. station de rinçage PT Link, réf. PT109) contenant un tampon de lavage dilué à température ambiante (réf. K8007).
►Incuber les lames dans le tampon de lavage dilué à température ambiante pendant 5 minutes.
Étape 2 : Procédure de coloration
Après la procédure de déparaffinage, réhydratation et récupération des cibles (3 en 1), les portoirs Autostainer avec les lames sont
placés sur l’instrument Autostainer Link 48. L’instrument effectue le processus de coloration en appliquant le réactif approprié, en
surveillant le temps d’incubation et en rinçant les lames entre les réactifs. Les temps d’incubation des réactifs sont préprogrammés dans
le logiciel Dako Link.
Étape 3 : Contre-coloration
Les lames doivent être contre-colorées pendant 5 minutes avec de l’hématoxyline (Link) (réf. K8008). Le temps d’incubation de
l’hématoxyline est préprogrammé dans le protocole.
Étape 4 : Montage
Milieu de montage permanent non aqueux requis.

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Remarque : La coloration des lames pourrait s’atténuer. Ce phénomène est lié à plusieurs facteurs, notamment la contre-coloration, les
matériels et méthodes de montage, ainsi que les conditions de conservation des lames. Pour limiter cette atténuation, conserver les
lames dans l’obscurité à température ambiante (20-25 °C).
Contrôle qualité
La qualité des réactifs fournis avec le test PD-L1 IHC 22C3 pharmDx a été contrôlée par immunohistochimie à l’aide des procédures de
récupération des cibles et de coloration indiquées ci-dessus.
Le non-respect des procédures recommandées pour la fixation, le traitement et l’inclusion des tissus par le laboratoire de l’utilisateur
peuvent générer une variabilité significative des résultats. Des contrôles internes doivent être inclus à chaque cycle de coloration.
Des différences au niveau de la fixation, du traitement et de l’inclusion des tissus au sein du laboratoire de l’utilisateur peuvent générer
une variabilité significative des résultats, requérant des contrôles internes réguliers, en complément des lames de contrôle fournies
dans la trousse (4). Aux États-Unis, les utilisateurs doivent consulter les consignes de contrôle qualité du Certification Program for
Immunohistochemistry du College of American Pathologists (CAP), ainsi que le document Quality Assurance for Immunocytochemistry,
Approved Guideline, du CLSI (5) pour plus de plus amples renseignements.
Tableau 1 : Objectif du contrôle qualité quotidien
Tissu Réactifs Fonction
Contrôle positif : Tissu ou cellules contenant
l’antigène cible à détecter. Le contrôle idéal est
un tissu présentant une faible coloration positive,
qui tend à se révéler plus sensible pour détecter
une dégradation de l’antigène.
Anticorps primaire et système de
détection
Contrôle toutes les étapes de l’analyse. Valide les
réactifs et les procédures utilisés pour la coloration
de PD-L1.
Contrôle négatif : Tissu ou cellules devant être
négatifs (peuvent être situés dans un tissu de
patient ou un tissu de contrôle positif)
Anticorps primaire et système de
détection
Détection d’une réactivité croisée inattendue de
l’anticorps aux cellules/éléments cellulaires.
Lame de contrôle fournie par Dako Anticorps primaire et système de
détection
Contrôle la procédure de coloration uniquement.
Lame de tissu du patient * Réactif de contrôle négatif et
même système de détection que
celui utilisé avec l’anticorps
primaire
Détection d’une coloration de fond non spécifique.
* Réactif provenant de la même espèce que l’anticorps primaire, mais pas dirigé contre le même antigène cible. Pour détecter une
liaison non spécifique de l’anticorps, par exemple une liaison de la partie Fc de l’anticorps par le tissu.
Lames de lignées cellulaires de contrôle (fournies)
Chaque lame contient des sections de deux lignées cellulaires concentrées fixées au formol et incluses en paraffine : NCI-H226 avec
expression de la protéine PD-L1 modérée et MCF-7 avec expression de la protéine PD-L1 négative. Une lame de contrôle doit être
colorée avec l’anticorps primaire dirigé contre PD-L1 à chaque cycle de coloration. L’évaluation des lignées cellulaires des lames de
contrôle fournies dans la trousse indique la validité du cycle de coloration. Elles ne doivent pas être utilisées à des fins d’interprétation
des résultats de patient.
Tissu de contrôle positif
Les contrôles doivent être des échantillons de biopsie/chirurgie récents de la même indication tumorale que les échantillons du patient,
fixés, traités et inclus dès que possible et de la même manière que les échantillons du patient. Les tissus de contrôle positif permettent
d’indiquer si les tissus ont été préparés correctement et si des techniques de coloration appropriées ont été utilisées. Un tissu de
contrôle positif pour chaque ensemble de conditions de test doit être inclus dans chaque cycle de coloration.
Les tissus sélectionnés pour être utilisés comme tissus de contrôle positif doivent donner une coloration faible à modérée afin de
permettre la détection de changements minimes dans la sensibilité du dosage. Les échantillons traités différemment des échantillons de
patients permettent uniquement de valider les performances des réactifs, sans vérifier la préparation des tissus.
Les tissus de contrôle positif connus ne doivent être utilisés que pour vérifier les bonnes performances des tissus traités et des réactifs
de test, et NON pour établir un diagnostic spécifique aux échantillons de patient. Si les tissus de contrôle positif ne présentent pas la
coloration positive appropriée, les résultats des échantillons à analyser doivent être considérés comme non valides.
Tissu de contrôle négatif
Utiliser un tissu de contrôle négatif (dont on sait qu’il est négatif pour PD-L1) de la même indication tumorale que l’échantillon du
patient, fixé, traité et inclus de la même manière que les échantillons du patient, avec chaque cycle de coloration pour vérifier la
spécificité de l’anticorps primaire et fournir une indication de la coloration de fond non spécifique. La variété des différents types
cellulaires présents dans la plupart des coupes de tissu offre des sites de contrôle négatif internes (cela doit être vérifié par l’utilisateur).
Si une coloration spécifique se produit dans le tissu de contrôle négatif, les résultats des échantillons de patient doivent être considérés
comme non valides.
Tissu de contrôle amygdalien (facultatif)
Utiliser un tissu amygdalien humain fixé, traité et inclus de la même manière que les échantillons du patient comme matériel de contrôle
supplémentaire pour vérifier la sensibilité, la spécificité et la coloration de fond non spécifique du dosage.
Une forte coloration positive doit être détectée dans certaines régions de l’épithélium cryptique, et une coloration faible à modérée doit
survenir au niveau des macrophages folliculaires des centres germinatifs. Une coloration négative doit être observée au niveau de
l’endothélium, des fibroblastes et de l’épithélium de surface.
Réactif de contrôle négatif
Utiliser le réactif de contrôle négatif fourni au lieu de l’anticorps primaire sur une coupe de chaque échantillon de patient afin d’évaluer
la coloration non spécifique et d’obtenir une meilleure interprétation de la coloration spécifique au niveau du site de l’antigène. La
période d’incubation du réactif de contrôle négatif doit être équivalente à celle de l’anticorps primaire.
Vérification du dosage
Avant toute première utilisation d’une trousse de coloration lors d’une procédure diagnostique, l’utilisateur doit vérifier les performances
du dosage en le testant sur une série de tissus à l’interne dont les performances IHC sont connues, représentant des tissus positifs et
négatifs connus. Consulter les procédures de contrôle qualité décrites dans cette section de la notice d’emballage, ainsi que les
exigences de contrôle qualité du Certification Program for Immunohistochemistry du CAP et/ou du document Quality Assurance for