Nom : Habert

Stage proposé par Alice JOUNEAU
CR1 INRA
UMR de Biologie du Développement et Reproduction, Bat230, INRA Jouy-en-Josas
Téléphone : 01 34 65 25 68
Mail : [email protected]
Site internet : http://voxel.jouy.inra.fr/bdr/presentation
Directeur du Laboratoire ou de l’Unité : Jean-Paul Renard
Intitulé de l ‘équipe d’accueil : Plasticité fonctionnelle du génome embryonnaire
Prénom et NOM du Responsable de l’équipe : Véronique Duranthon
Résumé du thème de recherche de l’équipe :
Le travail de l’équipe vise à caractériser la reprogrammation des activités du noyau au tout début du
développement de l’embryon de mammifères. Cette reprogrammation est définie comme l’ensemble
des évènements qui permettent à un unique noyau différencié (gamétique ou somatique) d’assurer un
développement à terme (totipotence). Elle est initiée par des facteurs d’origine ovocytaire.
Dans des modèles d’embryons de souris, de lapin et de bovin, nous utilisons le transfert de noyaux
(clonage) pour perturber les relations entre le noyau et le cytoplasme ovocytaire dès le début d’un
programme de développement. Nous avons développé chez le lapin et le bovin des outils de
transcriptomique dédiés pour l’étude spécifique de la dynamique de l’expression précoce des gènes.
Nous étudions comment s’établit et se maintient la pluripotence dans l’embryon, au travers notamment
de l’étude des cellules souches issues de ces embryons.
Titre du projet de stage : Caractérisation des anomalies épigénétiques présentes dans les lignées
de cellules souches d’épiblastes
Prénom, NOM, téléphone et adresse e-mail du Responsable du stage:
Alice JOUNEAU - 01 34 65 25 68 - [email protected]
Projet de stage :
La reprogrammation nucléaire par transfert de noyau (clonage) se déroule progressivement et génère
de nombreuses erreurs qui conduisent à une mortalité dés les stades peri-implantatoires. Cela se
traduit en particulier par une réduction des cellules exprimant Oct4, marqueur des cellules
pluripotentes
Nous avons établi pour la première fois des lignées EpiSC d’embryons clonés. Les EpiSC sont des
cellules souches d’épiblastes dérivées d’embryons déjà implantés. Les ntEpiSC obtenues ont un profil
transcriptionnel qui diffère de celui d’EpiSC contrôles. Une centaine de gènes sont différentiellement
exprimés, la majorité étant sous-exprimées. Cette sous-expression pourrait être due à une
hyperméthylation des promoteurs conduisant à l’extinction de l’expression des gènes.
Le présent projet vise à mieux caractériser ces anomalies dans des lignées EpiSC dérivées de
plusieurs types d’embryons clonés.
Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
Le stagiaire apprendra à dériver de nouvelles lignées de cellules EpiSC. Pour cela il faudra
disséquer des embryons de souris juste après l’implantation et à mettre en culture l’épiblaste.
Les lignées seront caractérisées par immuno-marquage et RT-PCR.
Pendant le stage nous essaierons de répondre à 2 questions :
1- Y a t-il un biais d’expression des deux allèles des gènes différentiellement exprimés, selon leur
origine paternel/maternel ? Un biais d’expression entre allèles maternel et paternel sera déterminé
grâce à la présence de SNP par RT-PCR et pyroséquençage.
2- Etude de la méthylation par pyroséquençage de séquences choisies dans les gènes
différentiellement exprimés.
Publications du Responsable de stage au cours des 5 dernières années :
Jouneau, A., Zhou, Q., Camus, A., Brochard, V., Maulny, L., Collignon, J., and Renard, J. P. (2006).
Developmental abnormalities of NT mouse embryos appear early after implantation. Development 133,
1597-607.
Zhao, C., Yao, R., Hao, J., Ding, C., Fan, Y., Dai, X., Li, W., Hai, T., Liu, Z., Yu, Y., Wang, Y., Hou,
X., Ji, W., Zhou, Q., Jouneau, A., Zeng, F., Wang, L. (2007). Establishment of customized mouse stem
cell lines by sequential nuclear transfer. Cell Res. 17, 80-7.
Yu, Y., Ding C., Wang, E., Chen, X., Li, X., Zhao, C., Fan, Y., Wang, L., Beaujean N., Zhou, Q. ,
Jouneau, A., Ji W. (2007) Piezo-assisted nuclear transfer affects cloning efficiency and may cause
apoptosis. Reproduction 133, 947-54.
Renard J.-P., Maruotti J., Jouneau A., Vignon X. (2007). Nuclear reprogramming and pluripotency
of embryonic cells: Application to the isolation of embryonic stem cells in farm animals.
Theriogenology, 68S, S196-S205.
Rielland M., Hue I., Renard J.P., Jouneau A. (2008). Trophoblast stem cell derivation, crossspecies comparison and use of nuclear transfer: new tools to study trophoblast growth and
differentiation. Developmental Biology, 322, p1-10
Rielland Maite, Brochard Vincent, Nguyen Huu Duc, Maulny Linda, Lacroix Marie-Christine, Renard
Jean-Paul, and Jouneau Alice. Placentomegaly in NT embryos originates from early alteration of the
self-renewal/differentiation threshold in trophoblast stem cells. Soumis à Developmental Biology
Autres informations
Etudiants actuellement en thèse ou en M2 dans l’équipe d’accueil. Pour chaque étudiant indiquez
le nom du responsable de thèse, l’année du début de la thèse et l’Ecole Doctorale de rattachement
-
Julien Maruotti, Responsable Alice Jouneau/Jean-Paul Renard, ED Abies, 2006-2009 (dec)
Daulat Khan, Responsable Véronique Duranthon/ Jean-Paul Renard, ED Signalisations et
Réseaux Intégratifs en Biologie, 2007-2010
Etudiants ayant préparé ou soutenu leur thèse ou leur M2 dans l’équipe d’accueil au cours des
cinq dernières années. Pour chaque étudiant indiquez le nom du responsable de l’étudiant, l’année
du début de la thèse et de fin de la thèse, l’Ecole Doctorale de rattachement et le devenir de l’étudiant.
M2 :
Juin 2008 : Céline Bruno (médecin), Responsable Véronique Duranthon, M2 Biologie Cellulaire
Physiologie et Pathologie. Spécialité Reproduction et Développement.
Thèses :
- 2006 : Lin Chi Bui, Responsable Véronique Duranthon/ Jean-Paul Renard, ED Logique du Vivant,
actuellement en post-doc à Paris Université ParisV
- Mars 2009 : Roger Leandri, Responsable Véronique Duranthon/ Jean-Paul Renard, ED
Signalisations et Réseaux Intégratifs en Biologie, actuellement MCU-PH au Laboratoire de Biologie
de la Reproduction, Hôpital Paule de Viguier, Toulouse.
- Juill 2009 : Maité Rielland, Responsable Alice Jouneau/Jean-Paul Renard, ED GGC, 2005-2009
- Sept 2009 : Beatrice de Montera, Responsable Jean-Paul Renard, ED GGC, 2004-2009
Cette proposition de stage s’adresse-t-elle spécifiquement à un étudiant scientifique, médecin
ou vétérinaire ou bien est-il ouvert à tous les profils ?
Ouvert à tous les profils
Ce sujet peut-il donner lieu à une thèse ?
Oui, il est même plutôt destiné à un étudiant désireux a priori de continuer en thèse